转基因克隆技术与猪的遗传育种

动物克隆技术的研究现状及其发展趋势１、克隆动物研究背景“克隆”在生物学上有多个概念,但其基本含义系指一个细胞或个体以无性繁殖方式产生的一群细胞或一群个体,在不发生突变的情况下,克隆出的细胞或个体具有完全相同的遗传性状,常称“无性繁殖系”（细胞系）。因...     

动物体细胞克隆机理的几个关键问题

克隆即clone的音译,来源于希腊文,表示用离体的细枝或小树枝增殖。动物克隆即动物的无性繁殖,就是将供体细胞核移人去核的卵母细胞中,使后者不经精子穿透等有性过程即可被激活、分裂并发育成个体,使得核供体的基因得到完全复制,也称为动物体细胞克隆。1997年2月,英国罗斯林研究所的Wilmut等人利用绵羊乳腺细胞进行核移植试验,获得了世界上第一头体细胞克隆绵羊-多利(Dolly),这一成果开创了哺乳动物核移植的新的里程碑。1998年,美国夏威夷大学等率先在小鼠上进行了成年体细胞的克隆。1998年,(Science)杂志报道了美国科学家用培养的携带外源基因的胎牛成纤维细胞作为供核获得4头转基因克隆牛。     

浅析动物克隆技术

本文就动物克隆技术的研究现状、应用前景、存在问题及潜在危害进行了浅析,为正在进行和将要加入克隆研究和应用的人提供一定参考。1克隆的概念克隆(clone)来源于希腊文,表示用离体的细枝或小树枝增殖,后将其引入园艺学,指由一个单细胞或共同的祖先经有丝分裂产生出的细胞或生物体所构成的一个群体,其繁殖是无性的。以后逐渐将克隆的概念应用于植物学、动物学和医学等方面,并形成了比较一致的定义:克隆是指由一个细胞或个体以无性方式重复分裂或繁殖所形成的一群个体。克隆动物即动物的无性繁殖,就是将供体细胞核移入去核的卵母细胞中,使后…     

动物克隆与克隆技术

自从克隆羊“多莉”诞生之后，克隆一词便成为了传媒追逐的热点，那么究竟什么是克隆呢?克隆一词源于英“Clone”的中译音，意为无性繁殖，即通过非有性的过程复制个体，不通过性细胞结合而繁殖的过程。植物的克隆现象很常见，植物块茎的自然繁殖、扦插、压条和嫁接都属于无性繁殖，均属于植物的克隆行为。动物克隆则不同，     

FSH 、LH对猪卵母细胞核成熟及体外成熟时间对去核效率的影响

克隆动物(核移植)的原理就是将卵裂球或体细胞核移人去核的卵母细胞或受精卵中,采用各种激活方法使之激活,发生卵裂,移植受体后产生个体。猪的体细胞克隆效率与其他动物(牛、羊)相比较低,需     

动物转基因及克隆技术研究进展（下）

上接09年第1期《新技术产品》美国夏威夷大学Wakayama博士对体细胞克隆方法进行了改进，将供体细胞的核完整地取出，再注射到去核的卵子中，然后用一种化学物质锶来激活重建胚的分裂和生长。他用这种方法获得50多只克隆鼠，并且是继代克隆，克隆效率达到2％，克隆效率提高了许多倍。1998年2月，法国农业研究中心的科学家利用胎儿肌肉细胞为核供体，克隆出一头小母牛，     

畜牧科技新动态

据科技日报报道,中国无性繁殖黑白花牛获得成功.1996年2月14日,由中国农科院畜牧研究所朱裕鼎研究员,蒋世娥副研究员等人主持研究成功地利用哺乳动物核移植,也称哺乳动物无性繁殖(克隆)技术,生产出一头出生重52.2公斤的黑白花公牛犊.该项动物细胞工程技术可以不经过有性繁殖过程,将分离的胚胎卵裂球(核供体)与成熟并去核的卵母细胞(核受体)融合,连续不断地复制遗传上相同的胚胎并通过移植,而生产大量同基因型的克隆动物.采     

猪克隆胚早期发育过程中供体线粒体的动态变化及胞吐样排出对其清除的影响

为观察猪克隆胚早期发育过程中供体线粒体的动态变化,并初步探究2细胞时期卵裂球间胞质排出对供体线粒体清除的特异性,以孤雌胚为对照,并使用预先标记线粒体的供核体细胞生产克隆胚。分别收集特定时期的胚胎进行共聚焦显微镜以及透射电镜的观察。结果显示:电击活后0~4 h,供体线粒体逐渐从核周扩散到胞质中。与孤雌胚相比,4 h克隆胚中的线粒体具有更多异常的形态。在2细胞(28 h)以及4细胞(52 h)阶段,根据在各个卵裂球中存在的数量,我们分别观察到3种供体线粒体的分布形式。其中在2细胞阶段,以三种形式存在供体线粒体的胚胎的比例分别为51.22%(All)、26.83%(Half)以及21.95%(No)。而在克隆囊胚中,仍可观察到少量红色荧光。此外,在多数2细胞克隆胚(87.93%)卵裂球间有胞质排出,并且在部分胚胎排出的胞质中可以观察到供体线粒体的存在。5μg/mL细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)的添加没有明显改变携带供体线粒体的2细胞克隆胚的比例。同时2细胞孤雌胚中也存在相似的胞质排出现象,并且排出区域也可以观察到母源线粒体的存在。结果提示:供体线粒体在2细胞以及4细胞克隆胚中存在不均等分布、并于部分2细胞克隆胚两个卵裂球间随胞质排出的现象,而这种排出对于克隆胚中供体线粒体的清除不具有特异性。     

供体细胞对哺乳动物体细胞核移植的影响

哺乳动物体细胞核移植技术(克隆)在农业、生物技术、医药生产和濒危动物保护等方面具有很大的潜力和应用价值,已成为目前发育生物学研究的重要方法.文章依据近年来国内外在动物克隆技术方面的资料,分析了供体细胞类型、供体细胞动物年龄、供体细胞所处细胞周期、体外传代次数以及供体动物性别等因素对克隆动物效率的影响及可能原因.     

家畜胚胎细胞核移植研究进展

引言细胞核移植技术(nuclear transplantation)就是将成熟卵母细胞的核除去后移入其他细胞核,使卵母细胞不经过精子穿透等有性过程就可被激活、正常分裂并发育成新的个体。所以,核移植技术可使细胞核供体(nu-     

骨髓间充质干细胞为核供体的克隆绵羊的生产与鉴定

本研究旨在采用骨髓间充质干细胞（BMSCs）为核供体进行体细胞核移植,以获得成体干细胞克隆绵羊。选择幼体绵羊BMSCs为核供体,构建重构胚进行克隆胚胎移植,克隆绵羊诞生后,选取IASG上公布的绵羊10个微卫星标记位点,PCR扩增克隆羊、供体细胞及代孕母羊微卫星DNA,利用Quantity One软件进行基因分型,计算供体细胞与克隆羊之间的父子关系相对机会（RCP）值。结果显示,以幼体绵羊BMSCs为核供体,与去核成熟卵母细胞进行核移植,构建重构胚进行电融合,其融合率达80.62%,重构胚发育至桑椹胚阶段,经手术植入20只代孕母羊,获得克隆绵羊5只,成活3只。克隆羊基因型与供体细胞一致,供体细胞与克隆羊之间的RCP≥99.999%,证明克隆羊来自幼体绵羊BMSCs。本试验最终成功获得了首例以BMSCs为核供体的克隆绵羊。     

哺乳动物体细胞克隆后生重新编程有关机理研究进展

自第1例体细胞克隆动物“多莉”诞生以来，已有十几种克隆动物出生，克隆动物的数量也快速增长，但动物克隆主要存在的问题如效率低，流产率和出生前死亡率高等生理异常目前还无法解决。因此，动物克隆有关机理的研究已经成为各国学者研究的热点。作者主要对此领域研究的重点，即与克隆动物核后生重新编程有关的机理，如受体胞质与供体核的相互作用、基因组DNA甲基化变化和发育相关基因的表达变化等作以综述。     

哺乳动物体细胞克隆技术研究进展

哺乳动物体细胞克隆技术又称哺乳动物体细胞核移植技术或无性繁殖技术，它是通过特殊的人工手段（显微操作、电融合等），对哺乳动物特定发育阶段的核供体（体细胞核）及相应的核受体（去核的原核胚或成熟的卵母细胞），不经过有性繁殖过程，进行体外重构，并通过重构胚的胚胎移植，从而达到扩繁同基因型哺乳动物种群的目的。目前，用核移植技术已生产出了几种体细胞克隆哺乳动物。体细胞动物在畜牧业实际生产中，哺乳动物体细胞克隆技术的成功使快速、大量生产优良种畜成为可能。在医学上，体细胞克隆技术为生产成年个体的胚胎干细胞、复制…     

不同体细胞类型和基因转染方式对绵羊克隆胚胎体外发育的影响

首先获得绵羊胎儿成纤维细胞、成年耳组织成纤维细胞及前脂肪细胞,用脂质体介导法、BTX电转法及Nucleofector核转法对上述细胞系转染绿色荧光蛋白(gfp)基因,并对转染效率进行比较,最后探讨3种转gfp基因细胞对绵羊转基克隆胚发育的影响。结果:核转法的转基因效率最高,3种细胞的转基因效率分别为86%,87%和90%,显著高于BTX电转法和脂质体法基因转染效率;脂质体转染效率显著低于BTX电转效率(P<0.05)。而对同一种转染方法而言,基因转染效率在3种细胞间差异均不显著(P>0.05)。在以上述3种转基因细胞为核供体的转基因克隆试验中,胚胎融合率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05),胎儿成纤维细胞组的囊胚率显著高于前脂肪细胞组(P<0.05),但耳组织成纤维细胞组与胎儿成纤维细胞、前脂肪细胞间差异均不显著(P>0.05)。结果表明核转法基因转染效率最高,胎儿成纤维细胞最适合于胚胎克隆研究。     

不同来源的山羊供核细胞对核移植重构胚发育的影响

以山羊的胚胎细胞、卵丘细胞、体细胞克隆胚胎细胞为核供体,比较了以这3种细胞为核供体得到的重构胚的体外发育能力.结果显示,以体内受精所得桑椹胚为核供体的重构胚发育能力最高,卵裂率和囊胚率分别为81.25%和25.64%以卵丘细胞为核供体的重构胚发育能力次之(79.68%,21.57%),再克隆胚胎发育能力最低(64%,12.5%),但是各组间差异不显著(P>0.05).     

克隆种公猪生长状况和繁殖性能评价

体细胞核移植技术可以成功用于克隆性能优良的种用家畜,理论上克隆个体与供体在遗传上是完全相同的。为验证该理论,本试验检测了克隆种公猪自身在出生后的生长发育指标以及克隆种公猪与供核种公猪精液品质各项指标、情期受孕率、窝产仔数、产活仔数、断奶活仔数、仔猪初生重、仔猪断奶重和平均日增重等指标,探讨了克隆种公猪与供核种公猪在繁殖性能以及遗传性能之间的关系。结果显示,克隆种公猪与供核种公猪在各检测指标之间均不存在显著差异(P>0.05),提示克隆种公猪与供核种公猪在繁殖性能和遗传性能上无显著差异,可以作为种公猪用于扩繁。     

动物克隆技术研究的历史、现状与展望

动物克隆技术对于优良种畜的复制、减少实验用动物数目、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培育以及人类疾病的治疗都具有重要的意义。尽管早在1938年HansSpemann就已提出了胚胎细胞核移植的设想,但直到20世纪50和60年代才在两栖类和鱼类获得成功。而哺乳动物的胚胎细胞核移植起步更晚,直到20世纪80年代才开始有成功的报道。自1997年Wilmut等人培育出体细胞克隆绵羊Dolly以来,哺乳动物克隆技术有了迅速发展;先后获得了体细胞克隆小鼠、牛、山羊、猪、猫和兔,供核细胞的种类也在不断拓宽。然而,目前体细胞克隆的成功率还很低,一般只有1%～3%。一般认为,造成克隆成功率低的原因主要是供体核后成性基因程序再编不当。尽管最近的实验证明,端粒长度和X-染色体灭活等程序再编正常,但于配子发生期间形成的后成性信息(如配子基因印迹)在核移植之后并不能恢复。     

动物克隆技术

动物克隆技术,即动物核移植技术,是通过显微操作,电融合等实验手段,将发育到一定阶段的核供体(胚胎细胞或体细胞)的细胞核取出,注入相应发育阶段的去核的原核胚或成熟卵母细胞中,再将重构胚的胚胎移植,到相应生理状态的动物体内,达到大量生产遗传同质动物的一种生物工程技术。1动物克隆技术的应用克隆技术对畜牧业的发展将产生重大影响。利用动物克隆技术,可缩短育种年限。据报道,自1987年牛胚胎细胞移植成功,牛克隆胚胎的重复克隆已达6个世代,并获得第三代克隆牛,由一枚胚胎反复克隆已得到近200枚克隆胚胎,母牛繁殖后代数可以呈几何基数增…     

动物的胚胎移植及其在畜牧生产中的应用

胚胎移植(embryotransfer,ET)是指从一头(只)雌性动物的生殖道(输卵管或子宫)内取出早期胚胎,或者是通过体外受精、胚胎分割、克隆等方法获得胚胎,然后把这些胚胎移植到另外一些雌性动物生殖道的相应部位,使其着床、发育,最后产下后代。即俗称的“借腹怀胎”。在胚胎移植中,把提供胚胎的动物称为供体(donor),接受胚胎移植的则称为受体(recipient)。一般而言,供体为优良品种或优秀个体,或者是特定的畜种或个体,而受体为生产性能较差的品种或个体,以达到“借一般动物之腹怀优良品种或优秀个体之胎”的目的,从而增加良种后代的数量,迅速提高畜…     

体细胞克隆中核的重编程

尽管体细胞克隆在绵羊、牛、小鼠、猪、山羊、兔、猫、大鼠和骡子等物种中都获得了成功，但却未能得到狗和猕猴的克隆个体，而且克隆效率非常低，克隆效率低使体细胞克隆技术在科研和生物技术等方面的应用受到限制．供体核移入去核的卵细胞后，必须经过表观遗传修饰的重编程，回到胚胎开始发育的全能状态。目前认为：供体核的不完全重编程是导致克隆效率低的主要原因。本文从DNA甲基化、组蛋白乙酰化、X染色体失活、端粒、印记基因以及其他发育相关基因的表达几个方面来探讨影响克隆效率的因素。