一株肠炎沙门氏菌鞭毛基因FliC的克隆及生物信息学分析

本研究旨在对肠炎沙门氏菌（Salmonella Enteritidis）鞭毛蛋白FliC基因进行克隆,并对所获序列进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中肠炎沙门氏菌FliC基因序列设计1对引物,利用PCR克隆获得FliC基因,将其插入到克隆载体中进行测序,应用生物信息学软件分析该基因的核苷酸和氨基酸序列,利用BLAST进行同源性比对,并构建系统进化树,同时对该基因编码蛋白的理化性质、亲水性、信号肽、跨膜结构域、糖基化位点和B细胞抗原表位、二级结构、三级结构等进行分析。结果显示,试验成功克隆了1 518 bp的目的基因,编码505个氨基酸。同源性比对发现,FliC基因相对保守,与大肠杆菌属有较高的同源性。该蛋白的化学分子式为C₂₂₅₄H₃₇₀₁N₆₅₇O₈₀₃S₄,理论分子质量为52.981 ku,理论等电点为4.91;不稳定指数为16.86,是稳定存在的亲水蛋白质。结构分析结果显示,该蛋白没有信号肽或跨膜结构域,但具有8个N-糖基化位点、13个O-糖基化位点和60个磷酸化位点,同时还含有26个B细胞线性结合位点和5个T细胞结合位点。二级结构分析显示,α-螺旋、β-转角、延伸链和无规卷曲分别占43.76%、3.76%、20.99%和31.49%。本试验成功克隆了肠炎沙门氏菌鞭毛基因FliC,并对其序列结构进行了分析,为进一步研究鞭毛在肠炎沙门致病过程中的作用及基因工程疫苗的研制提供理论依据。     

鸡肠炎沙门氏菌ompA基因的克隆与表达

根据GenBank中鸡肠炎沙门氏菌ompA基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌贵州分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌ompA基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-ompA,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞, 经IPTG诱导, 实现了鸡肠炎沙门氏菌ompA蛋白在大肠杆菌中的表达。SDS-PAGE分析结果表明, 该重组蛋白的分子质量约为55 ku,可溶性分析结果表明表达蛋白大部分以包涵体形式存在。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白具备免疫原性。     

肠炎沙门氏菌研究进展

肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)具有广泛寄主谱,可引起人与动物的胃肠炎,是重要的人畜共患病原体。主要对肠炎沙门氏菌的研究进展作一综述,以期为进一步研究该菌提供参考。     

肠炎沙门氏菌污染饲料对鸡蛋安全的影响

本研究选用160只60周龄白来航蛋鸡,随机分为4组,分别一次性采食30g添加了0、4.7×102、4.7×105、4.7×108cfu肠炎沙门氏菌(SE)的饲料,然后用特异性PCR法对试验鸡所产鸡蛋的不同部位进行SE检测,并观察记录生产性能。结果显示,对照组鸡蛋各部位均为阴性,试验组的蛋壳、壳膜、蛋黄、蛋白均能检测到SE,且随染菌量的增大,检出率增高。当摄入108cfu的SE时,会降低产蛋率,但对鸡蛋的表观性状没有显著影响,成为危害人类健康的潜在隐患。     

肠炎沙门氏菌SEF14菌毛亚单位sefA和sefD基因缺失株的致病性研究

为研究SEF14菌毛在肠炎沙门氏菌中的致病作用,本实验将SEF14菌毛亚单位编码基因缺失的肠炎沙门氏菌突变株50336△sefA和50336△sefD分别接种6周龄BALB/c小鼠和1日龄清远麻鸡,比较它们与其亲本菌株50336的致病性差异。结果显示,亲本菌株50336以及突变株50336△sefA、50336△sefD对小鼠的半数致死量分别为19.95 cfu、7.94 cfu和7.94 cfu,表明两个突变株对小鼠的致病性显著增强;而且对雏鸡的致病性结果也显示,突变株50336△sefA致病力较强,其感染雏鸡组死亡率为15%,而亲本菌株组死亡率为8.6%;另外50336△sefA和50336△sefD感染组7日龄时平均增重分别为15.38 g和18.39 g,亲本菌株组为19.06 g,对照组为26.43 g。研究结果表明SEF14菌毛亚单位基因缺失对肠炎沙门氏菌的致病性具有增强作用。     

大肠杆菌FliC基因敲除后对大肠杆菌生物膜形成的影响

利用无疤痕基因敲除方法,构建大肠杆菌FliC基因敲除突变株。基因重组PCR结果显示:在重组转化体中FliC基因完全被卡那抗性基因和CcdB替代,获得Ⅰ型突变株(△1FliC);同时利用基因突变技术,对FliC基因起始密码子进行点突变,将ATG突变为AAA,再次进行基因重组后获得Ⅱ型FliC基因沉默菌株(△2FliC)。利用96孔微量板法,分别对野毒株、△1FliC和△2FliC进行生物膜表型检测,结果显示:△1FliC和△2FliC生物膜形成能力明显低于野毒株,从而为临床上大肠杆菌病的预防及疫苗的研制提供一定的理论基础。     

鸡肠炎沙门氏菌ompA基因的克隆与B细胞表位预测

根据Gen Bank中的鸡肠炎沙门氏菌ompA基因序列,设计了1对引物,成功克隆出鸡肠炎沙门氏菌ompA基因,扩增产物大小为1053bp。采用DNA Star Protean程序,综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数,对鸡肠炎沙门氏菌ompA基因的氨基酸序列进行了B细胞表位预测,为进一步研究鸡肠炎沙门氏菌表位疫苗和分子诊断技术的建立奠定基础。     

肠炎沙门氏菌及其毒素灭活研究

用过滤除菌和超声波裂解的方法提取肠炎沙门氏菌内毒素和外毒素,分别接种番鸭、小白鼠、雏鸡,并用不同浓度的甲醛和不同温度进行细菌和毒素的灭活试验。结果表明,普通肉汤培养24h肠炎沙门氏菌产生内毒素,不产生外毒素。以菌悬液总量的0.1%加入甲醛作用48h或60℃作用120min,均可灭活肠炎沙门氏菌及其毒素。     

噬菌体对鸡肠炎沙门氏菌的防治研究

肠炎沙门氏菌是全球食源性疾病暴发的主要病原菌之一,可引起禽类发病死亡,造成巨大的经济损失.噬菌体是一种细菌病毒,具有严格的宿主特异性.在耐药菌日益增长、抗生素使用受限的情况下,可考虑将噬菌体作为消除病原体的替抗药物.因此,文章就噬菌体对肠炎沙门氏菌的防控及其应用前景展开综述,同时为其他耐药菌的治疗防控提供新的策略.     

肠炎沙门氏菌感染与宿主的关系

肠炎沙门氏菌病是一种重要的人畜共患病,其危害性备受关注.笔者就感染该菌与宿主关系进行了分析,旨在提高对该病的认识,以便减少该病的发生,保障人畜健康.     

肠炎沙门氏菌脂多糖的提取与制备

沙门氏菌菌体裂解后可释放内毒素 ,日本和我国学者普遍认为内毒素包含脂多糖和蛋白质两部分 ,而英美学者认为内毒素就是脂多糖 (L ipopolysac-charides LPS)。近来 ,国内外学者对肠炎沙门氏菌脂多糖进行研究 ,建立了快速的检测肠炎沙门氏菌的方法 ,显示了其它检测方法不可比拟的优越性 ,提取肠炎沙门氏菌脂多糖是其工作的第一步。1　材料和方法1 .1　试验材料1.1.1　肠炎沙门氏菌株　由扬州农业大学提供1.1.2　酚 (Pheonol)　天津市化学试剂厂出品　 AR1.1.3　细菌培养基　上海医学化验所试剂厂出品1.1.4　蒽酮　中国医药上海化学试剂公…     

肠炎沙门氏菌感染及其检测方法研究进展

该文主要介绍了宿主对肠炎沙门氏菌(SE)的防御能力、SE感染与宿主细胞的关系、SE在禽类中多呈隐性感染的原因分析,并对当前SE检测方法的研究进展作了一综述.     

柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染蛋和感染肠炎沙门氏菌敏感性的影响

为揭示球虫感染对蛋鸡的肠炎沙门氏菌敏感性及鸡蛋的肠炎沙门氏菌污染率的影响而进行了本研究。结果显示,柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染蛋及感染肠炎沙门氏菌的敏感性均具有增强作用。具体表现为：柔嫩艾美耳球虫感染可使肠炎沙门氏菌污染蛋壳显著增多（Ｐ＜０．０５）;球虫感染鸡所产蛋,无论是新鲜的还是贮存１周后的,其蛋内容物的肠炎沙门氏菌阳性率比仅感染肠炎沙门氏菌鸡所产蛋要高;球虫感染鸡盲肠中的沙门氏菌阳性率和沙门氏菌数显著增加（Ｐ＜０．０１）;球虫感染鸡输卵管中的肠炎沙门氏菌也有增多;球虫感染使泄殖腔拭子的肠炎沙门氏菌阳性率增加。研究结果表明,柔嫩艾美耳球虫感染可以增加鸡群中肠炎沙门氏菌的水平及其垂直传播的危险。     

番鸭感染肠炎沙门氏菌的分离鉴定

某番鸭养殖场鸭群发生一种高发病率、高死亡率的传染病 ,本试验从该场的病死鸭内脏中分离到 1株细菌 ,经鉴定为肠炎沙门氏菌。毒力试验和药敏试验表明细菌毒力很强 ,但对丁胺卡那霉素、氟甲砜霉素等敏感