中草药水提物对罗非鱼无乳链球菌的体外抑菌效果

研究中草药单药及复方联合用药对罗非鱼源无乳链球菌的体外抑菌效果。采用试管二倍稀释法分别测定10种中草药水提物对临床分离的罗非鱼源无乳链球菌的最小抑菌浓度(MIC),筛选出抑菌作用较好的7味中草药,并采用棋盘稀释法测定这7味中草药不同组合联用后对罗非鱼源无乳链球菌的部分抑菌浓度(FIC index)。结果表明,10味中草药水提物中,黄连和五倍子水提物抑菌效果最好,MIC值均为3.9 mg/mL,其次为石榴皮,MIC为15.6 mg/mL,连翘、诃子、鸡血藤及黄芩MIC均为62.5 mg/mL。金银花、板蓝根以及蒲公英抑菌效果较差。在复方联合用药试验中,黄连分别与诃子和黄芩联合,连翘分别与鸡血藤和黄芩联合,诃子分别与石榴皮、鸡血藤和黄芩联合均呈现协同作用;其余药物联用组合均呈现无关或拮抗作用。     

三黄连散对罗非鱼无乳链球菌的体外抑菌效果观察

为开发三黄连散于水产养殖防治细菌性疾病的应用,通过常规检查和PCR技术对试验菌株进行罗非鱼无乳链球菌鉴定后,检测三黄连散对该菌的体外抑菌效果。结果试验菌株为罗非鱼无乳链球菌,血清型为Ia型、II型、dIts型。三黄连散对该菌的最小抑菌浓度(MIC)为15.625mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为31.25mg/mL;1/2×MIC和1×MIC能抑制对数生长期的菌体分裂,2×MIC能抑制细菌进入对数生长期。本研究表明:三黄连散对罗非鱼无乳链球菌有良好的体外抑菌效果,可为其临床应用提供依据。     

裸花紫珠颗粒对罗非鱼源无乳链球菌体外抑菌活性研究

无乳链球菌是导致罗非鱼链球菌病的主要病原菌。为探讨裸花紫珠颗粒对无乳链球菌体外抑菌活性,采用肉汤二倍稀释法测定裸花紫珠颗粒对无乳链球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),同时进行标准无乳链球菌和临床分离无乳链球菌对常用抗菌药的敏感性试验。结果表明,裸花紫珠颗粒对罗非鱼源无乳链球菌的最低抑菌浓度(MIC)为10.000 mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为20.000 mg/mL;药敏试验结果显示临床分离株无乳链球菌对四环素、环丙沙星、氟苯尼考的敏感性降低。该结果为下一步开展裸花紫珠对罗非鱼临床保护试验研究奠定了基础。     

8味中草药水提物对马红球菌的体外抑菌和杀菌效果研究

[目的] 筛选对马红球菌（Rhodococcus equi,R. equi）具有抑菌和杀菌效果的中草药。[方法] 选择黄连、黄芩、大青叶、鱼腥草、黄柏、连翘、金银花及板蓝根共8味中草药制备单味水提物,采用微量肉汤稀释法及平板涂布法测定中草药水提物对R. equi参考菌株103S及临床分离株的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。[结果] 不同中草药水提物对R. equi的抑菌及杀菌效果不同,其中,黄连、黄柏和连翘单独用药杀菌及抑菌效果显著（P<0.05）强于其他中草药水提物;黄连、黄柏和连翘不同组合联合用药对R. equi的抑菌及杀菌效果均优于单独用药,其中,“黄连+连翘”联用后药效呈相加作用。[结论] 黄连等中草药对R. equi表现出抑菌及杀菌效果,且联合用药效果优于单独用药,提示这些中草药制剂有望作为抗R. equi乃至其他耐药病原微生物感染的有效治疗药物。     

中草药醇提物及水提取物对大肠杆菌体外抑菌活性的比较研究

醇提法及水提法制备10味中草药的提取物,采用常规平皿二倍稀释法对不同源性的大肠杆菌进行体外抑菌实验。实验结果表明：10种中草药醇提物对不同动物源性耐药大肠杆菌的抑菌效果优于水煎提取物对上述菌种的抑菌效果,且牛耳大黄及虎杖醇提物对大肠杆菌的抑菌效果显著。     

罗非鱼无乳链球菌的分离鉴定

从南宁市某淡水罗非鱼养殖场的濒死罗非鱼分离获得7株优势菌株,经人工腹腔注射感染罗非鱼,仅发现菌株LFY-5注射后的罗非鱼出现与自然发病罗非鱼相似的症状,死亡率高达60％。经检测,LFY-5菌株为链状或成对排列的革兰氏阳性球菌,单个球形菌体直径为1．0～1．2jxm,在血琼脂培养基上呈13一溶血;对阳性克隆进行DNA检测得到长度为1510bp的16SrRNA基因片段,即分离菌株为无乳链球菌（S．agalactiae）。药敏试验结果显示,菌株LFY-5对头孢氨苄、万古霉素、头孢唑啉、头孢哌酮、新生霉素等18种药物高度敏感,但对菌必治、复达欣、替卡西林、头孢噻肟等8种药物不敏感。     

中草药水提物对黄颡鱼源维氏气单胞菌的体外抑菌活性研究

为了研究中草药对黄颡鱼源维氏气单胞菌的体外抑菌活性,试验通过水提法提取80种中草药有效成分,采用琼脂平板扩散法和试管二倍稀释法测定80种中草药水提物对维氏气单胞菌TH0426的体外抑菌活性,并研究抗菌活性较强的几种中草药的体外联合抑菌活性。结果表明:80种中草药水提物中对维氏气单胞菌TH0426抑菌效果较好的有五倍子、地榆、射干、鹿衔草、红花、大黄、黄连、姜厚朴,且五倍子与地榆的抑菌活性较稳定,地榆的抑菌及杀菌效果最好,MIC、MBC分别为3.91 mg/m L、31.25 mg/m L;联合抑菌试验表明,五倍子与射干的两两联合抑菌指数(FICI)≤0.5,五倍子分别与黄连、大青叶的两两联合抑菌指数≥0.5~≤1,地榆分别与鹿衔草、姜厚朴的两两联合抑菌指数≥2。说明五倍子与射干为协同作用,五倍子与黄连、大青叶分别为相加作用,地榆与鹿衔草、姜厚朴分别为颉颃作用。     

单味中草药对罗非鱼维氏气单胞菌的体外抑菌试验

为了研究了20种单味中草药对罗非鱼维氏气单胞菌的体外抑菌情况,试验采用琼脂扩散法和试管二倍稀释法测定抑菌圈大小及最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:罗非鱼维氏气单胞菌对五味子、五倍子、黄连等5种药物极度敏感,对黄柏、苏木、石榴皮等5种药物高度敏感,对薄荷、公丁香、鱼腥草等5种药物中度敏感;其中黄连、乌梅、沙棘等5种药物对罗非鱼维氏气单胞菌有较好的抑菌效果,MIC在15.63~62.50 mg/mL之间;黄柏、白头翁、石榴皮3种药物的MIC均为125 mg/mL;苏木、黄芩、薄荷3种药物的MIC均为250 mg/mL;公丁香、鱼腥草、夏枯草等5种药物对该菌抑菌效果比较差,MIC均为500 mg/mL。说明五味子、五倍子、黄连等5种中草药可用来防治罗非鱼维氏气单胞菌。     

10种复方中草药对鲟源海豚链球菌的体外抑菌效果研究

为筛选对鲟源海豚链球菌(Streptococcus iniae)有较好抑菌作用的复方中草药。采用牛津杯对九味羌活汤、桑菊饮等10种具有抑菌效果的复方中草药进行海豚链球菌体外抑菌试验,并通过二倍稀释法测定了10种复方中草药对海豚链球菌的最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)。结果表明:鲟源海豚链球对九味羌活汤和桑菊饮高度敏感,抑菌圈直径分别为(24.08±3.92)、(23.92±2.34) mm,其MIC值均为62.5 mg/ml,MBC值均为125 mg/ml。鲟源海豚链球菌对养阴清肺汤、八正散、五苓散和大青龙汤4种复方中草药中度敏感,而对槐花散、藿香正气散、麻黄杏仁甘草石膏汤和痰饮丸4种复方中草药低度敏感。九味羌活汤和桑菊饮对鲟源海豚链球菌具有较好的抑菌、杀菌效果。     

中草药防治罗非鱼无乳链球菌病的研究进展

无乳链球菌是一种广泛分布于自然界的革兰氏阳性,人畜鱼共患病原菌.近年罗非鱼链球菌病的报道越来越多,中国作为世界最大的罗非鱼养殖国,链球菌病已严重危害中国罗非鱼养殖业的健康发展.文章对无乳链球菌病原分类地位、流行病学、致病机理、常规防治方法及中草药防治罗非鱼无乳链球菌病的研究现状作一综述,以期为今后开展罗非鱼无乳链球菌病防控研究提供参考.     

61种中草药对猪致病性链球菌的体外抑菌试验

无菌采集发病猪的肺脏、淋巴结、血液、关节积液和皮下脓肿物等病料，对其进行细菌分离鉴定，并对分离出的细菌进行致病性试验以确认致病性链球菌，将61种单味中草药分别经水煮处理后制成浓度为1g／mL的受试溶液，对致病性链球菌进行体外抑菌试验。结果发现：不同中草药对致病性链球菌具有不同的抑菌作用。     

植物精油对嗜水气单胞菌和无乳链球菌的抑菌效果

本研究旨在通过在细菌培养基中添加不同浓度的植物精油产品智然香和抗敌素,接种嗜水气单胞菌和无乳链球菌,探求植物精油产品智然香和抗敌素对两种水生致病菌的最低抑菌浓度。试验方法:采用琼脂平板法,在培养基中添加不同浓度的植物精油产品智然香和抗敌素,分别接种嗜水气单胞菌和无乳链球菌,测定植物精油产品智然香和抗敌素对细菌的抑制效果和最低抑菌浓度。结果表明:植物精油产品智然香和抗敌素对嗜水气单胞菌的最低抑菌浓度分别为2%和0.7%,对无乳链球菌的最低抑菌浓度分别为4.6%和1%。植物精油产品智然香可以以较小浓度抑制嗜水气单胞菌的生长,可用于嗜水气单胞菌感染引起的水生动物疾病预防和控制。     

61种中草药对猪致病性链球菌的体外抑菌试验

无菌采集发病猪的肺脏、淋巴结、血液、关节积液和皮下脓肿物等病料,对其进行细菌分离鉴定,并对分离出的细菌进行致病性试验以确认致病性链球菌,将61种单味中草药分别经水煮处理后制成浓度为1g/mL的受试溶液,对致病性链球菌进行体外抑菌试验.结果发现:不同中草药对致病性链球菌具有不同的抑菌作用.     

中药水提物及其复方对大肠杆菌的体外抑菌效果

为了评价中药及其复方对大肠杆菌的体外抑菌效果,取乌梅、五倍子、山茱萸、黄芩等30种中药,通过试管二倍稀释法测定中药水提物对大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）与最小杀菌浓度（MBC）,并筛选出抗菌作用较强的中药水提物与其他中药水提物组成复方,测定中药复方对大肠杆菌的体外抑菌效果。结果表明,五倍子、乌梅、金银花、大青叶、黄芩、薄荷、五味子、青蒿、秦皮对大肠杆菌有明显的抑制作用,其中五倍子对大肠杆菌的抑菌活性最强（MIC为6.25 mg/mL）,而五味子和乌梅对大肠杆菌杀菌活性最强（MBC为50 mg/mL）。选取9种中药水提物作为主药与其他中药水提物分别组成复方后,大部分复方对大肠杆菌的抑制作用明显增强。     

24味中药对奶牛乳房炎源无乳链球菌体外抑菌活性研究

正奶牛乳房炎是我国奶牛养殖业中一种常见且多发疾病,由金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、沙门氏杆菌、沙雷氏菌、大肠杆菌等多种非特定的病原微生物引起[1-2]。相关研究表明了在我国养殖的奶牛中,临床型乳房炎奶牛发病率高达33.41%,隐性乳房炎奶     

基于代谢组学的黄芩水提物防治罗非鱼无乳链球菌病作用机制研究

为了探讨黄芩水提物防治罗非鱼无乳链球菌病的作用机制,试验将104尾体重60 g左右的吉富罗非鱼随机分为4组,分别为空白对照组、阴性对照组、防治组和模型组,每组26尾。阴性对照组和防治组均饲喂含5%黄芩水提物的日粮,空白对照组和模型组饲喂基础日粮。于饲喂后第8天进行攻毒试验,空白对照组和阴性对照组腹腔注射灭菌生理盐水,防治组和模型组腹腔注射浓度为1.5×10⁹ cfu/mL的无乳链球菌菌液,0.3 mL/尾,观察10 d,试验过程中记录各组临床症状及死亡情况,对濒死的试验鱼进行尾静脉采血,并对死亡试验鱼进行剖检,攻毒试验结束后计算各组的死亡率及5%黄芩水提物对防治组的保护率,并对其他试验鱼进行尾静脉采血。对各组血液进行液相色谱质谱(LC-MS)分析,通过构建主成分分析(PCA)模型和偏最小二乘判别分析(PLS-DA)模型筛选差异代谢物,导入京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库后进行通路富集分析。结果表明：攻毒后,空白对照组和阴性对照组食欲佳,未出现异常症状,死亡率均为0,剖检未见明显异常。模型组行动迟缓,食欲减退,体表破溃出血,眼球突出,机体失去平衡,出现侧游...     

罗非鱼无乳链球菌EsxA基因克隆与原核表达

Ⅶ型分泌系统(T7SS)是近年来发现的分泌系统,分泌两种胞外蛋白,EsxA基因编码的ESAT6蛋白和EsxB基因编码的CFP-10蛋白。分泌蛋白具有良好的免疫原性,促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响巨噬细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能,与致病性密切相关。以罗非鱼源无乳链球菌为模板,克隆到294bp的EsxA基因,将目的序列克隆到pMD18-T载体,经测序,目的序列与无乳链球菌EsxA基因同源率在99%以上。EsxA基因克隆到pET32a载体中,重组载体在28℃、0.5mmol/L IPTG诱导条件下表达量最大,可溶性表达。将纯化的ESAT6蛋白免疫Balb/c鼠,成功制备ESAT6蛋白鼠多克隆抗体,经Western blot,ESAT6蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步进行无乳链球菌ESAT6蛋白的免疫学功能研究奠定了基础。     

单一中草药以及复方中草药体外抑菌效果研究

试验旨在探究单一中草药、多种中草药组方对猪肠道大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的体外抑菌作用,筛选效果较好的单一中草药以及中草药组方。试验选用黄芪、何首乌、黄连、金银花、大黄、白头翁、五倍子、葛根等八种中草药的提取液,采用双层琼脂扩散法和微量二倍稀释法,测定其对3种育肥猪常见的有害肠道菌株抑菌圈的大小和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:(1)猪大肠杆菌对黄连、金银花和五倍子呈高度敏感,抑菌圈直径分别为24.54、20.13、20.13 mm,其MIC值分别为31.25、125、125 mg/ml。(2)金黄色葡萄球菌对黄芪、黄连和大黄呈低度敏感,抑菌圈直径分别为14.07、12.57、14.4 mm,其MIC值分别为250、125、125 mg/ml。(3)沙门氏菌对黄芪呈低度敏感,MIC值为250 mg/ml,黄连和大黄对沙门氏菌呈中度敏感,MIC值均为62.5 mg/ml。(4)黄芪和何首乌提取液混合试验,以黄芪0.75 mg/ml,何首乌0.25 mg/ml组合效果最好,对大肠杆菌呈中度敏感,抑菌圈直径为16.1 mm;对金黄色葡萄球菌呈低度敏感,抑菌圈直径为11 mm;对沙门氏菌呈不敏感,抑菌圈直径为9.8 mm。(5)黄芪、黄连和大黄三种提取液混合试验,以黄芪0.25 mg/ml,黄连0.5 mg/ml,大黄0.25 mg/ml组合效果最好,对大肠杆菌呈低度敏感,抑菌圈直径为12.4 mm;对金黄色葡萄球菌呈低度敏感,抑菌圈直径为12.2 mm;对沙门氏菌呈低度敏感,抑菌圈直径为12.9 mm。综上所述,单一添加黄芪、黄连和大黄三种中草药对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌体外抑菌效果较好。以黄芪,黄连和大黄三种中草药复配的组方对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌体外抑菌效果最好。     

中草药对大肠杆菌体外抑菌试验

选用27种不同的中草药制剂(煎剂、挥发油、蒸馏液),以平板稀释法和纸片法对同一株肉鸡源的大肠杆菌进行体外抑菌试验.结果表明,有14种中药对此株大肠杆菌有不同程度的抑制作用.试验还表明中药制剂的配方工艺不同,其抑菌的效果亦有不同.     

无乳链球菌体外感染奶牛乳腺上皮细胞

用分离到的无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,GBS)及标准菌株侵袭原代奶牛乳腺上皮细胞建立体外感染细胞模型,并进行细胞凋亡检测。同时,采用qRT-PCR方法检测细胞受到侵袭后白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等细胞炎性因子mRNA的转录水平。结果显示,标准菌株组(WL组)与空白组相比凋亡率差异极显著(P<0.01),分离菌株组(FL组)与空白组相比凋亡率差异极显著(P<0.01),分离菌株组与其标准菌株组的凋亡率差异也极显著(P<0.01)。qRT-PCR结果分析显示,标准株组TNF-α、IL-6及IL-8 mRNA转录水平与对照组相比,差异极显著(P<0.01);而分离菌株组TNF-αmRNA转录水平与对照组相比差异显著(P<0.05),IL-6及IL-8 mRNA转录水平差异不显著(P>0.05)。结果表明,与标准菌株相比,无乳链球菌分离株对奶牛乳腺上皮细胞侵袭和损伤能力较低,乳腺细胞的凋亡率也较低,当奶牛乳腺上皮细胞受到细菌侵袭的时候,细胞中IL-6、IL-8及TNF-α等炎性因子mRNA的转录水平都显著性提高,但在相同浓度下GBS标准株诱导细胞炎性因子的表达量显著高于GBS分离株。本试验结果为以后预防和控制GBS引起的隐性乳房炎提供试验依据。