抗猪流行性腹泻病毒制剂研究进展

<正>猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起猪的一种急性肠道传染病。PEDV属于α冠状病毒,单股正链RNA病毒,分别编码4个结构蛋白,即纤突蛋白(S)、小膜蛋白(E)、膜糖蛋白(M)和核衣壳蛋白(N),以及15个非结构蛋白(Nsp1-Nsp15)和ORF3~([1])。PEDV靶向     

猪流行性腹泻研究概况

<正>猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea vims,PEDV)引起的一种高度接触性肠道传染病。PEDV的感染可引起腹泻、呕吐、脱水以及哺乳仔猪的高死亡率。PEDV属于冠状病毒科冠状病毒属,基因组为线形单股正链RNA病毒。PEDV基因组编码4种结构蛋白:S蛋白、E蛋白、M蛋白和N蛋白,ORF3编码一个未知功能且具有多态性的     

猪流行性腹泻病毒研究进展

<正>猪流行性腹泻病毒属于冠状病毒科冠状病毒属,是I群冠状病毒的成员。目前对于PEDV感染机理方面的研究较少,2007年猪氨基肽酶(p APN)被证实为PEDV的功能性细胞感染受体,继而又有研究从数量上证实增加p APN的密度可以增大PEDV感染率。PEDV基因组长为27000~33000个核苷酸(nt),靠近3’端5kb区域内有5个主要的开放阅读框(ORF)。编码4种结构蛋白:S蛋白、E蛋白、M蛋白和N蛋白,位于E基因上游的ORF命名为ORF3,编码一个未知功能且具有多态性的产物。     

中国流行的PEDV:共感染和遗传多样性

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种肠道传染病,对哺乳仔猪致死率可达100%,是导致我国哺乳仔猪高死亡率的“头号杀手”。PEDV属于冠状病毒科、冠状病毒属,是一种具有囊膜的单股正链RNA病毒,其基因组由4个结构蛋白和17个非结构蛋白组成。其中,S蛋白在病毒侵入宿主细胞和诱导机体产生中和抗体过程中发挥重要作用,因此S蛋白的突变与病毒的致病性高度相关。PEDV的变异以及PEDV与其它病原的共感染是难以防控PED的重要因素。     

猪流行性腹泻病毒结构蛋白的研究进展

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种急性、高度传染性的肠道疾病,PEDV由4个结构蛋白、15个非结构蛋白和ORF3组成。15个非结构蛋白仅在病毒复制过程中发挥了一定的作用,而4个结构蛋白构成了整个病毒颗粒,在病毒的复制和转录过程中均发挥了重要的作用。现对结构蛋白S(纤突蛋白)、M(小包膜糖蛋白)、E(膜糖蛋白)和N(核衣壳蛋白)在病毒复制和转录中的作用、免疫保护中的作用以及在细胞侵入及流行病学中的作用进行综述。     

腹泻仔猪肠道病毒组学分析

为了解上海周边地区腹泻仔猪肠道病毒组学特征,特别是冠状病毒流行情况,采用病毒宏基因组学方法对6个猪场的90份疑似病毒感染导致腹泻粪样进行检测,并通过Geneious和MEGA7.0等生物信息学软件对获得的完整的α冠状病毒属中的PEDV ORF3基因序列进行遗传进化分析。数据显示,腹泻仔猪肠道病毒群落组成主要由小RNA病毒科(Picornaviridae)(63.67%)、星状病毒科(Astroviridae)(12.68%)、杯状病毒科(Caliciviridae)(4.07%)、细小病毒科(Parvoviridae)(2.51%)等组成。在唯一一个检测出PEDV阳性的猪场中,腹泻仔猪PEDV阳性率高达43.33%(13/30)。基因序列遗传进化分析显示,在本研究获得的3个PEDV ORF3基因序列中,有1个属于G2基因型,与其他参考PEDV病毒株相似性较高(96.44%～99.70%);另外2个ORF3基因序列属于G1基因型,相似性相对较低(95.11%～99.41%)。与PEDV传统株CV777蛋白序列比较分析发现,除piglet91株产生F2S突变以外,三株PEDV存在一致性突变,分别如下:V21A、I70M、V79I、F80V、L85I、L92F,这一特性,有可能是PEDV传统株与流行株基因型的鉴别依据。上海周边地区腹泻仔猪肠道病毒组成丰富,在不同猪群中,不同病原感染的情况有所差异,除了PEDV外,星状病毒和杯状病毒也是仔猪腹泻的主要病原。PEDV的ORF3基因与传统分离株相比具有独特的分子特征,新检测到的毒株突变位点与病毒毒力的关系有待于进一步研究。研究结果有助于了解腹泻仔猪肠道的病毒谱,并为仔猪病毒病防控提供一定的基础数据。     

冠状病毒与宿主细胞受体相互作用的研究进展

<正>冠状病毒(Coronavirus)是一类有囊膜的单股正链RNA病毒，具有复杂的进化历史，属于套式病毒目，冠状病毒科，冠状病毒亚科，冠状病毒属，这类病毒能广泛感染野生、家养禽类和哺乳动物^[1]。冠状病毒是目前已知的RNA病毒中基因组最大的病毒，成熟的冠状病毒直径为60～220 nm，分为4个不同的属:α、β、γ和δ冠状病毒(图1)。冠状病毒粒子多呈现球形或不规则形，其基因组大小介于26 000～32 000 bp，长度约为30 kb^[2]，包含6～11个开放阅读框(Open reading frame,ORF)，第一个ORF占整个基因组约67%，编码16种非结构蛋白(Nonstructural protein)^[3]，其余的ORF编码辅助蛋白和结构蛋白。4种主要的结构蛋白为刺突表面糖蛋白(S)、包膜蛋白(E)、基质蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)^[4](图2A、2B)。S蛋白在结合宿主细胞上的受体中起着至关重要的作用，也决定了病毒的宿主向性^[5,6]。冠状病毒可以通...     

稳定表达3种猪腹泻病毒嵌合抗原的CHO细胞系构建与鉴定

为构建稳定表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪胃肠炎病毒(TGEV)和猪Delta冠状病毒(PDCoV)主要抗原的CHO细胞系，为猪病毒性腹泻三联疫苗的研发提供基础材料，本研究将PEDV的S基因的COE区域、TGEV和PDCoV的S基因的受体结合区域(RBD),通过同源重组的方式进行融合，克隆到慢病毒表达质粒pLV-EF1a-IRES-Puro中，包装得到重组慢病毒。使用重组慢病毒感染CHO细胞，经过嘌呤霉素和单克隆细胞筛选，基因水平和蛋白水平表达验证，成功构建了稳定表达3种猪腹泻病毒抗原融合蛋白的CHO细胞系，为进一步研制PEDV-TGEV-PDCoV的亚单位疫苗奠定了基础。     

猪流行性腹泻病毒结构蛋白及其在侵染宿主细胞中的作用

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)的病原,PEDV可导致猪的急性腹泻、脱水甚至死亡。如今PEDV已成为引起猪腹泻最常见病原体之一,给我国养猪行业造成极大的经济损失。PEDV的四种结构蛋白在病毒结构、感染宿主、复制和组装过程中发挥着重要功能,同时在逃避宿主天然免疫方面也起着重要作用。阐述了PEDV四种结构蛋白Spike(S)蛋白、Membrane(M)蛋白、Nucleocapsid(N)蛋白、Envelope(E)蛋白在病毒感染中与宿主细胞的互作机制,为PEDV防控以及疫苗研发等提供理论研究基础。     

猪病动态

猪流行性腹泻病毒研究获进展近日,国际期刊《欧洲生化学会联合会快报》发表了中科院上海巴斯德研究所孙兵研究组关于猪流行性腹泻病毒ORF3基因编码离子通道蛋白和调节病毒产生量的最新研究成果。研究表明,不同PEDV毒株的ORF3区域存在着各种突变,提示该基因与病毒的毒力有关,但ORF3蛋白的结构和功能尚不明确。孙兵研究组在SARS冠状病毒3a离子通道蛋白研究的基础上,与哈尔滨兽医研究所、台湾阳明大学等单位合作,进一步研究了PEDVORF3基因编码蛋白的功能。业内专家认为,该研究提示离子通     

猪流行性腹泻病毒结构蛋白及疫苗的研究进展

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)由冠状病毒引起,患病仔猪以呕吐、腹泻、脱水为特征,具有较高的致死率,给生猪的发展带来了巨大的经济损失,故防制PED非常重要。PEDV S、E、M、N蛋白是病毒粒子的结构蛋白,在体外能自我装配成病毒样颗粒(VLPs),并能刺激机体产生抗PED中和抗体,所以研究PED结构蛋白对PED新型疫苗研制至关重要。本文对PEDV结构蛋白分析及疫苗研究进行了综述,为PEDV的深入研究提供参考。     

PEDV和TGEV毒株间的抗原关系

<正>在经济上,猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)都是导致猪肠病重要的冠状病毒。两者都属于冠状病毒科甲型冠状病毒属,但属于不同的种。并且两者都能引发新生仔猪相似的临床症状和病理病变,但推测两者抗原性不同。本研究选取了PEDV CV777原型毒株、美国3种不同的PEDV毒株(原高毒性PC22A、S INDEL Iowa106和S 197DEL PC177)和2种美国代表性TGEV毒株(Miller     

猪流行性腹泻病毒入胞机制研究现状

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种高度传染性疾病,给全球养猪业造成了严重的经济损失。PEDV的S蛋白同时具有受体结合和膜融合功能。S蛋白与宿主细胞受体之间相互作用,细胞蛋白酶对S蛋白的水解激活,病毒膜融合的方式对PEDV的组织嗜性、宿主范围,发病机制起到关键作用。因此,从PEDV的组织和细胞嗜性、细胞受体、入胞方式、细胞蛋白酶等方面着手,研究病毒的入胞机制对病毒感染的预防和治疗具有重要意义,也为后续的基础研究及PEDV的防控提供理论支持。     

科技前沿

正中国农大揭示猪流行性腹泻病毒致病关键因子4月28日,中国农业大学动物医学院猪病研究团队在猪流行性腹泻病毒(PEDV)研究领域取得新进展,掲示PEDV流行毒株毒力是多因子作用结果,S基因仅是BJ2011C株致病的必要条件,结构蛋白编码区促进PEDV在仔猪肠道内定殖,并和3UTR协同作用,影响病毒致病力。     

2020年～2021年河北省4种猪腹泻病毒流行情况调查及PEDV分离株S1和ORF3基因序列的遗传变异分析

为初步调查河北省近年4种猪腹泻相关病毒的流行情况，本研究于2020年～2021年从河北省部分地区猪场采集244份腹泻猪粪便或肠组织样品，采用荧光定量PCR (qPCR)检测4种猪腹泻相关病毒[(猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)]；采用RT-PCR扩增部分PEDV阳性样品S1和ORF3基因并测序，利用DNAStar软件分析这两个基因及其编码氨基酸序列与PEDV相应序列的同源性；采用MEGA 7.0软件构建这两个基因的进化树，分析PEDV的基因型及其遗传进化关系。采用DNAStar比对这两个基因编码的氨基酸序列，分析其氨基酸序列的变异情况。结果显示：病料样品中PEDV、PoRV、PDCoV和TGEV检出率分别为34.02%(83/244)、18.44%(45/244)、10.66%(26/244)和2.87%(7/244)。样品中两种病原混合感染较多，其中PEDV+PoRV和PEDV+PDCoV检出率最高，分别为8.61%(21/244)和2.46%(6/244)；仅2份样品为PEDV+PDCoV+PoRV...     

携带猪流行性腹泻病毒S1抗原表位的乙肝核心抗原病毒样颗粒的构建与鉴定

旨在构建以乙肝核心抗原(HBcAg)为载体呈现猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1抗原表位的病毒样颗粒.将PEDV S1蛋白中含B细胞表位的270 bp片段插入到HBcAg主要免疫显性区域(MIR),构建重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-PEDV S1,转化到感受态细胞BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SD...     

猪流行性腹泻病毒S1D蛋白的优化表达及其单克隆抗体的制备

为进一步探究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白的抗原表位及其功能,本试验通过优化S1D基因的密码子,构建了S1D基因未优化的重组原核表达质粒pET-S1D和已优化的pET-ΔS1D,并进行了诱导表达和纯化。使用SDS-PAGE和Western blotting方法验证S1D、ΔS1D蛋白在大肠杆菌内得到正确表达,利用Image J软件对S1D、ΔS1D蛋白表达量进行灰度扫描,通过t检验分析两者差异性。将纯化的ΔS1D 蛋白免疫 BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,获得单克隆细胞株。利用体内诱生法制备抗PEDV S1D蛋白的单克隆抗体腹水,使用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光试验3种方法对腹水效价及特异性进行检测和验证。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,表达S1D、ΔS1D蛋白的样品均在34 ku处出现正确的目的条带。t检验结果表明, S1D、ΔS1D两者蛋白表达量差异极显著(P<0.01)。ELISA结果显示, 腹水的抗体效价达到了1∶1 000 000,腹水与PEDV病毒粒子和纯化后的ΔS1D蛋白反应均呈阳性,与PEDV N蛋白、pET-32a(+)空载体蛋白和猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV) 5种病毒反应均呈阴性。Western blotting结果显示,腹水与ΔS1D蛋白和PEDV S蛋白分别在34和180 ku处有特异性条带出现,与pET-32a(+)空载体蛋白、正常Vero细胞蛋白均无特异性条带出现。间接免疫荧光试验结果显示,腹水及阳性对照组均能使细胞出现特异性绿色荧光信号,而空白及阴性对照组均未见绿色荧光信号。密码子优化可在原核表达系统中显著提高重组蛋白的表达水平,本研究基于高效表达的ΔS1D蛋白,成功制备了1株能稳定分泌与 PEDV S蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株,为进一步探究 PEDV S蛋白抗原表位及蛋白功能的研究奠定了基础。     

断奶后群养对母猪福利和性行为的影响

在经济上,猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)都是导致猪肠病重要的冠状病毒。两者都属于冠状病毒科甲型冠状病毒属,但属于不同的种。并且两者都能引发新生仔猪相似的临床症状和病理病变,但推测两者抗原性不同。本研究选取了PEDV CV777原型毒株、美国3种不同的PEDV毒株(原高毒性PC22A、S INDEL Iowa106和S 197DEL PC177)和2种美国代表性TGEV毒株(Miller     

3C样蛋白酶：重要抗PEDV药物的筛选靶标

<正>猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种有囊膜的单股正链RNA病毒，属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)成员。由于冠状病毒的RNA酶缺乏校正功能，PEDV等冠状病毒的基因组易发生变异。2010年末，PEDV变异株所致疫情在我国猪群中暴发以来，该病一直在我国猪群中反复流行，对哺乳仔猪的致死率高达100%。当前，疫苗接种仍然是防控PEDV感染的首选措施。然而，冠状病毒变异速度快、流行株多，导致现有疫苗株对当前流行变异株只起到部分的交叉免疫保护。抗病毒药物对于病毒感染的应急性治疗，特别是对新生仔猪等尚未形成完整免疫系统的动物，在缓解病情进一步恶化中发挥重要作用。在抗病毒药物的设计策略中，靶向病毒的药物可以在不影响宿主细胞的同时有效抑制病毒的复制，并且由于大部分病毒结构简单，病毒蛋白数量相对较少，易设计出特异性抑制病毒蛋白功能的抗病毒药物。     

猪流行性腹泻病毒结构与非结构蛋白诱导细胞凋亡的研究

为了弄清猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染后诱导细胞凋亡的关键蛋白，采用基因克隆技术构建PEDV相关病毒蛋白的真核表达质粒，转染至HEK-293T细胞，通过流式细胞术检测其细胞凋亡率。结果显示：PEDV非结构蛋白Nsp3和Nsp5以及结构蛋白M的重组质粒转染细胞后显著诱导细胞凋亡，且诱导的细胞凋亡呈现时间和剂量依赖性，提示Nsp3、Nsp5和M蛋白可能是PEDV的关键促凋亡因子。该结果为进一步研究PEDV诱导细胞凋亡的分子机制奠定了基础。