河北省猪圆环病毒3型流行病学调查及遗传变异分析

为了解猪圆环病毒型(porcine circovirus3,PCV3)在河北省的流行情况及遗传变异特点,本研究在2017年2月至2018年7月间,从河北省不同地区60个猪场采集了310份不同临床症状表现的发病猪组织样本,应用PCR方法对其进行检测。结果显示该地区PCV3阳性率为16.5%(51/310),猪场阳性率为45.0%(27/60),对不同临床症状发病率分析显示PCV3在表现为繁殖障碍及腹泻猪群中具有较高的阳性率,且易与PCV2发生共同感染。对获得的8株PCV3的cap基因进行测序及同源性分析显示,所得8条序列之间的核苷酸相似性为98.0%～99.7%,与24条国内外参考株之间的核苷酸相似性为98.0%～100.0%。对cap基因所推导的氨基酸序列进行分析发现cap基因的主要突变位点发生在24,27,77及150位,其中24和27位主要发生了A24V和R27K变异。对32条序列进行进化树的构建发现,进化树可分为3a、3b和3c 3个基因群,河北分离株主要分布于3a基因群和3c基因群,表明了河北省PCV3流行株相对稳定。我们的研究结果为PCV3在河北省的流行及进化特点提供了理论参考,这些数据可为该地区PCV3的诊断及综合防控提供科学依据。     

广西壮族自治区猪圆环病毒2型（PCV2）分子流行病学调查及遗传变异分析

[目的]了解猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）在广西壮族自治区的流行情况及遗传特征。[方法]采用PCR方法对广西壮族自治区不同地区送检的病料进行PCV2检测和全基因组序列扩增。应用BioEdit、Mega 7.0、RDP 5和SimPlot(ver 3.5.1)软件对获得的24株PCV2毒株全基因组序列进行核苷酸序列相似性、遗传变异和重组分析,并对Cap蛋白氨基酸序列变异位点进行分析。[结果]PCV2广西株基因组大小均为1 768 bp;核苷酸序列相似性分析显示,广西株与参考株PCV1～PCV4的相似性在44.7%～99.7%,与PCV3亲缘性最低;广西株为PCV2b和PCV2d型,PCV2d流行最为广泛;全基因组序列重组分析显示,部分广西株存在重组事件;与疫苗株AY686764-PCV2b和HM641752-PCV2b相比,PCV2广西株的Cap蛋白氨基酸序列共有21个位点发生变异。[结论]PCV2广西流行毒株以PCV2d型为主,部分毒株具有重组现象,部分位点发生独特的氨基酸变异,遗传进化趋势明显。研究结果为广西壮族自治区PCV2的流行病学...     

河北秦皇岛及周边地区PCV2流行病学调查及其ORF2基因遗传演化分析

为了解猪圆环病毒2型(PCV2)在河北地区流行特点及遗传演化规律,本研究参照GenBank登录的部分PCV2全基因序列,经序列比对后选取保守区域设计一对PCV2检测引物,利用PCR方法对2015年～2019年间在河北秦皇岛及周边地区收集的379份来源于不同病猪的肝、脾、肺、肾、肠、脑、淋巴结及血清等样品开展PCV2的分...     

猪圆环病毒2型的流行病学调查

自2002年1月份以来，笔者对安徽、江苏、江西、山东、湖北、上海等地17个集约化养猪场，进行了猪圆环病毒2型（PCV-2）感染的流行病学调查。此次调查，我们运用PCR方法，调查范围主要为断奶仔猪多系统衰竭综合症疑似发病猪场及正常猪群不同年龄阶段的猪。结果疑似猪群中，PCV-2检出率为60.6％（43／71），屠宰猪群的阳性率仅为6.7％（1／30），而初生仔猪（2-3日龄）的阳性率亦可达42.9％（15／35）。表明我国猪群中普遍存在PCV-2的感染。     

广西猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

结合流行病学、临床症状、病理变化，采用PCR技术，对2004年1月至2005年5月采自广西14个市97个疑似猪圆环病毒2型（PCV2）感染发病猪场的197份组织病料（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测；同时，对鉴定为PCV2阳性的组织病料和猪场进行了猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪流感病毒（SIV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）的检测，另外，对6个地（市）11个生猪屠宰场采集的外观健康屠宰猪的295份组织样品（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测。结果显示，在197份组织样品中检出PCV2阳性病料108份，平均阳性率为54．82％（108／197），阳性猪场62个，平均阳性率为63．92％（62／97）。PCV2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染的组织病料总阳性率为42．13％（83／197），混合感染的猪场总阳性率为57．73%（56／97）。从21头外观健康屠宰猪的组织样品中检测到PCV2，阳性率为7．10％。由此可见，PCV2感染在广西猪群中已普遍存在，混合感染和健康带毒现象使病情更加复杂。     

四川省兔出血症病毒2型流行病学调查及遗传变异分析

为了解四川省兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus type 2,RHDV2)的流行情况及分子遗传变异特征,采集全省范围内的7525份样品,其中发病兔场肝脏组织样品117份、环境拭子样品243份,受监测兔场血液样品3340份、环境拭子样品3825份,采用商品化荧光RT-PCR...     

2015-2018年豫南地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查

为了解豫南地区猪圆环病毒2型(PCV2)的流行情况及毒株的分子变异特征,采用PCR技术,对2015年—2018年豫南地区157份疑似PCV2感染的组织样品进行PCR检测,并对部分PCV2阳性样品进行了全基因组克隆测序和序列分析.结果显示,43份为PCV2阳性,阳性率为27.39％,对部分阳性样品进行克隆测序获得了13株...     

江苏省规模化猪场猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

结合流行病学、临床症状、病理变化,采用PCR技术,对2006年1月至2007年6月采自江苏省9市15个规模化猪场疑似猪圆环病毒2型(PCV2)感染发病的186份组织病料(脾、肺、淋巴结)进行了PCV2检测。结果显示:在186份组织样品中检出PCV2阳性病料118份,平均阳性率为63.44%;阳性猪场15个,猪场阳性率为100%。由此可见,PCV2感染在江苏省规模化猪场中已普遍存在。     

西宁市猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了西宁市8个规模养殖场和部分散养户的161份猪血清样品的猪圆环病毒2型（PCV2）抗体。结果显示，所有被检猪场均有PCV2抗体阳性猪存在，161份血清样品中PCV2抗体阳性率为86．95％。从上述样品中随机抽取28份样品，用PCR方法检测了PCV2ORF1基因；结果，从13份血清中扩增到了特异性PCV2ORF1基因，阳性率为46．42％。证实，西宁市猪场和散养猪群中存在PCV2感染。     

规模化猪场猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

20 0 1年 11月至 2 0 0 2年 8月 ,对北京、天津、广东、深圳、山东、山西等地 12个规模化猪场猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染发病群猪进行了临床发病情况调查 ,并采用 PCR方法对所收集的 5 5份组织病料进行 PCV2的检测 ,结果表明 ,12个猪场中有 11个猪场发病猪群表现为断奶后多系统衰竭综合征 ,1个猪场表现为皮炎和肾病综合征。由此可见 ,PCV2感染在我国规模化猪场已普遍存在     

安徽部分地区冬春季仔猪腹泻的流行病学调查与分析

2012年1-3月间,通过定点监测、问卷调查、实地调查和实验室检测等方式,对安徽省16个市、50个县的757个养猪场(户)的仔猪腹泻发病情况进行了流行病学调查,并采集74份发病或病死仔猪样品肠内容物进行实验室检测.结果表明,安徽省仔猪腹泻主要以流行性腹泻、猪传染性胃肠炎为主,其中猪流行性腹泻病毒阳性率为89.2％,猪传染性胃肠炎病毒样阳性率为10.8％,饲养管理条件差和环境气候多变等是冬春季仔猪腹泻多发的重要诱因.     

2013~2017年江西省猪圆环病毒2型分子流行病学调查

为掌握江西地区猪圆环病毒2型（PCV2）的分子流行病学及其遗传变异情况,本研究运用实验室已建立的PCR方法对2013~2017年采集自江西省南昌市、宜春市、新余市、赣州市、吉安市、九江市、上饶市、抚州市、景德镇市、鹰潭市等10个地区的1 082份疑似PCV2感染猪病料组织进行病原学检测,并通过PCR扩增、克隆和基因测序对PCV2的全基因组序列进行分析。研究表明,1 082份病料中有610份为PCV2阳性,总阳性率为56.4%,其中2013~2017年阳性率分别为52.7%、48.8%、58.5%、71.0%和67.4%。共获得89株PCV2全基因组序列,其中有83株为PCV2b基因型,其中53株归类于PCV2b-1C基因亚群,30株归为PCV2b-1A/1B基因亚群;6株为PCV2a型。测序毒株与参考毒株ORF2基因核苷酸、氨基酸序列同源性分别为88.9%~100.0%和86.0%~100.0%;氨基酸序列分析表明,Cap蛋白存在20个氨基酸突变位点。本研究表明,江西地区猪群中PCV2的主导基因型为PCV2b,其中又以PCV2b-1C基因亚群占据主导地位,同时也存在少量PCV2a基因型。     

猪圆环病毒2型、猪巨细胞病毒和TTV-2混合感染的流行病学调查

本研究根据猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2、猪巨细胞病毒（PCMV）gB基因和TTV2非编码区序列合成引物,利用PCR方法对2009年来自江苏、浙江、上海、广东和广西等5个省市76个患病猪群的仔猪病料进行了病原学检测。结果显示,PCV2阳性率64.5%（49/76）,TTV2阳性率47.4%（36/76）,PCMV阳...     

Serological Investigation and Genomic Characterization of PCV2 Isolates from Different Geographic Regions of Zhejiang Province in China

Sera collected from 46 swine farms in Zhejiang province were evaluated for the presence of antibodies to PCV2 using an indirect-fluorescent antibody procedure. In addition PCV2 isolated from superficial inguinal lymph node samples collected from 40-to 90-day-old pigs with clinical signs of post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) using the PK-15 cell line were sequenced and compared. Overall seroprevalence of PCV2 antibody averaged 58.34% for all samples. Breakdown of serology by groups was as follows: 59.38% for sows, 57.41% for post-weaning piglets, 44.83% for Landrace sows and 64.28% for Landrace piglets. The seroprevalence of Landrace sows was higher than that of Yorkshire and Duroc sows, but non-significant (p > 0.05). Serological analysis also showed that seroprevalence of PCV2 antibody was a negative correlation to that of PRRSV antibody. The complete genomes of five PCV2 isolates identified in the herds with PMWS consisted of 1767nt, containing the 11 potential ORFs. Genome of the virus isolates shared 93.8% to 99.8% identity with PCV2 reference strains from GenBank, 76.6% to 77.9% identity with PCV1. Phylogenetic analysis indicated that there were two subgenotypes within PCV2: subgenotype I (1767 nt) and subgenotype II (1768 nt).     

猪圆环病毒Ⅱ型Rep基因在PK15细胞中的表达及特性

为研究猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Rep基因在PK15细胞中的表达特性，通过PCR方法克隆了PCV2杭州株(HZ0201)Rep基因全长945bp片段，与真核表达栽体pCI—neo构建为重组质粒pCI-PCV2-Rep。pCI-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞后48h，通过RT-PCR可检测到PCV2 Rep mRNA的转录；用猪PCV2多抗血清作间接免疫荧光试验，可检测到Rep基因表达产物。在表达量低的细胞中，PCV2 Rep蛋白主要位于PK15的细胞浆，在表达量高的细胞中，细胞浆和细胞核中均含有大量的Rep蛋白，表明Rep对PK15细胞的细胞浆和细胞核的亲嗜性没有明显差别。     

猪圆环病毒2型Cap羧基端多肽原核表达及抗原性分析

本研究用PCR方法获得猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白基因,经酶切后将ORF2 3′端部分基因克隆至原核表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌BL21,加入终浓度为0.3 mmol/LIPTG,在30℃诱导表达6 h后,经SDS-PAGE及western-blot分析,目的基因得到正确表达,大小约为40 ku。收集菌体并进行超声裂解后证实,表达产物以可溶蛋白与包涵体共同存在。对可溶蛋白与包涵体分别进行纯化,分别用做ELISA包被抗原检测PCV2抗体,结果两者无明显差异。     

PRV、PCV2与PPV三重PCR检测方法的建立与初步应用

为建立可同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)与猪细小病毒(PPV)的三重PCR方法,根据Gen Bank登录的病毒相关基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上3种病毒的PCR诊断方法,扩增的目的片段长度分别为192 bp(PRV)、255 bp(PCV2)和759 bp(PPV)。对PRV、PCV2和PPV的核酸检测最低浓度分别为:2.5×10-2,2.2×10-3和3.7×10-2ng,证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性。应用该方法对56份临床样品进行检测发现,PRV、PCV2和PPV的阳性率分别为16.1%、50.0%和19.6%,二重感染率为12.5%,三重感染阳性率为3.6%。该方法的成功建立为快速高效地检测以上3种病毒提供了有效手段。