环磷酰胺致小鼠生精障碍作用研究

为探讨不同剂量环磷酰胺作用不同时间后诱导小鼠生精障碍的作用,将80只雄性ICR系小鼠随机分成20、40、80mg/kg体重环磷酰胺(CTX)处理组和生理盐水对照组,腹腔注射5d,每2d称重1次,2周和4周后分批检测睾丸指数、附睾指数、精子数和精子畸形率,并结合HE染色检测睾丸组织结构变化。结果显示,作用2周时,高剂量的CTX显著影响体重增长,而中低剂量组只有处理后短时间体重降低明显;睾丸的生精指数变化均不显著,但其组织结构发生不同程度的病理变化。作用4周时,只有高剂量组对体重产生显著的作用;生精指数包括睾丸指数、精子数以及精子畸形率,3个组与对照相比均表现出明显差异;睾丸发生病理学病变的程度随剂量的增加而更加明显。采用40mg/kg CTX腹腔注射5d,作用4周后能建立较为理想的小鼠生精障碍模型。     

生精胶囊促进小鼠精原干细胞增殖的研究

为了探讨体外促进小鼠精原干细胞(SSCs)增殖的可行性,试验取7～8日龄雄性乳鼠睾丸,分离、纯化SSCs并分别接种于普通培养液、神经营养因子(GDNF)培养液和生精胶囊提取液的培养液内进行增殖培养,观察小鼠SSCs的生长状况.结果表明:将SSCs接种于普通培养液3 d后,出现了增殖现象,可见增殖培养产生SSCs克隆,并...     

淫羊藿多糖对醋酸铅致生精障碍小鼠的治疗作用

为观察淫羊藿多糖对生精障碍BALB/c小鼠的治疗作用,将印只BALB/c雄性小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组、淫羊藿多糖高、中、低剂量组,每组10只;除空白组外,其余各组小鼠腹腔注射醋酸铅制备小鼠生精障碍模型。通过灌胃不同浓度淫羊藿多糖及阳性药物维生素E,研究了淫羊藿多糖对生精障碍小鼠精子数量、畸形率、活率,生殖激素水平及睾丸形态的影响。结果:淫羊藿多糖各剂量组能够升高生精障碍小鼠精子密度和精子活率,降低精子畸形率,降低血清卵泡雌激素和黄体生成素水平,升高睾丸组织睾酮含量(P0.01),且各剂量组对生精功能改善作用呈剂量依赖性。形态学观察,淫羊藿多糖可改善小鼠睾丸组织的病理学损害。表明淫羊藿多糖对醋酸铅所致小鼠生精功能的损伤具有治疗作用,作用机制可能与改善或恢复生殖内分泌激素水平有关。     

特效生茸宝对小鼠造血功能和免疫功能的作用

特效生茸宝是由多种中西药组成的复方药物添加剂，具有明显的促进鹿茸生长的作用。为了探讨其作用机理，将特效生茸宝按３个剂量（１／５ＬＤ５０、１／１０ＬＤ５０、１／３０ＬＤ５０）给予实验动物，测定其对造血功能、血清凝集素效价、血清溶血素含量、巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明，高剂量组的多能造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）和定向干细胞（ＣＦＵ－Ｃ）明显高于对照组，高、中剂量均能提高血清凝集素效价并促进巨噬细胞的吞噬活性，各剂量均能提高血清中溶血素含量。因此认为，该制剂对造血功能和免疫功能具有促进作用     

大豆异黄酮对环磷酰胺损伤雄性小鼠生殖功能的修复作用

为探明大豆异黄酮(SI)对环磷酰胺(CTX)所致雄性小鼠生殖功能损伤的修复作用及其机制,本试验将小鼠随机分为空白对照组、模型组(CTX组)、SI低、中、高剂量组[100 mg/(kg·bw)、200 mg/(kg·bw)、400 mg/(kg·bw)]和甲睾酮(MT)对照组,除空白对照组外,其余各组腹腔注射CTX[50 mg/(kg·bw)]连续7 d,构建雄性小鼠体内生精障碍模型,造模第2天开始,SI各剂量组和MT对照组分别灌胃给药,连续30 d后,测定雄性小鼠的睾丸指数、精子密度、精子畸变率;检测血清和睾丸组织中丙二醛(MDA)含量;检测睾丸组织匀浆中琥珀酸脱氢酶(SDH)、碱性磷酸酶(AΚP)、Na⁺-Κ⁺-ATP酶、NF-κB、TNF-α水平;检测睾丸组织总蛋白样本中NF-κB、COX2和iNOS蛋白的表达水平。结果显示,SI各剂量组与MT对照组效果相当;与CTX组相比,SI各剂量组小鼠精子密度显著升高而精子畸变率显著降低,睾丸组织中SDH、AKP和Na⁺-K⁺-ATP酶活性均显著升高(P&...     

牛膝多糖对炔雌醚致大鼠生精损伤的保护作用研究

为研究牛膝多糖对炔雌醚(Quinestrol)致雄性大鼠生殖损伤的保护作用,以20只8周龄成年雄性SD大鼠为研究对象。随机分为4组,分别进行炔雌醚与牛膝多糖处理。试验结束后,取睾丸、附睾、精囊腺和前列腺称重,取精子检测品质,测定睾丸抗氧化酶活性并观察睾丸形态与组织结构,检测Tunel表达。结果表明,炔雌醚引起大鼠生殖器官重量减少,形态萎缩,组织结构异常,精子数量和品质下降,抗氧化酶活性降低;Tunel表达增加。而炔雌醚+牛膝多糖处理组睾丸抗氧化酶活性升高,Tunel表达减少,降低精子畸形、提高精子数量和品质,缓解生精小管损伤,提高生殖器官重量,最终改善雄性大鼠生殖功能。与对照组相比,单独牛膝多糖处理组睾丸抗氧化酶活性、组织结构和精子质量均有一定程度提高。综上表明,牛膝多糖有效抑制了炔雌醚对生殖功能的破坏作用,对雄性生殖功能具有改善作用。     

7日龄小鼠生精上皮单细胞冷冻保存

在DMEM中添加10％小牛血清（NBS），并分别添加不同浓度的抗冻剂二甲基亚砚（DMSO）、丙二醇（PG）、乙二醇（EG）及甘油（G），对7日龄小鼠生精上皮单细胞进行冷冻保存，复苏后台齿蓝染色测定细胞复苏率。结果：当冻存液中DMSO分别为5％、10％、15％、20％时，细胞复苏率分别为77．1％、88．2％、86．5％、73．5％、65．5％，其中10％和15％DMSO组细胞复苏率最高，与其作各组间均差异极显著（P＜0．01）。当冻存液中PG分别为5％、10％、15％、20％、25％时，细胞复苏率分别为66．2％、84．3％、72．1％、69．9％、47．5％，其中10％PG组细胞复苏率最高，与其余各组间均差异极显著（P＜0．01）。当冻存液中EG分别为5％、10％、15％、20％时，细胞复苏率分别为64．9％、81．6％、60．9％、44．7％，其中10％EG组细胞复苏率最高，与其余各组间均差异极显著（P＜0．01）。当冻存液中G分别为5％、10％、20％、25％时，细胞腹苏率均低于10％。10％DMSO组细胞复苏率与10％PG组和10％EG组之间均差异显著（P＜0．05）或极显著（P＜0．01）。结果表明，10％DMSO、10％PG及10％EG均适宜冷冻保存小鼠精原细胞，以及10％DMSO的冻存效果最好，而则不适宜冷冻保存。在含10％DMSO的冻存液中，二步慢速冷冻，液氮储存，37C水浴复苏小鼠精原细胞，是一种具有较高细胞复苏率的冷冻保存方法。     

小鼠生精细胞的分离和体外培养

为了建立一种操作性强、稳定、高效的小鼠生精细胞体外培养体系,从10只8周龄成年雄性健康清洁级昆明小鼠睾丸组织分离出细胞得到混悬液,采用支持细胞和生精细胞共培养方式,通过添加多种细胞培养液,以维持细胞的生长和增殖。结果表明:采用睾丸生精细胞、支持细胞共同培养的方式可得到密度较大的生精细胞,且精原细胞、精母细胞的数量占绝大多数。     

槲皮素对双酚A致小鼠生精功能障碍的治疗作用

将50只雄性昆明小鼠随机分为5组,A组（n=10）正常喂饲,B、C、D、E组（各10只）小鼠均腹腔注射50mg／kg·d的BPA,1次／d,连续注射7d,构造小鼠睾丸损伤模型,同时C、D、E组分别用100、200、400mg／kg·d浓度的Que灌胃7d,A组和B组给予等量生理盐水。记录小鼠的体征、体质量变化及试验结束时睾丸、附睾和精囊腺的质量;试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GsH—Px）和丙二醛（MDA）的含量;酶联免疫法测定血清睾酮（T）、黄体生成素（LH）和促性腺激素释放激素（GnRH）的水平;对睾丸组织进行组织学观察。结果显示：D组200mg／kg·d小鼠体质量、各脏器质量均较B组有明显改善（P〈O．05或P〈0．01）,接近A组,C组和E组只有附睾质量变化显著（P〈0．05）;Que各剂量组血清中的SOD、GSH—Px活性均高于BPA组,差异极显著（P〈0．01）,其中D组抗氧化酶的活性最高;MDA测定结果显示,D组明显降低,差异极显著（P〈0．01）,E组也有所降低,差异显著（P〈0．05）;C、D、E组小鼠血清生殖激素水平均有一定程度的恢复,但D组各生殖激素指标均接近A组;组织学观察见各给药组睾丸生精小管生精细胞层数、精子数目均高于B组,尤以D组200mg／kg·d恢复最为明显。结果表明：Que能够促进BPA致小鼠睾丸生精功能障碍后生精功能的恢复,且最佳剂量为200mg／kg·d。     

不同剂量环磷酰胺对昆明小鼠肝肾组织的损伤作用研究

为研究不同剂量的环磷酰胺对小鼠肝肾组织及功能的损害程度,试验选取40只5周龄健康雌性昆明小鼠,随机分为5组,除对照组外,其余4组小鼠连续3 d分别腹腔注射40、80、120及160 mg/（kg·BW）环磷酰胺溶液,注射后第7天采集肝脏和肾脏组织样品及血清,制备石蜡组织切片及透射电镜切片,观察肝脏和肾脏的组织学变化,检测血清中甘胆酸（CG）、胆碱酯酶（ChE）、血清前白蛋白（PA）、总胆汁酸（TBA）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、血清肌酐（SCr）、尿酸（UA）含量/活性。结果显示,环磷酰胺可引起小鼠肝肾组织病理损害,呈剂量依赖性,肝脏比肾脏更早出现损伤。石蜡切片及透射电镜切片观察结果显示,环磷酰胺对肝脏的毒性作用主要表现在肝索紊乱、肝血窦扩张、微胆管淤胆、门管区及中央静脉周围炎性细胞浸润及纤维增生、组织间出血、肝细胞出现脂肪变性及气球样变性,凋亡及坏死细胞增多。肾脏组织损伤主要表现在出血及纤维增生,肾小管上皮细胞胞浆空泡样变、线粒体损伤、核固缩,上皮细胞基底膜增厚。环磷酰胺对膀胱的损害不严重。与对照组相比,40~160 mg/（kg·BW）剂量组小鼠血清中ChE活性及PA水平,120~160 mg/（kg·BW）剂量组AST活性,80~160 mg/（kg·BW）剂量组BUN水平及80 mg/（kg·BW）剂量组UA水平均显著升高（P<0.05）;其余生化指标与对照组差异不显著（P>0.05）。以上结果表明,环磷酰胺注射剂量在80~120 mg/（kg·BW）时可引起昆明小鼠肝脏和肾脏组织及细胞明显的病理损伤。该研究结果可为选择合适的环磷酰胺注射剂量用以制备动物肝脏免疫抑制模型提供试验依据。     

鸡血藤总黄酮对环磷酰胺所致小鼠肝损伤的保护作用

目的 研究鸡血藤总黄酮对环磷酰胺所致小鼠肝损伤的保护作用。方法 将60只昆明系小鼠随机分为6组,每组10只,试验周期为7 d。对照组小鼠试验全程给予生理盐水。环磷酰胺（CTX）组小鼠1~4 d灌胃给予生理盐水;5~7 d腹腔注射80 mg/（kg·BW）CTX,每天给药1次。鸡血藤总黄酮（TFSD）100组、CTX+TFSD25组、CTX+TFSD50组、CTX+TFSD100组小鼠1~7 d分别灌胃给予100、25、50、100 mg/（kg·BW）TFSD,每天给药1次;试验5~7 d除TFSD100组小鼠腹腔注射生理盐水外,其余试验组腹腔注射80 mg/（kg·BW）CTX,每天给药1次。试验结束后对各组小鼠进行眼球采血及剖检;检测肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）、黄嘌呤氧化酶（XOD）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力,测定血清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）和碱性磷酸酶（ALP）活力,检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）和白介素-1β（IL-1β）含量。结果 环磷酰胺可显著（P<0.05）降低小鼠肝脏中SOD、GSH-Px以及血清中ALT活力,显著（P<0.05）升高肝脏中XOD与MPO活力、血清中ALP活力以及炎症细胞因子IL-1β和IL-6释放水平。25、50、100 mg/（kg·BW）的TFSD处理均可显著（P<0.05）抑制由CTX引起的SOD活力降低,25 mg/（kg·BW）的TFSD处理可显著（P<0.05）提高CTX处理小鼠的GSH-Px活力;50 mg/（kg·BW）的TFSD处理可显著（P<0.05）抑制由CTX引起的XOD和MPO活力升高,且可显著（P<0.05）降低CTX处理小鼠血清中的AST活力;25、50、100 mg/（kg·BW）的TFSD处理可显著（P<0.05）抑制由CTX引起的血清中ALP活力升高,同时降低ALT活力。25、50、100 mg/（kg·BW）的TFSD处理均可显著（P<0.05）抑制由CTX引起的IL-1β水平升高。结论 鸡血藤总黄酮可通过调节小鼠炎症因子释放以及肝组织中氧化还原酶水平对环磷酰胺所致肝损伤提供保护,推荐剂量为25 mg/（kg·BW）。     

蛹虫草多糖对注射环磷酰胺小鼠抗氧化功能的影响

试验旨在阐明蛹虫草多糖（CMP）对小鼠抗氧化活性的影响。选取90只雄性BALB/c小鼠,体重18~20 g,随机分为6组,3个CMP组（低、中、高CMP组）,模型对照组（CY组）、阳性对照组（PC组）及空白对照组（BC组）各1个。CMP组和CY组分别腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺,连续3 d,然后3个CMP组分别灌胃给予17.5、35.0、70.0 mg/kg体重的CMP,BC组和CY组给予生理盐水,PC组灌胃给予70 mg/kg体重的CMP,持续18 d。于最后一次给药24 h后,采集小鼠内脏,测定心脏、肝脏及肾脏匀浆液中T-AOC、MAD、CAT、SOD和GSH-Px水平。结果显示,与CY组相比,3个CMP处理组小鼠内脏匀浆液中的SOD和T-AOC活性均极显著增加（P<0.01）,MDA水平极显著降低（P<0.01）;低剂量CMP组心脏CAT无显著变化（P>0.05）,中、高剂量CMP组心脏CAT水平分别显著（P<0.05）、极显著（P<0.01）提高;除低剂量CMP组肝脏GSH-Px活性显著增加（P<0.05）外,其余CMP组内脏GSH-Px活性均极显著增加（P<0.01）。本试验中CMP可以有效提高小鼠心脏、肝脏及肾脏的抗氧化活性,这为抗氧化新药的研发提供了借鉴。     

The Effect of Cordyceps Militaris Polysaccharides on the Antioxidant Function in Mice Injected With Cyclophosphamide

To investigate the antioxidant effects of the Cordyceps militaris polysaccharides(CMP),90 male BALB/c mice were randomly divided into six groups, three experimental groups (CMP groups), model control group (CY group), blank control group (BC group) and positive control group (PC group). The mice in CMP and CY groups were given cyclophosphamide at 80 mg/kg via intraperitoneal injection for 3 d. Then the CMP groups were administrated 17.5, 35.0 and 70.0 mg/(kg·BW) CMP via gavage, respectively, BC and CY groups were given physiological saline, and PC group was orally administered 70 mg/(kg·BW) CMP, lasting 18 d. At 24 h after the last administration, heart, liver and kidney were collected to measure the levels of MAD, CAT, SOD, GSH-Px and T-AOC in the homogenate.SOD and TAOC activity of three CMP groups increased significantly (P<0.01), and the level of MDA decreased significantly (P<0.01) compared with CY group. As for CAT activity of heart, the value in low-dose CMP group had no significant change (P>0.05), while in middle and high-dose groups had significant (P<0.05) and extremely significant(P<0.01) increase respectively. Except that the hepatic GSH-Px activity increased significantly (P<0.05) in low-dose CMP group, the rest values of GSH-Px activities in all CMP groups increased extremely significantly (P<0.01). The results indicated that CMP could effectively improve the antioxidant function of mice and had the potential to be a good resource of new antioxidant drugs.     

三肽囊素对环磷酰胺诱导的免疫器官细胞凋亡的影响

研究了三肽囊素对环磷酰胺诱导的鸡免疫抑制模型中免疫器官细胞凋亡的影响。将180只1日龄粤黄鸡随机分成环磷酰胺组、正常对照组、三肽囊素组以及三肽囊素 环磷酰胺组。利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dTUP缺口末端标记法(TUNEL)，对不同组鸡的免疫器官细胞凋亡进行计数。结果发现，环磷酰胺组细胞凋亡数比对照组明显增多(P＜0．05)，而三肽囊素 环磷酰胺组细胞凋亡数显著少于环磷酰胺组(P＜O．05)；三肽囊素组的细胞凋亡数比环磷酰胺组少，且差异显著(P＜0．05)。由此可知，三肽囊素对环磷酰胺所诱导的细胞凋亡具有抑制作用。     

长链非编码RNA NEAT1对小鼠精子发生的影响

为研究长链非编码RNA NEAT1对小鼠精子发生的影响,构建针对NEAT1的干扰载体并包装慢病毒,通过将干扰慢病毒注射到成年小鼠睾丸曲细精管和定量PCR,H.＆E.染色等方法观测NEAT1对小鼠精子发生的影响。研究结果表明,NEAT1在睾丸组织和GC-1生殖细胞系中表达;成功构建CD513B-U6-NEAT1干扰载体,利用第三代慢病毒包装系统包装获得干扰慢病毒且干扰效果明显（NEAT1转录本水平下调69%）;慢病毒注射试验结果显示干扰病毒注射组睾丸指数轻微增加,有精子发生的曲细精管比例由97%减少为86%（P〈0.05）,表明小鼠精子发生受到影响,NEAT1具有维持雄性小鼠精子发生的作用。     

纳豆多糖对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的肝肾抗氧化能力的影响

为了阐明纳豆多糖对小鼠肝和肾抗氧化能力的影响和最适作用浓度。用昆明种小鼠以环磷酰胺(80mg/kg)造成免疫低下动物模型,然后以纳豆多糖(200,500mg/kg)灌胃2周。试验中进行了一般症状的观察及体重变化的测定,测定了脏器指数,进行了肝肾的抗氧化特性的检查。试验结果表明,与对照组相比纳豆多糖高剂量组(500mg/kg)、低剂量组(200mg/kg)小鼠肝肾中的丙二醛(MDA)含量明显降低(P<0.05),且纳豆高剂量组和低剂量组比对照组肝、肾组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活力明显升高,纳豆多糖对小鼠肝肾产生抗氧化效果的合适剂量为200mg/kg。     

牛磺酸复合添加剂对免疫低下小鼠免疫功能的影响

【目的】研究在基础饲粮中添加牛磺酸复合添加剂对免疫低下模型小鼠免疫功能的影响,旨在为提高动物免疫机能的营养调控措施提供一定的理论依据。【方法】将80只小鼠随机均分为4组：C和M组小鼠饲喂基础饲粮,H和MH组小鼠给予含有8.8%的牛磺酸复合添加剂的基础饲粮,试验期51 d。M和MH组小鼠于试验第31天起连续4 d腹腔注射70 μg/g BW环磷酰胺（CTX）,制备免疫低下模型,其余小鼠腹腔注射等体积生理盐水。统计整个试验期的日采食量,每周称量小鼠体重,并计算平均日采食量（ADFI）和平均日增重（ADG）。试验结束后,采集小鼠血清及胸腺和脾脏,检测小鼠免疫器官指数、细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫功能及血清中细胞因子和免疫球蛋白水平的变化。【结果】与C组相比,M组小鼠ADFI、耳肿胀度、血清溶血素水平、免疫球蛋白G （IgG）水平显著降低（P<0.05）,ADG、胸腺指数、脾淋巴细胞增殖能力、抗体生成细胞量、腹腔巨噬细胞吞噬能力、白介素6（IL-6）和免疫球蛋白A （IgA）水平极显著降低（P<0.01）,脾脏指数极显著升高（P<0.01）;碳廓清指数和免疫球蛋白M （IgM）水平无显著差异（P>0.05）;与M组相比,MH组小鼠的ADFI、ADG、胸腺指数、脾淋巴细胞增殖能力、耳肿胀度和IgM水平均显著提高（P<0.05）,血清溶血素水平、抗体生成细胞量、腹腔巨噬细胞吞噬能力、IL-6和IgA水平均极显著提高（P<0.01）,脾脏指数显著降低（P<0.05）,碳廓清指数和IgG水平无显著差异（P>0.05）。【结论】该牛磺酸复合添加剂能够改善由CTX所致免疫低下小鼠的固有免疫和适应免疫,改善细胞因子和免疫球蛋白的水平,起到增强小鼠免疫力的作用。     

三肽囊素对环磷酰胺诱导的鸡红细胞免疫功能低下的阻断作用

本文研究了三肽囊素对环磷酰胺诱导的墟岗黄鸡红细胞免疫功能的抑制模型的影响。180只一日龄墟岗黄母鸡随机分成对照组,三肽囊素组,三肽囊素 环磷酰胺组,环磷酰胺组四个组,三肽囊素组和环磷酰胺 三肽囊素组每只鸡肌注0.01mg/kg剂量的三肽囊素;环磷酰胺组和环磷酰胺 三肽囊素组每只鸡肌注40mg/kg剂量的环磷酰胺,对照组鸡注射等量的生理盐水。结果表明,14日龄和35日龄时各试验组鸡的红细胞总数没有显著差异,而在56日龄时,环磷酰胺组显著低于其它三组(P<0.05);从14日龄开始,环磷酰胺纽的RBC-C3bR花环率显著低于其它三组,而环磷酰胺组的RBC-IC花环率显著高于其它三组,并持续到实验结束。结果提示,三肽囊素可阻断由环磷酰胺诱导的鸡红细胞免疫功能低下。     

环磷酰胺对鸡红细胞的微核效应

将３００只２０日龄罗曼鸡随机分为１０组，每组３０只。第１～９组为实验组，分别按体重皮下注射环磷酰胺０．００１、０．０１、０．１、１、２、４、８、１６、３２μｇ／ｇ；第１０组为对照组，注射生理盐水。第９组（３２μｇ／ｇ）和对照组于注射后０、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２ｈ，采血涂片，瑞氏染色并观察；而其他各组于注射后１６ｈ，采血涂片，瑞氏染色并观察。结果表明，环磷酰胺０．００１μｇ／ｇ剂量组，红细胞微核细胞率、微核率与对照组无明显差异，其他各组微核细胞率、微核率随环磷酰胺剂量的增加而升高，二者呈正相关（ｒ＝０．８），而白细胞数则随环磷酰胺剂量的增加而逐渐减少；从时间上看，随着环磷酰胺作用时间的延长，微核细胞率和微核率逐渐增加，至１６ｈ达到高峰，以后随时间的增加而减少。鸡红细胞微核率的变化，说明环磷酰胺的毒性可直接影响动物遗传物质，也说明鸡红细胞对环磷酰胺的毒性作用非常敏感。