不同获能方法对冻融塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同获能方法对塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,冻融塔里木马鹿精子随机分为4组,用钙离子载体、肝素、咖啡因和 Percool 离心4种方法进行精子获能的诱导,利用金霉素（CTC）染色法评价精子获能状态,采用 SDS-PAGE 分离精子膜蛋白,进行 Western blotting 免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平.结果显示,冻融精子经4种精子获能方法处理后,肝素诱发的精子获能率显著高于钙离子载体组和 Percool 组（P ＜0．05）.钙离子载体组、肝素组和咖啡因组精子蛋白酪氨酸磷酸化水平高于 Percool 组和对照组.另外,冻融精子随着上游处理及肝素诱导获能的进行,检测到分子量分别为14,25~30,40,47,55 ku 的酪氨酸磷酸化蛋白,这些蛋白的酪氨酸磷酸化水平在获能60~120 min 期间相对较高,而且此时精子获能率及超激活运动精子比例也显著提高（P ＜0．05）.结果提示,肝素可以较好的诱导马鹿精子获能,马鹿精子获能与蛋白酪氨酸磷酸化相关.     

低温和获能对猪精子细胞骨架微管蛋白和肌动蛋白表达量的影响

【目的】探究获能和低温冷冻对猪精子细胞骨架中微管蛋白和肌动蛋白表达量的影响。【方法】利用SDS-PAGE、Western blot技术,分析获能和低温冷冻(-80和-196℃)后猪精子总蛋白质种类以及猪精子细胞骨架微管蛋白和肌动蛋白表达量的变化。【结果】低温处理后,猪精子总蛋白质的种类与新鲜精子相比发生变化,而获能处理后几乎没有差异。低温冷冻导致猪精子细胞骨架微管蛋白和肌动蛋白的表达量较新鲜精子下降,且-196℃冷冻组肌动蛋白的表达量要略高于-80℃冷冻组,但二者微管蛋白的表达量基本没有差异。获能处理后猪精子肌动蛋白表达量略有下降,而微管蛋白表达量基本没有变化。【结论】低温冷冻处理对猪精子总蛋白质的种类以及猪精子细胞骨架微管蛋白和肌动蛋白的表达量有明显影响,而获能处理则影响较小。     

不同获能液对猪精子获能效果的初步观察

为了探讨不同获能液对猪精子获能效果的影响,以新鲜猪精液为材料,进行mTBM＋咖啡因、mTBM＋咖啡因＋BSA,mTBM＋肝素三种获能液获能效果的比较。利用金霉素荧光染色法对其获能效果进行检验。结果表明,mTBM＋肝素组诱发B型（获能）精子率极显著高于mTBM＋咖啡因组（P〈0.01）,显著高于mTBM＋咖啡因＋BSA组（P〈0.05）;三种获能液诱发的AR型（顶体反应）精子率差异不显著（P〉0.05）。说明,添加肝素更有助于提高猪精子获能效果。     

钙离子对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力影响

研究主要探究钙离子(Ca2+)对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力的作用。利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)检测、蛋白免疫印迹测定不同Ca2+浓度对精子活力指标及蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,并对精子样品的酪氨酸磷酸化蛋白的分布情况进行观察。结果显示,当Ca2+浓度≤1.0mmol/L时,精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平增高;然而,当Ca2+浓度≥3.0mmol/L时,则明显抑制精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平,尤其分子量约为27和34kDa的高丰度蛋白磷酸化程度明显降低(P0.05)。高浓度Ca2+(4.0mmol/L)明显抑制鞭毛处蛋白酪氨酸磷酸化。因此,细胞外钙离子对猪精子活力和蛋白磷酸化起到重要调节作用,低浓度Ca2+促进精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化,高浓度Ca2+(≥3.0mmol/L)抑制精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化。本研究初步明确了Ca2+浓度对猪精子蛋白磷酸化及精子活力的影响,为进一步研究精子获能提供参考。     

获能和冻融猪精子间细胞肌动蛋白表达的差异

【目的】分析获能与冻融猪精子细胞肌动蛋白表达的差异。【方法】提取获能和冻融的猪精子蛋白,经过SDS-PAGE分离后,进行Western-blot免疫印迹分析,检测获能与冻融猪精子间细胞肌动蛋白的区别。【结果】新鲜和冻融猪精子细胞肌动蛋白单体的分子质量均约为43ku,但获能猪精子细胞肌动蛋白单体的分子质量约为43和86ku。【结论】冻融的猪精子细胞肌动蛋白单体分子质量约为43ku,但数量有所下降;获能后的猪精子出现了一种新型肌动蛋白亚单位,其分子质量约为86ku。     

获能和冻融猪精子前顶体蛋白活化机制研究

利用SDS-PAGE和Western Blotting的方法,分析冻融和获能处理中猪精子前顶体蛋白的转化过程。结果表明,显示获能组精子荧光区域大于冻融组精子,而小于新鲜精子组;新鲜组精子出现大约45和35kDa分子量的条带,而冻融和获能组精子都同时出现大约45、35和28kDa分子量的条带。总之,冻融后顶体完整的精子和获能精子Proarosin都能正常活化成α-acrosin、β-acrosin和28kDa,这个途径可作为预测受精的指标。     

猪精子体外获能及异种穿卵的超微结构研究

 研究结果表明，猪精子头部长7.6微米，宽4.1微米。主要由核、顶体及顶体后区组成。顶体的内、外膜结构不同于质膜。颈部由中心粒和9条纵行分节的节柱组成。尾部全长49.4微米，其中，中段长11.4微米，线粒体较发达，约为52-55旋；主段中央是“9+2”的微管结构，其外方被9条致密纤维和纤维鞘包裹。体外获能前的猪精子群集成簇，运动缓慢。获能后运动方式发生变化，呈超激活运动特征。获能后的猪精子主要是以顶体外膜囊泡化的形式发生顶体反应。质膜是否参与囊泡化尚待进一步观察。顶体反应完成后，仅有顶体内膜包在精子核膜的外面。顶体内膜可与去透明带的金黄地鼠卵的细胞膜相融合，穿入卵内的精子核能在卵内去浓缩并发育成雄原核。本研究共分4批，对120枚金黄地鼠卵进行了观察，平均穿透率为84.8±10.2%。     

猪体外受精技术中生殖细胞体内外成熟及获能的比较

猪体内、外成熟卵子与体外获能精子进行受精，其卵裂率分别为４３．６％和１９．６％，两者差异极显著。体内获能精子与体外成熟卵子进行受精，其受精率和卵裂率分别为５５．０％和２２．５％，增高于体外获能精子组的水平，但差异都不显著，体内获能精子不能经受常规的精子冷冻程序。     

猪精子的体外获能与体外受精

通过5个实验研究了应用咖啡因，肝素和I－A23187促进猪精子体外获能的效果，比较了不同受精次数和不同种类的精液进行猪卵子体外受精的效果，试验表明，用肝素和咖啡因协同作用，猪精子体外获能的效果好，采用2－3次受精法进行体外受精可以提高受精率，使用新鲜精液，新鲜附睾精液或冷冻附睾精液进行体外受精，其效果差异不显著。     

金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因表达的影响

[目的]探究金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因的影响,为丰富猪精子冷冻保存技术的理论基础及后续开展蛋白酪氨酸激酶抑制剂对冻融猪精子获能影响研究提供参考依据.[方法]采集猪精液后,设精液冷冻对照组(CK组)、100.0 μmol/L金雀异黄酮冷冻处理组(G组)和鲜精组(F组),使用Western blo...     

重金属铬对体外培养猪精子活力及蛋白磷酸化水平的影响

为探究铬元素在猪精子体外获能培养过程中,对猪精子活力、蛋白磷酸化信号通路的影响,研究采取八头杜洛克猪新鲜精液,分别在体外获能培养液中添加不同浓度的6价铬离子(0、0.1、0.5、1、2、10、100μmol/mL)以及双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)、异丁基黄嘌呤(IBMX)、PKA抑制剂(H-89)等cAMP-PKAs信号通路调节因子进行调控培养2h。利用精子活力计算机检测(CASA)、蛋白质免疫印迹(WB)技术,分析测定猪精子体外铬暴露获能培养过程中精子活力、蛋白磷酸化水平,并用相应试剂盒检测细胞中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性、腺苷-3′,5′-环化一磷酸(cAMP)及ATP水平。结果表明:铬离子对猪精子活力、蛋白磷酸化水平有抑制作用,且随铬离子浓度增加抑制作用增强。当铬浓度达到2μmol/mL时精子活力MOT(58.4%)显著低于获能培养组(73.6%)(P0.05);10μmol/mL铬处理明显抑制蛋白磷酸化水平,且细胞内GAPDH活性、cAMP及ATP水平显著降低(P0.05)。而10μmol/mL铬处理中分别添加葡萄糖(5.0μmol/mL)及dbcAMP(1.0 mmol/L)和IBMX(0.1 mmol/L),能缓解铬对蛋白酪氨酸磷酸化(PTP)、蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化(P-PKAs)及GAPDH活性的抑制作用。结果提示铬可能是通过干扰糖代谢及cAMP/PKA信号通路影响猪精子活力及蛋白磷酸化水平。本研究首次探究了体外培养过程中铬离子对家畜精子活力的影响,并初步探究了其作用机理,为进一步研究铬离子引起繁殖毒性的分子机制及家畜繁育提供一定的理论基础。     

牛精子不同获能方法对体外受精效果的影响

为了提高牛体外受精率,探讨牛冷冻精液不同获能方法对体外受精效果的影响,对牛冷冻解冻精液进行了两次离心获能法与一次离心加上游法获能对体外受精效果影响试验.结果表明,两次离心组受精率卵裂率(75.6-±4.5)％与一次离心加上游法组受精卵裂率(76.4±1.9)％无显著差异(P＞0.05);二次离心组囊胚率(35.7±4.1)％与一次离心加上游法组(36.3±2.7)％差异不显著(P＞0.05).而两次离心组却可以大大节省了体外获能时间.     

Boer山羊精子体外获能前后超微结构的研究

用S培养体系对Boer山羊精子进行体外获能试验，借助电子显微技术观察其获能前后超微结构的变化，结果表明，Boer山羊精子的超微结构与其它哺乳动物的类似，分头、颈、尾3部分。头部主要由细胞核构成，含有遗传信息；颈部脆弱，尾部易从此脱落；尾部是精子运动的器官，由中段、主段和末段3部分组成，精子获能后，顶体质膜膨胀、断裂和丢失；顶体外膜囊泡化，进而顶体内膜裸露。     

家兔精子体外获能与体外受精试验

本试验目的在于建立一种简便而有效的系统,能使家兔射出的精子完成体外获能,并获得体外受精、早期卵裂和正常产仔。精子体外获能采用三种方法:A.HIS(15min)+DM(1～2h);B.HIS(15min)+DM(11～12h);C.m-HIS(15min)+m-DM(2～4h)。经上述方法处理的精子与512枚输卵管卵母细胞进行体外受精和体外培养的结果表明,A组的受精和早期卵裂发育延迟;B组的受精卵大都停留在原核期;C组的受精和早期卵裂发育正常。将C组60枚2-4细胞移植至9只受体兔,5只妊娠,其中2只产4只试管仔兔,另外3只获得12个胎儿。     

精子与慢病毒共孵育条件的优化以及转基因猪的制备

【目的】探索慢病毒与精子共孵育的方法,并制备转基因猪。【方法】采用正交试验分析精子密度、病毒量、精子与慢病毒共孵育时间、精子与慢病毒共孵育温度对精子活力的影响,采用PCR和Southern blotting检测转基因。【结果】①优化慢病毒与精子共孵育条件为：100 µL慢病毒原液（5×105cfu）与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min;②与病毒孵育后的精子（109个/mL）给母猪人工授精时,经PCR检测49头仔猪中有14头呈阳性;③Southern blotting结果表明,8头PCR阳性仔猪中,4头融合了外源基因。【结论】优化了精子与慢病毒共孵育的条件（100 µL慢病毒原液（5×105cfu）与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min）,成功制备了转基因猪,并检测有外源基因的融合。     

血浆蛋白粉改善断奶仔猪生产性能的机理

选用28日龄断奶的三元杂交(北京黑猪×长白×杜洛克)仔猪144头,以检测血浆蛋白粉(SDPP)和乳清粉(DW)对仔猪生产性能和血清 GOT,GPT,AKP 活性及 BUN 含量的影响。试验分6个处理即:0SDPP+0DW,0SDPP+5%DW,0SDPP+10%DW,5%SDPP+0DW,5%SDPP+5%DW 和5%SDPP+10%DW。结果表明:处理6的 ADG 最大(P<0.05),饲料转化效率(F/G)最好(P<0.05),GOT,GPT,AKP 酶活性最低。无 SDPP 和 DW 处理的各项指标最差。采食含有 SDPP 日粮的仔猪,其 ADG(P<0.05)、ADFI(P<0.05)明显改进,BUN 含量下降(P<0.05)而氮沉积增加,GOT,GPT,AKP 活性略降低(P>0.05)。随着日粮中 DW 含量从0到10%的递增,仔猪 ADG 线性增加(P<0.022),饲料转化率(F/G)随之改善(P<0.05),但血清 GOT,GPT,AKP 活性及 BUN 含量变化不大(P>0.05)。     

蛋白质磷酸化在油菜素内酯信号通路中的作用

油菜素内酯是植物体内一类重要的类固醇激素,参与调控植物生长发育过程。对拟南芥的大量研究基本阐明了BR信号转导网络中的主要通路。在BR信号转导过程中,蛋白质可逆磷酸化参与了多个重要环节的调控。该文综述了植物体内BR信号转导过程中蛋白质磷酸化的作用。