鸭LXRα基因过表达对原代肝细胞及PC3细胞脂质代谢的效应研究

旨在探究鸭LXRα基因对脂肪代谢的表达调控机制,本试验以pEGFP-N3为载体,构建携带HIS标签的LXRα基因真核过表达载体,并将过表达载体分别转染鸭原代肝细胞及PC3细胞,使用鸭HIS标签试剂盒测定LXRα基因在肝细胞及PC3细胞中的过表达量,分析该基因分别在两种细胞中过表达与各脂质指标含量的相关性,进而探究其对鸭肝细胞及PC3细胞脂质代谢的调控作用。试验结果显示,LXRα基因在两种细胞中过表达与三酰甘油含量(triglyceride,TG)及高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)含量均呈极显著正相关关系(P<0.01),与总胆固醇(total cholesterol,TC)含量及低密度脂蛋白含量(low density lipoprotein,LDL)则均呈极显著负相关关系(P<0.01)。本研究揭示了LXRα基因过表达对TG和HDL的合成代谢有重要的正向调控作用,对TC和LDL具有反向调控作用,且在这两种类型的细胞中调控机制相似。这一研究结果将对今后深入研究LXRα基因在脂质代谢网络通路中的作用及解决鸭体脂肪过度沉积等问题奠定理论基础。     

蛋氨酸对HepG2细胞和鸭原代肝细胞生长和脂质代谢的影响

本研究旨在研究蛋氨酸（Met）对HepG2细胞和鸭原代肝细胞生长及脂质代谢的影响。设置2个体外肝细胞试验,分别以HepG2细胞和鸭原代肝细胞为研究对象,研究不同浓度Met培养基对HepG2细胞和鸭原代肝细胞的存活率、脂质沉积及其相关基因和蛋白表达的影响。结果表明：1）培养基中Met浓度为0μmol/L时HepG2细胞存活率显著低于其他Met浓度（P<0.05）,培养基中Met浓度为0、6.25、12.5和25μmol/L时鸭原代肝细胞存活率显著低于显著100和200μmol/L时（P<0.05）,随着培养基Met浓度增加,25μmol/L Met时HepG2细胞存活率达到平台,100μmol/L Met时鸭原代肝细胞存活率达到平台。2）与200μmol/L Met组相比,0、25μmol/L Met组脂滴数量明显增加,单位细胞数目油红O的吸光度显著增加（P<0.05）,且0、25μmol/L组之间无显著差异（P>0.05）。3）与200μmol/L Met组相比,0、25μmol/L Met组HepG2细胞中链酰基辅酶A脱氢酶（ACADM）、二氢硫辛酸脱氢酶（D...     

乙酸对奶牛乳腺上皮细胞活力及CD36和FABP3基因表达的影响

试验旨在研究在奶牛乳腺上皮细胞培养液中添加不同浓度的乙酸对细胞活力及CD36和FABP3 mRNA相对表达量的影响。将传第三代的乳腺上皮细胞悬液接种于细胞培养板上,每孔加入含10%FBS的DMEM/F12培养液,于37℃、5%CO2培养箱培养48 h。将培养48 h的奶牛乳腺上皮细胞培养孔随机分为1个对照组和5个试验组。每组分别加入含0、4、6、8、10、12 mmol/l乙酸的DMEM/F12培养液,并用1 g/l无脂肪酸的BSA替代培养液中的FBS,其中0 mmol/l为对照组。结果表明,细胞相对增殖率随着乙酸浓度的增加呈显著的二次曲线增加(P=0.005),以4~8 mmol/l乙酸处理组的细胞活力较高。随着乙酸添加浓度的增加,CD36的相对表达量呈显著的一次线性(P=0.011)和二次曲线(P=0.000)降低,以8~12 mmol/l乙酸组较低;FABP3的表达量呈显著的一次线性(P=0.001)和二次曲线(P=0.010)增加,以10~12 mmol/l乙酸组较高。乳腺上皮细胞活力与乙酸浓度呈显著的剂量依赖关系,低浓度的乙酸可促进奶牛乳腺上皮细胞活力,而高浓度则表现出抑制作用。不同浓度的乙酸处理组均下调了CD36 mRNA相对表达量,上调了FABP3 mRNA表达量。     

早胜牛CD36基因第三外显子多态性检测及其与生长及肉用性状关联性分析

为研究早胜牛CD36基因第三外显子的多态性及其与生长及肉用性状的关联性,选取300头健康的早胜肉牛,采用PCR-SSCP技术、DNA测序技术对早胜牛CD36基因第三外显子进行遗传多态性分析,通过SPSS 19.0软件分析SNP位点与早胜牛生长性状和肉用性状的关联性,采用实时荧光定量PCR技术检测早胜牛不同组织器官中CD36基因的表达特性,分析其遗传变异与生长性能的关系。结果表明,CD36基因第三外显子在59 415 bp处存在一个SNP,具有GG、GC和CC 3种基因型;关联分析显示,G59415C位点,CC和GC型体重极显著高于GG型(P0.01),CC型体斜长显著高于GG型(P0.05),CC型的宰前活重、胴体重显著高于GG型(P0.05),背膘厚度显著高于GG型和GC型(P0.05),肌内脂肪含量极显著高于GG和GC型(P0.01);荧光定量PCR检测显示,腿肌、背最长肌和肝脏中mRNA表达量以CC型最高,GC型次之,GG型最低,差异不显著(P0.05)。说明G59415C位点对早胜牛生长性状和肉用性状影响较大,可作为生长性状和肉用性状分子标记位点,CC型为优势基因型,可作为生长性状和肉用性状的候选基因型。     

黄芩苷对原代大鼠肝细胞CYP3A1的影响

胶原酶二步灌流法获取原代大鼠肝细胞,用不同浓度的黄芩苷处理1~3 d,Western Blot法检测细胞色素P4503A1(CYP3A1)的表达。结果表明,通过胶原酶灌流法,每只大鼠可获得2-4×108个肝细胞,存活率约为95%。低浓度(<10μmol/L)的黄芩苷处理后,肝细胞CYP3A1的表达随黄芩苷浓度的增加和处理时间的延长而呈升高的趋势。高浓度(>10μmol/L)黄芩苷对细胞产生毒性,原代大鼠肝细胞可用于黄芩苷药物代谢的研究,为探讨其他药物的代谢打下了基础。     

甜菜碱对鹅胚原代肝细胞脂肪代谢和DNA甲基化的影响及调控机制

本试验旨在研究甜菜碱对鹅胚原代肝细胞脂肪代谢和DNA甲基化的影响及调控机制.以鹅胚原代肝细胞为试验对象,试验1:研究不同浓度[0(对照)、2.5、5.0和10.0 mmol/L]甜菜碱培养液对鹅胚原代肝细胞DNA甲基化相关酶活性和泛酰巯基乙胺酶-1(VNN-1)启动子区域DNA甲基化的影响;试验2:研究不同处理[正常培...     

铜对猪原代肝细胞中铜锌超氧化物歧化酶和丙二醛活性的影响

肝细胞的体外培养是研究肝脏和肝细胞功能的有效途径。虽然体外培养的肝细胞不受完整机体所存在的神经体液调节作用的影响,但由于其便于施加各种试验因素,从而用于多方面的研究。试验拟在建立体外培养原代肝细胞模型的基础上,通过向体外培养的肝细胞模型中添加铜,观察肝细胞中铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和丙二醛(MDA)的活性变化,为探究高铜促生长机理提供试验依据。1材料与方法1.1材料1.1.1试验动物选用初生1~3日龄的“军牧1号”健康仔猪作为肝细胞供体,雌雄不限,体重0.5~1.0 kg,由吉林大学农学部大学动物繁育中心种猪场提供。1.1.2…     

OCX-32基因表达载体构建及其对鸡子宫上皮细胞Ca2+浓度和脂质指标的影响

为探究卵黄蛋白原-32（ovocalyxin-32,OCX-32）基因过表达与鸡子宫上皮细胞Ca²⁺含量和脂质指标之间的关联性,本研究采用Ⅳ型胶原酶法分离培养长顺绿壳蛋鸡子宫上皮细胞,构建pcDNA3.1（+）+OCX-32+Flag表达载体并转染子宫上皮细胞,测定OCX-32基因过表达量、Ca²⁺浓度和脂质指标并进行相关性分析。结果显示,试验组的总胆固醇（TCHO）浓度显著高于对照组（P<0.05）,对照组的Ca²⁺浓度显著高于试验组（P<0.05）。OCX-32基因过表达量与Ca²⁺浓度呈显著负相关关系（P<0.05）,与甘油三酯（TG）浓度呈显著正相关关系（P<0.05）,与TCHO浓度呈极显著负相关关系（P<0.01）,TCHO浓度与TG浓度呈极显著负相关关系（P<0.01）,研究结果揭示了OCX-32基因过表达能够调控鸡子宫上皮细胞的Ca²⁺含量和脂质的合成转运,为深入阐释鸡子宫上皮细胞中脂质和钙分泌的调控机制提供试验基础和数据支持。     

绿原酸对原代大鼠肝细胞CYP3A1的影响

绿原酸是杜仲、金银花等传统中药的清热解毒、抗菌消炎的主要药效成分.药理学研究证明,绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化、清除自由基、止血、降血压、降血脂及保肝利胆等作用[1-3].细胞色素P450酶(CYP450)主要存在于肝脏中.参与一系列药物的代谢,对维持机体内环境稳定有重要作用,是药理学、毒理学研究的热点.CYP3A约占CYP450总量的25%~28%,约有60%的药物经肝脏CYP3A代谢[4].在药物代谢中起着重要作用.CYP3A1是大鼠CYP3A家族最主要的亚型,它的活性高低直接影响许多药物的治疗效果和毒性反应.因此,研究药物对肝细胞CYP3A1的诱导作用对临床安全用药有重要意义.     

仙湖3号鸭开产日龄对部分产蛋性状的影响

利用仙湖 3号鸭第 9世代B系核心群 40个家系 2 2 4只母鸭的个体产蛋实测数据 ,统计分析了开产日龄对部分产蛋性状的影响。结果表明 :随开产日龄增加 ,其初生蛋重总的来说呈增加趋势 ;初生蛋重大的 ,其 36周龄、 58周龄的蛋重也大。另一方面 ,母鸭 1 50d产蛋数与开产日龄之间呈曲线相关 ,拟合的回归方程为 :^y =0 1 39x3- 2 891x2 +31 5 535x +1 1 7 82 ,拟合度R2 为 0 867,拟合效果较好。     

CD3+ and BLA.36+ cells do not occur in the epidermis and adnexal epithelia of normal equine skin

A small population of resident T lymphocytes is present in the healthy human and murine epidermis. However, resident epidermal lymphocytes have not been reported in normal skin of the horse. Skin biopsy specimens from the normal skin of 27 horses were examined histologically and immunohistochemically for the presence of lymphocytes, CD3+ cells and BLA.36+ cells in epidermis and adnexal epithelia. All examinations were negative. It appears that lymphocytes occur rarely, if at all, in the epidermis and adnexal epithelia of normal horse skin. Hence, the presence of lymphocytes in these structures should be considered abnormal.     

镉对体外培养大鼠肝细胞自噬的影响

选用体外培养原代大鼠肝细胞为模型,醋酸镉处理之后,用Westernblot和免疫荧光法检测了自噬标记分子LC3的表达水平,在此基础上,利用自噬激活剂（雷帕霉素）诱导自噬水平的升高,用MTT法分析了镉对细胞存活率的影响。结果显示,原代大鼠肝细胞在体外培养过程中自噬水平具有缓慢上升的趋势,而镉处理延缓了这种趋势,降低了自噬的水平和细胞存活率;利用激活剂增强自噬后不能减弱镉的损伤,表明镉有可能通过抑制自噬的保护作用,造成对肝细胞的损伤。     

多不饱和脂肪酸对脂肪代谢酶基因表达的影响

多不饱和脂肪酸不仅可以抑制脂肪合成酶基因的表达,还能对脂质氧化相关酶基因的表达起促进作用,从而调节机体脂质代谢过程。本文主要就多不饱和脂肪酸的分类和来源、对脂肪合成及氧化相关酶基因表达的影响作一综述。     

猪肺炎支原体特异性蛋白P36基因的克隆与表达

根据Genbank中猪肺炎支原体P36基因序列设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体ZCF23株特异性蛋白P36基因序列,经测序确认后,克隆人原核表达载体pGEX 6p-1的EcoR I和Xho I位点之间,转化宿主菌BL21,将筛选出的阳性克隆用IPTC诱导,通过SDS-PAGE电泳进行鉴定,结果表明,P36蛋白基因获得了表达,这为猪肺炎支原体免疫检测与诊断提供了重要条件.     

鹅细小病毒VP3基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中表达

根据已发表的鹅细小病毒(GPV)B株核苷酸序列,设计并合成了1对引物,PCR扩增GPV吉林分离株主要结构蛋白VP3基因,获得大小为1605bp的核苷酸片段。将该片段纯化后克隆入pMD18-T载体,转化感受态大肠杆菌JM109,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并测序。经过酶切和连接反应,将VP3基因克隆入真核表达载体pVAX1,转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,提取质粒,进行了PCR和酶切鉴定。通过脂质体法将pVAX1-VP3转染Vero细胞,RT-PCR和间接免疫荧光法检测。结果显示,VP3基因克隆成功,与GPVB株核苷酸序列同源性为96.2%;PCR和酶切鉴定结果证实,成功构建了含VP3基因的GPV真核表达载体pVAX1-VP3。提取转染该质粒的Vero细胞RNA,RT-PCR扩增,在1000～2000bp可见一明显DNA条带;间接荧光抗体染色转染细胞,在细胞表面可见特异荧光。     

牛肌肉生成抑制素基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

将构建的牛pMD 18-T-MSTN克隆载体与真核表达载体pef-dhfr1a酶切,回收牛MSTN目的片段及pef-dhfr1a载体,构建了牛MSTN基因的真核表达质粒pef-dhfr1a-MSTN,然后转染COS-7细胞,将牛MSTN成熟蛋白编码序列在COS-7细胞中进行了表达.提取转染细胞的总RNA,采用RT-PCR和Western-blotting方法,分别从mRNA水平和蛋白质水平上检测到了牛MSTN基因在COS-7细胞中的表达产物,证明已经成功构建出该基因的真核表达载体.     

AA肉鸡血液CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化规律

采用流式细胞仪检测1、3、5、7、14、21、28、35、42、49日龄AA肉鸡血液中的CD3、CD4、CD8阳性T细胞比例。研究结果表明:1～5日龄T细胞逐渐进入血液参与细胞免疫,7、21日龄注射疫苗起免疫应答作用,28日龄后基本形成稳固的细胞免疫水平。     

嗜酸乳杆菌的亚油酸异构酶基因克隆及其pMG36e表达载体的构建

以嗜酸乳杆菌基因组为模板,对亚油酸异构酶基因进行PCR,PCR产物克隆到pMD-19T质粒中,经菌落PCR、酶切分析和DNA测序鉴定克隆成功后,亚克隆入乳酸菌表达质粒pMG36e,构建乳酸菌表达载体pMG36e-LAI并转化到大肠杆菌DH5α中,经菌落PCR和酶切分析初步证明表达载体pMG36e-LAI构建成功。该研究为利用工程菌工业化生产高产量、高活性亚油酸异构酶制剂来生产CLA奠定基础。     

鸡CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建

用Trizol提取4—6周龄白莱航鸡、伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡胸腺组织的总RNA，再用Oligo～dT纤维素富集mRNA后，用RT-PCR扩增出鸡CD3γδ基因CDNA。PCIk产物切胶回收后连入T载体，序列分析发现伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡的CD318cDNA比白菜航鸡多一个氨基酸，且在胞外区的一个区域有4个氨基酸的差异。将白莱航鸡的CD318从T载体上切下连入pcDNA3．1（＋），再将重组质粒pcDNA3．1-CD3转染COS-7细胞，用已知的抗鸡CD3的单克隆抗体测得转染细胞中CD3γδ分子的表达，这说明构建的真核表达质粒正确，为下一步用DNA免疫的手段研制抗鸡CD3的单克隆抗体以及研究鸡CD3分子的结构和功能打下了基础。