供体牛采卵后不同清宫处理方法的效果分析

本文选用采卵后鉴定为子宫炎的供体母牛,用土霉素、土霉素和前列腺素(PG)、清宫液3种治疗方案对子宫炎供体牛进行了治疗.对采卵的处理情况和后续的子宫卵巢机能恢复后再配种受胎情况,冲胚时间至治疗后第1次发情时间,冲胚时间至受胎时间进行了临床效果观察.结果表明:土霉素和PG组与土霉素组、清宫液组差异显著(P＜0.05).土霉素和PG组与土霉素组、清宫液组相比,子宫炎供体牛治疗后出现首次发情和冲胚至受胎时间明显缩短,首次出现发情分别平均缩短1.56 d、3.27 d,冲胚至受胎时间分别平均缩短10.25 d、12.39 d.     

山羊冻胚分割试验

将冷冻-解冻后的琼脂包被孵出胚泡分两组,分别置于12％蔗糖液(A)和磷酸缓冲液(B)中进行2分切割。在体外培养12小时后,A、B两组的半胚发育率分别为68.9％(31/45)和58.3％(35/60)。A组的冻胚分割效果显著好于B组(P<0.05)。将早期囊胚、扩张囊胚、孵出胚泡和琼脂包被孵出胚泡冷冻-解冻后,在12％蔗糖液中分割为2(A、B、C、D组)。在体外培养12～24小时后,A、B、C、D4组的半胚发育率分别为47％(14/30)、 50％(15/30)、27％(8/30)和70％(21/30)。D组的冻胚分割效果显著好于A、B两组(P<0.05)极显著地好于C组(P<0.01)。将5枚在冷冻前用琼脂包被的孵出胚泡在12％蔗糖液中分割为二后移植于5只受体,结果有4只妊娠,共产半胚羔6只,其中2对为同卵双生。本研究证明,在蔗糖液中分割冻胚可提高半胚体外成活率;分割从琼脂释放出的解冻孵出胚泡可提高山羊冻胚分割的效果。     

奶牛胚胎移植黄牛应用技术研究

超排处理黑白花奶牛58头,有效47头,头均获卵7.2±5.2枚(340/47),可移胚4.7±4.3枚(220/47)。两种超排方法比较试验,低剂量预处理超排组头均获卵8.2±5.3枚(164/20),可移胚5.2±4.3枚(103/20),高于常规超排组头均获卵数6.5±5.1枚(176/27),可移胚数4.3±4.3枚(117/27)。鲜胚移植农户饲养的黄牛受体,其受胎率为44.6％(41/92)。     

供体细胞种类及性别对猪体细胞核移植效果的影响

本研究通过比较胎儿成纤维细胞、颗粒细胞、卵丘细胞和不同性别猪胎儿成纤维细胞的核移植效果,探讨供体细胞的种类及性别对猪体细胞核移植重构胚胎发育潜力的影响。结果表明:胎儿成纤维细胞的融合率(64.74%)高于颗粒细胞的融合率(51.05%)和卵丘细胞的融合率(56.89%),但3种细胞的卵裂率及囊胚率差异不显著(P>0.05);胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和卵丘细胞均可作为供体细胞用于构建猪体细胞核移植的重构胚。雄性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的融合率和分裂率与雌性胎儿成纤维细胞重构胚的融合率和分裂率相比差异不显著(P>0.05),但雄性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的囊胚率显著低于雌性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的囊胚率(P<0.05)。     

奶牛新鲜和冷冻胚胎分割移植试验

用简单方法,分割7～8日龄新鲜牛胚胎(1分为2),裸半胚成对移植给66头受体,90天妊检,移植妊娠率为56.1％(37/66)。除6头流产和尚有5头待产外,已有26头受体产犊35头,其中有9对同卵双胎,双胎率为34.6％(9/26),半胚产犊率为29.2％(35/120)。对影响成对半胚移植妊娠率和半胚产犊率的诸多因素如胚胎质量,胚胎在体外停留时间、胚胎发育阶段、受体牛品种、黄体状况等进行了较系统的研究。同时对冷冻胚胎进行了分割试验,移植妊娠率为45.5％(5/11),已产3头犊牛。对快速冷冻和常规冷冻胚胎分割后的移植妊娠率进行了比较,分别为25.0％(1/4)和57.4％(4/7)。     

奶牛胚胎分割试验研究

简单分割7～8天奶牛胚胎59枚(117个半胚)。裸半胚成对移给59头奶牛或黄牛,80～90天有27头(45.8％)妊娠。最后24头受体产犊34头,半胚产犊率29.1％(34/117)。有10对双胎,双胎率41.7％(10/24)。比较在不同情况下—7天或8天;晚桑椹或囊胚期;透明带软化处理或不软化处理—分割的半胚,成对移植后受体妊娠率分别是40.0％和57.9％;35.7％和54.8％;48.6％和41.7％。半胚产犊率分别是26.6％和34.2％;23.6％和33.9％;30.0％和27.7％。均无显著差异(P>0.05)。分割优质胚胎得到最好的(35.7％)半胚产犊率。半胚在体外5小时内移植有较高(30.5％)的产犊率。试验探索了奶牛半胚移给远处分散的农户黄牛的可能性。11对奶牛半胚移给11头黄牛有6头(54.5％)妊娠。最后5头受体产下7头奶牛犊,两对同卵双胎。     

山羊胚胎分割及同卵双生试验

选择山羊晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡,用简化分割法二分。将19对裸半胚移植于18只受体羊,结果有12只妊娠,其中两只胚胎消失,两只流产,其余8只足月分娩,共产半胚羔11只。晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡各组的半胚发育为羔羊的发育率分别为12.5％(1/8)、20％(2/10)、25％(3/12)和62.5％(5/8)。前三组均未获得同卵双生羔羊。在第四组,将4对裸半胚移植于4只受体,有3只妊娠,足月分娩半胚羔5只,其中两对为同卵双生。本研究证明,对称分割山羊孵出增大胚泡,不仅其半胚在体内仍可继续发育形成正常胎儿,而且不装透明带移植其裸半胚,仍能获得较高的同卵双生率。山羊孵出增大胚泡更适宜用简化分割法分割。     

自制冲卵液进行家兔胚胎移植的效果

目前,国内在进行家畜胚胎移植时普遍采用进口的 PBS 和 TCM—199作为冲卵和胚胎保存、培养液,药品来源困难,配制手序繁锁,价格昂贵,不利于在生产中推广应用。为此,我们进行了自制冲卵液来代替进口药品的试验:现将结果报告如下:     

不同胚胎类型对绵羊胚胎移植效果的影响

为了进一步提高并稳定绵羊胚胎移植的效率,本文对影响绵羊胚胎移植效果的胚胎因素进行了分析。结果表明:三种类型胚胎的移植妊娠率,分别为鲜胚组59.46%、自制冻胚组21.43%、进口冻胚组35.48%,鲜胚组与两冻胚组妊娠率差异均显著(P0.05),两冻胚组差异不显著(P0.05)。在绵羊胚胎移植中,原核胚的移植效果远远低于囊胚移植效果。     

影响绵羊超排效果相关因素的研究报告

本试验在绵羊的繁殖季节9～11月份进行,试验各组供、受体同期发情及超数排卵的处理方法基本相同,均埋植阴道栓(自制海绵阴道栓或CIDR)13d,供体发情后采用本交和人工授精相结合的方式进行配种。供体发情开始后的第6d(发情当天记为第0d)进行手术法子宫角冲卵,冲出的胚胎在1h内移植入受体体内。     

国内外牛胚胎移植技术新进展

牛鲜胚移植程序主要包括:供受体牛的选择准备,供体牛的超数排卵,受体牛的同期发情,冲卵,检卵及胚胎的移植。胚胎冷冻、体外受精、胚胎分割及胚胎性别鉴定等项新技术是牛鲜胚移植的深化与发展,是生物工程的基本手段。     

超排方案及冲胚方法对超排效果的影响试验

采用捷克、澳大利亚及国产促卵泡素（FSH）进行牛的超数排卵试验,对牛的处理采用FSH＋PG和FSH＋CIDR两种方式。结果表明：三种FSH来源获可用胚数分别为：5．43、5．33和4．80个,差异不显著（P〉0．05）;2次PG处理与CIDR处理供体牛所获得的回收卵数和可用胚数差异不显著（P〉0．05）;冲胚操作时采用不需硬膜外腔麻醉的注射式冲胚与传统需麻醉的滴注式冲胚比较。回收率分别为102％和98％,差异不显著;经产牛和育成牛超排效果比较,可用胚数分别为5．27和5．17个,无明显差异（P〉0．05）。     

牛体外受精胚胎培养技术研究

在COCs体外培养过程中添加共培养物质和采用不同体积的液滴进行培养,以探讨牛卵母细胞的体外培养效果。结果表明,卵丘细胞、卵丘细胞+bFF共培养系统对胚胎发育均有促进作用,其中以卵丘细胞+bFF共培养系统对桑椹胚和囊胚的发育最好,其囊胚率为10.63%,显著高于对照组的7.23%(P<0.05),高于卵丘细胞组的8.50%(P>0.05)。用培养皿微滴培养(50μL)和用4孔板大体积培养(500μL)的试验表明,大体积培养比微滴培养有优势,桑椹胚和囊胚率均较高,其中囊胚率为10.23%,显著高于培养皿微滴培养的9.07%(P<0.01)。     

非手术采集和移植骡胚的研究

选择已经配种的供体母马18匹,非手术冲洗子宫20次,其中排卵后4～5天的母马,冲洗5次,冲洗液平均回收率为94.80％,但未采到卵;排卵后5(1/2)～7(1/2)天的,冲洗15次,冲洗液平均回收率为85.66％,采到受精卵(骡胚)14个,采卵率为93.00％。结果表明,在排卵5(1/2)天之前,用非手术子宫采卵法未采到母马受精卵,而排卵5(1/2)天之后,非手术子宫采集马受精卵是有把握的。此外,另选没有配种而确切排卵的母马12匹,于排卵后5(1/2)～9天,回收马的未受精卵,虽冲洗液的平均回收率为89.30％,但也未采到未受精卵。显然,未受精的马卵没有进入子宫角,仍停留在输卵管中。经非手术采卵和二次重复采卵的母马都能按期发情,正常排卵。将14个骡胚中的7个以非手术法移植给7匹受体母马,结果一匹妊娠,妊娠率为14％。妊娠的受体母马生下一匹母骡驹,借腹怀胎350天。排卵同步差为-1(1/2)天。     

猪胚胎移植技术的研究概况

虽然胚胎移植早在1890年首次用家兔试验获得成功,但至本世纪30年代以后才开始用兔、大白鼠、小白鼠进行更多的试验。家畜的胚眙移植最早成功的试验,是1934年首次在绵羊、山羊获得成功;1951年牛、猪的胚胎移植成功的事例相继也有报道。60年代以来,对家畜胚胎的冲取、保存、移植等技术环节进行了大量的试验研究工作,取得了很大的进展。到70年代以后,胚胎移植技术已发展到畜牧生产实践应用阶段。特别是牛的胚胎移植发展更快。猪产仔多、繁殖率高,用胚胎移植的方法从少数优良性状的个体获得较多后代的要求不     

胚胎移植试验羊群发情规律的研究

为了有效提高绵羊体细胞克隆和转基因等研究工作的效率,缩短胚胎移植试验羊群中空怀个体的利用周期间隔,试验对采用不同移植方法的胚胎移植受体及供体绵羊进行了移植前后的发情规律研究。结果表明:采用自制孕激素海绵栓和进口阴道孕激素释放装置(CIDR)对绵羊进行同期发情处理时发情率均接近90%,且92%以上的个体发情起始时间均集中在撤栓后24～48 h。在胚胎移植试验结束后,未参加胚胎移植个体和子宫角法未移植受体第2情期发情起始时间主要集中在上次发情后的14～20 d,而输卵管法未移植受体和输卵管法冲卵供体的发情时间则比较分散,呈现明显延后状态。未参加胚胎移植个体和子宫角法未移植受体人工授精后的受胎率接近往年羊场的平均水平,输卵管法未移植受体的受胎率略有下降,且输卵管法冲卵供体的受胎率明显降低。     

绵羊受精卵(胚胎)移植研究报告——垂体促性腺激素(FSH、LH)促黄体释放激素(LRH)类似物对绵羊超数排卵和受精卵移植试验的研究

应用FSH400单位/LH200单位和FSH400单位/LRH类似物50微克,诱发老龄新疆细毛母羊超数排卵,在发情开始后65～80小时采卵,前者41只(包括茨盖羊3只)平均取得受精卵9.8±7.6个,卵子受精率70.09％,后者28只(包括茨盖羊4只)平均取得受精卵8.2±4.6个,卵子受精率68.15％。二者所得受精卵的移植产羔率无明显差异(X~2=1.16 P>0.05)。 32只试验供体于75～80小时采卵,平均取得受精卵10.31±6.7,卵子受精率77.66％,8～16细胞卵占受精卵总数的81.52％。 LRH类似物,应用于绵羊的超数排卵,具有效果稳定,使用方便,价格低廉的特点,更宜在生产上应用。据对移植受体产羔的分析,注意到: 1、当超排卵达到25个左右时(20例),对卵子受精率及其移植产羔率仍无明显影响。 2、16细胞卵单卵移植的产羔率69.44％(25/36),2细胞卵单卵移植的产羔率35.0％(14/40)。分裂阶段较高的受精卵,产羔率相应较高。 3、双卵移植的产羔率48.15％(26/54),单卵移植的产羔率46.34％(209/451)但双卵移植的受精卵存活率低达27.77％(30/108)。 4、双卵移植时的双羔率,似与受体品种本身的双羔率有关。     

利用体内外成熟卵母细胞生产转TLR4基因抗病克隆绵羊的研究

研究旨在提高羊的抗病性能、生产培育高抗病力的转基因羊。本实验分别利用绵羊超数排卵获得的体内卵母细胞和体外成熟培养的卵母细胞作为核受体进行转基因克隆羊的生产。体内超排共获卵2 431枚,其中可用卵77.29%(1 879/2 431);体外成熟培养共获卵3 292枚,其中可用卵70.90%(2 334/3 292)。体内外核移植实验分别获得体内重构胚1 879枚、体外重构胚1 786枚。结果表明:体内核移植重构胚融合率(81.12%)显著性高于体外核移植重构胚(68.88%)(P<0.05);将部分体内、外重构胚以手术法分别移植于89只及72只受体,体内重构胚移植妊娠率为10.11%,显著高于体外重构胚移植妊娠率(2.78%)。体内、外重构胚移植后各产羔1只,PCR检测均为转TLR4阳性。本实验初步建立了一套较有效的体内外核移植生产转基因克隆羊的方法,并比较了不同来源卵母细胞对核移植效率的影响,发现体内超数排卵所获取的成熟卵母细胞数量、质量均优于体外成熟培养获卵。     

波尔山羊胚胎移植技术研究初报

为了提高波尔山羊群体繁殖力,应用ＦＳＨ 对４０ 只波尔山羊进行超数排卵处理,共采卵４６０个,获得胚胎２７８ 个,可用胚２４８ 个,平均６－２ ±７－１２个／只,可用胚占胚胎总数的８９－２１％ 。移值受体１２９ 只,移植双胚受体占９２－２５ ％ ,移植单胚受体占７－７５％ 。     

细毛羊胚胎冷冻移植研究

本研究于1992～1994年用FSH、LH、PMSG等激素及手术采卵,胚胎移植方法对56只中国美利奴母羊进行超数采卵。有效供体羊52只,有效率92.8％(52/56);共采卵422枚,只平均为8.12枚(422/52);可用胚胎数366枚,平均只可用胚7.04枚。采用三步甘油浓度按编制程序冷冻保存(-196℃),30天后,37℃水浴解冻,无鉴定分级,移植受体羊193只,冻胚移植受胎率37.31％(73/193),双胎率47.22％(34/72)。初生体重,公羔平均4.84kg,母羔平均4.91kg。