荷斯坦奶牛瓜氨酸血症PCR-DHPLC诊断方法的建立及应用

为有效检测荷斯坦奶牛瓜氨酸血症,采用多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立方法。制备纯合突变、野生型的基因模板,优化PCR反应体系,制备异源双链体系,建立DHPLC检测方法,确定最佳的检测条件。对262个血液样本用建立的方法进行检测,发现4个杂合子个体,并通过了测序验证。结果显示,建立的PCR-DHPLC的方法与测序检测结果一致,表明所建立的PCR-DHPLC方法可以用于检测瓜氨酸血症。PCR-DHPLC是一种高通量、准确性高、特异性好的检测方法。     

荷斯坦牛瓜氨酸血症焦磷酸测序检测方法的建立与应用

为建立一种快速高通量的荷斯坦牛瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)分子检测方法,依据CN是由于精氨酸琥珀酸(ASS)合成酶基因编码第86位精氨酸的密码子突变为终止密码子的遗传学基础,利用Assay Design SW软件设计了1对引物和1条测序引物对三种不同基因型的基因材料进行测序分析。用建立的方法对55份进境荷斯坦牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物进行常规测序,结果与焦磷酸测序检测结果一致。研究表明该方法可用于荷斯坦牛瓜氨酸血症的检测,是一种有效的新方法。     

荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的巢式PCR检测方法的建立和应用

为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法,根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列,设计引物,通过条件的优化,建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测序,建立了检测CN和DUMPS方法。取243份临床牛血清样品用巢式PCR检测并测序,发现CN野生型238份,CN杂合子型5份,CN突变型0份;DUMPS野生型236份,DUMPS杂合子型5份,DUMPS突变型2份。所建立的巢式PCR方法灵敏、特异,还兼具高通量的特点,适合口岸对荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的大样品量检测。     

荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征焦磷酸测序检测方法建立与应用

为建立一种快速高通量的荷斯坦奶牛脊柱畸形综合征（complex vertebral malformation,CVM）的分子检测方法,根据CVM是由于SLC35A3基因第4外显子559位处发生G→T突变的遗传学基础,利用Assay Design SW软件设计了1对PCR引物和1条测序引物对三种不同基因型的基因材料进行测序分析,建立焦磷酸测序检测方法。对55份进境荷斯坦奶牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物进行测序,其DNA序列与焦磷酸测序检测结果一致。研究表明该方法是一种有效的新方法,可用于荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征的检测。     

中国荷斯坦奶牛MOET育种体系的建立与实施

与世界大多数国家一样,迄今我国采用的奶牛育种方案,被称为“人工授精育种体系”即“AI育种体系”,其主要特点是：大规模使用种公牛的冷冻精液;在牛群中实施以获得优秀种公牛后代为目的的“定向选配”有计划地通过性能测定和后裔测定等育种措施,选育优秀种公牛;在育种群和生产群中全面使用“验证公牛”。这种育种体系的实施,可以在种子公牛即“公牛父亲”和种子母牛即“公牛母亲”的选择上实现一个较高的选择强度,在牛群的产奶性状和次级性状上获得较大的选择精确性。但AI育种体系最明显的缺点是：由于大规模的后裔测定,耗费大量…     

以色列荷斯坦奶牛

以色列的奶牛只有一个乳用品种，这就是以色列荷斯坦牛。这个品种的发展始于３０年代早期，通过引进弗里生（FRIESIAN）公牛，以后为荷斯坦（HOLSTEIN）公牛，与当地的大马士革母牛杂交。今天大马士革母牛的最后一点的原始痕迹已经荡然无存。经过在热带气候环境下的６０年育种，以色列荷斯坦母牛已经适应当地气候的热应激环境。这一点可以从卡利亚大型合作农场（KibbutzQali－a）得到证实，该农场位于低于海平面３８０米的死海附近，夏季最高气温达到４５．４７摄氏度。１９９８年这个农场的２７６头成母牛平均单产为１１，３２６千…     

世界荷斯坦奶牛联盟简介

世界荷斯坦奶牛联盟是全球奶牛业最权威的组织,成员国大会每四年举行一次,是世界奶牛业的峰会。世界荷斯坦联盟以在全球范围内提高、促进荷斯坦奶牛的繁育为目的,其宗旨是让所有的成员国在统一的水准上,组织和管理各自的良种登记和注册。目前该组织拥有包括美国、荷兰、德国、加拿大、法国、澳大利亚等世界奶业产销大国在内的28个成员国家,亚洲只有日本是成员国。一般各国均以代表团的形式组队参加会议,团长是各国奶协理事长和秘书长,成员多是各专业和各省协会负责人。世界荷斯坦奶牛联盟简介     

日本荷斯坦奶牛最新遗传评价方法

日本的奶牛评价包括公牛（乳用种公牛评价成绩）和母牛（牛群检定牛即生产性能测定）两部分,由日本农林水产省（相当于我国的农业部）的家畜改良中心负责一年发表两次评价结果──《乳用牛评价报告》,现根据笔者在日本了解到的有关奶牛评价方法的情况做一介绍（时间至１９９９年５月发表的结果）。１　评价性状１．１　泌乳性状：牛群检定项目中的７个泌乳性状,包括产奶量（ＭＩＬＫ）,乳脂量（ＦＡＦ）,非脂固形物量（ＳＮＦ）,乳蛋白量（ＰＲＴ）,乳脂率（Ｆ％）,非脂固形物成分率（ＳＮＦ％）,乳蛋白率（ＰＲＴ％）。１．２　体…     

澳洲荷斯坦奶牛及其饲养

澳洲型荷斯坦奶牛是一种中小型乳用品种牛 ,原产于澳大利亚和新西兰 ,我区于 1 988年从四川引进 ,现已推广到合浦、浦北、平南、钦州等县市 ,经我所 1 2年的饲养 ,认为适合我区推广 ,现就该种牛的特点及饲养方法介绍如下。1　澳洲荷斯坦牛特征特性1 .1　体形外貌体型中等偏小 ,头部清秀 ,角形多向前弯曲 ,角基粗呈黑色 ,角尖琥珀色 ,嘴宽 ,鼻孔大 ,鼻镜黑色或带有白斑 ,公牛颈粗短 ,母牛颈细长 ,前胸较宽深 ,胸围大 ,肋骨开张 ,腹大不下垂 ,后躯开阔 ,背平直 ,四肢粗壮结实 ,站立间距开阔 ,蹄壳黑色坚实 ,母牛乳房发达 ,大而匀称 ,乳静脉明…     

牛星状病毒EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

牛星状病毒(BAstV)是我国新发的犊牛腹泻病原,本试验的目的是建立检测BAstV的Real-time PCR方法.根据BAstV流行株的ORFla基因序列设计引物,通过优化反应条件和体系,成功建立基于EvaGreen检测BAstV的Real-time PCR方法.结果表明,该检测方法的Ct值与标准品模板在1.36×1...     

牛瓜氨酸血症、尿苷酸合酶缺乏症PCR-RFLP检测方法的建立及应用

为了解我国奶牛群中牛瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)、尿苷酸合酶缺乏症(Deficiency of uridine monophophate synthase,DUMPS)的携带和发生情况,根据已报道的ASS、UMPS基因核苷酸序列,设计2对引物建立了相应PCR-RFLP检测方法,并对表型正常的436头荷斯坦母牛及93头荷斯坦公牛进行检测.结果共检出CN、DUMPS杂合牛分别为8和6头,携带率分别为1.55%,1.17%.其中CN、DUMPS公牛杂合子分别为2和1头.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR-DHPLC检测新技术的建立及应用

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,根据PRRSV GP5基因的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。以猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪流感病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性和重复性;对阳性标准品的检测结果表明,所建立的PCR-DHPLC法灵敏度可达1.0×101拷贝/μL。对16份疑似病料分别应用本试验所建立的PCR-DHPLC法与SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法、病毒培养法进行检测,发现有15份荧光定量PCR阳性,15份PCR-DHPLC阳性,12份PCR-凝胶电泳阳性。结果表明,建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。     

牛冠状病毒和轮状病毒的双重RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速诊断牛病毒性腹泻疾病的方法,利用本研究室分离鉴定的牛冠状病毒(BCV)和牛轮状病毒(BRV)毒株,根据GenBank中登录的BCV、BRV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增BCV、BRV的引物,经过条件优化,建立了检测BCV、BRV的双重PCR方法,扩增两种病毒的片段分别为244 bp和382 bp.该方法检测BCV和BRV的敏感度分别为1个和100个TCID50/100μL.应用这一方法能从病料中检测出这2种病毒.结果表明该双重RT-PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于这2种病毒性疾病的快速诊断.     

Lack of evidence for an association between MHC diversity and the development of bovine neonatal pancytopenia in Holstein dairy cattle

Bovine neonatal pancytopenia (BNP), a disease of neonatal calves, has been described in a number of European countries since 2006. The disease results in high mortality of calves aged 1-4 weeks and is characterised by severe bone marrow pathology resulting in profound thrombocytopenia and consequent haemorrhagic diathesis. A number of hypotheses including a novel virus infection, plant toxins, a vaccine associated isoimmune disease, or a genetic defect have been suggested to explain the aetiology of this disease. However, as the number of cases in affected herds remains small, it is hypothesised that the genetic background of the calf may influence disease susceptibility. To test this we focused on the class II region of the major histocompatibility complex (MHC) which is often associated with variations in immune response and susceptibility to antibody mediated autoimmune disease. Forty-three cases of BNP and sixty-eight controls were genotyped at the polymorphic class II MHC-DRB3 locus. Twenty DRB3 alleles were identified with seven appearing at frequencies ≥ 0.05. A comparison of the allelic frequencies between diseased and control groups showed that there was no evidence for any significant differences, suggesting that the MHC does not appear to be a predisposing risk factor in the development of BNP in Holstein dairy cattle.     

牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立

为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)方法,本研究采用文献报道的引物和探针,通过优化反应体系,首次建立了检测IBRV核酸的iiPCR方法。结果显示该方法仅特异性检测出IBRV,而对牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛腺病毒3型、牛冠状病毒、牛支原体、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌等病原则不能检出。该方法的检测下限为2.4拷贝/μL质粒标准品,并具有良好的重复性。对临床样品的检测结果与OIE推荐的荧光定量PCR方法的检测结果一致;该方法配合PetNAD核酸萃取试剂盒,从核酸提取到报告检测结果仅需1h,具有操作简便、快速、可现地化的特点。对9个省29份商品化冻精检测结果显示,IBRV阳性率为24%(7/29),表明我国流通的商品化冻精携带IBRV情况普遍。本研究为IBRV的现地检测提供了一个可靠的方法。     

Use of bovine somatotropin for increased skeletal and lean tissue growth of Holstein steers

One hundred-sixty Holstein growing-finishing steers (initial BW of 185 kg) were blocked by BW to determine the effectiveness of long-term bovine somatotropin (bST) administration on lean, skeletal, and carcass measurements. Steers were randomly allocated to 4 treatments (10 steers/treatment) within a block (n = 4 blocks). Treatments were control, no bST (C-C); bST from d 0 to 182 (bST-C); bST from d 183 to slaughter (C-bST); and bST from d 0 to slaughter (bST-bST). Steers received a s.c. injection of placebo or bST at 14-d intervals. Doses were 320 mg of bST/injection from d 0 to 112 and 640 mg of bST/injection from d 113 to slaughter. The last treatment was administered 31 d before slaughter. Steers received a 14% CP (DM basis) diet from d 0 to 182 and 11.5% CP from d 183 to slaughter that consisted of dry, whole-shelled corn and a pelleted protein-mineral supplement. Steers were slaughtered when BW per block averaged 615 kg (d 325, 353, 367, and 381 for the 4 blocks, respectively). Thirty steers were removed from the study because of poor performance with respect to their pen mates, illness, lameness, death, incomplete castration, and incorrect treatment. Serum IGF-I concentrations increased 151% (P < 0.01) from d 7 through 35 in bST-treated steers compared with control steers. During the first 182 d, bST-C and bST-bST steers were heavier (P < 0.01) and had greater (P < 0.01) ADG, G:F, hip height, and hip height gain compared with C-C and C-bST steers. From d 183 to slaughter, C-bST steers had reduced (P < 0.05) daily DMI and greater G:F than bST-C steers. At final slaughter, C-bST and bST-bST steers had greater (P < 0.05) hip height than C-C steers. Noncarcass weight was increased and dressing percent reduced (P < 0.05) in C-bST and bST-bST steers compared with C-C steers. Quality grade was least (P < 0.05) in bST-bST carcasses compared with C-C, whereas bST-C and C-bST carcasses were intermediate. At final slaughter, steers receiving bST had greater (P < 0.05) carcass protein and water composition and lower (P < 0.05) carcass lipid and lipid accretion than C-C steers. Bovine somatotropin was effective in reducing carcass fat and increasing edible lean. Administering bST to young, lightweight steers increased skeletal growth and noncarcass weight without an increase in total carcass weight, but decreased carcass quality.     

鹅细小病毒PCR-DHPLC检测方法的建立

为建立一种敏感、自动化,高通量的检测病料中鹅细小病毒（GPV）的PCR-DHPLC检测方法,本研究首先根据GenBank上GPV标准毒株VP3基因序列设计一对引物,建立检测GPV的PCR方法,然后将PCR检测方法与DHPLC法进行有机结合,建立了GPV PCR-DHPLC检测方法。以GPV、鹅副粘病毒、鸭瘟病毒及正常番鸭胚尿囊液进行特异性试验,结果无交叉反应,表明该检测方法具有较高的特异性。对GPV阳性样品检测结果表明该方法的敏感性较高,是常规PCR电泳法的100倍,且具有较好的重复性。对临床上采集的100份疑似病料,分别应用PCR电泳法和本试验建立的PCR-DHPLC方法进行检测,结果阳性符合率为100%。表明该方法具有特异、敏感、快速、重复性好、可高通量检测等优点,可用于临床样品的大批量检测。     

SMD残留检测的ELISA方法的建立和初步应用

用戊二醛法将SMD与载体蛋白BSA偶联 ,制备合成抗原SMD BSA作免疫原 ,同法合成包被抗原SMD OVA ,免疫健康家兔获得抗血清。分别用双向琼脂扩散试验和ELISA试验对抗血清进行定性定量测定 ,结果表明所获抗血清特异性针对SMD。用所制备的抗血清建立间接竞争ELISA方法。优化了ELISA的工作条件 ,方阵测定确定了包被抗原最佳浓度 (50 μg/mL) ,抗血清最佳稀释度 (1∶1 0 0 ) ,酶标抗体的最适工作稀释度 (1∶50 0 ) ,并建立了ELISA标准工作曲线。工作曲线表明在 1 0～ 2 0 0 0 μg/L浓度范围内呈良好的线性关系。该法检测底限为 63μg/L,低于国际规定残留限量 (1 0 0 μg/kg)和国内规定残留限量 (30 0 μg/kg)的要求。本法同时测定了回收率以及实际样品血清中的SMD的残留含量