30日龄犊牛粪源大肠杆菌耐药性调查

旨在调查新疆某牛场犊牛粪源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况。对该牛场92头30日龄犊牛进行直肠粪样采集,采用常规方法进行大肠杆菌的分离鉴定,利用纸片扩散法对分离菌株进行药物敏感性试验。结果表明,从92份犊牛粪便样本中共分离到92株大肠杆菌,分离率为100%;分离菌株对阿米卡星(93.75%)、恩诺沙星(64.50%)、诺氟沙星(59.30%)、庆大霉素(57.14%)4种抗菌药物的耐药性较强,耐药率均超过50%;对阿莫西林/克拉维酸钾(36.30%)、阿莫西林(26.00%)、环丙沙星(13.60%)3种抗菌药物的耐药率也相对较高;对氨苄西林的敏感性最高,耐药率仅为3.03%。综上提示,该牛场犊牛粪源大肠杆菌对不同抗菌药物产生了一定程度的耐药性,建议该牛场应在药物敏感性试验结果的指导下合理选择抗菌药物。     

800株不同动物源大肠杆菌的耐药性监测

采用微量稀释法,检测了2007年12月分离自四川省5个市的牛源、猪源、鸡源800株大肠杆菌对13种抗菌药物的敏感性.结果显示,分离菌株的耐药率除阿米卡星仅5.9%外,其余药物均超过35%,对磺胺异(口惡)唑、磺胺甲嗯唑+甲氧苄啶、氨苄西林的耐药率较高,分别为100%、96.6%、75.8%;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种以上药物的菌株占92.6%.不同地区及不同动物源大肠杆菌耐药水平存在差异.其中成都地区耐药性最严重,鸡源大肠杆菌耐药率最高.监测结果表明,四川省动物源大肠杆菌的耐药现状已不容乐观,有必要加强耐药性监测,指导兽医临床合理使用抗菌药物.     

峨眉黑鸡粪源大肠杆菌的耐药性分析

为分析峨眉黑鸡粪源大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药性,本试验采集峨眉黑鸡直肠拭子样本,分离并鉴定大肠杆菌,采用Kirby-Bauer法对细菌菌株进行18种抗生素的药敏试验。结果表明:峨眉黑鸡粪源大肠杆菌对环丙沙星和复方新诺明具有极强的耐药性,而对诺氟沙星和氯霉素的敏感性较高;峨眉黑鸡粪源大肠杆菌对18种常用抗菌药物具有耐药性的占22.2%,而具有敏感性的占77.7%,其中高度敏感占11.1个百分点,中度敏感占22.2个百分点,低度敏感占44.4个百分点。     

银川地区鸡源与牛源大肠杆菌耐药性比较

为了了解银川地区规模化养殖场大肠杆菌的耐药情况,试验采用药敏纸片法测定了160株大肠杆菌对11种抗菌药物的耐药情况。结果表明:鸡源和牛源大肠杆菌对美罗培南的敏感率均为100%;有69株鸡源大肠杆菌对庆大霉素、阿莫西林/克拉维酸、氯霉素及环丙沙星的敏感性比较高,而对头孢唑啉、多西环素和复方新诺明的耐药率较高,耐药率最高的是氨苄西林和萘啶酸,达到了70.00%以上。91株牛源大肠杆菌对11种抗菌药的敏感性都比较高,除氨苄西林外,其他药物的敏感率均在70.00%以上。所有分离菌株最多对10种药物耐药,鸡源大肠杆菌中4耐菌株最多,占21.71%,而牛源大肠杆菌中有54株菌对所有抗菌药物都敏感。     

猪源大肠杆菌耐药性的检测与分析

为了对福建省龙岩地区猪源大肠杆菌进行分离培养,开展大肠杆菌耐药性调查,试验采用纸片扩散法测定了各分离菌株对23种抗生素的敏感性。结果表明:大肠杆菌分离菌株对四环素、多西环素高度耐药,耐药率为100%;对氨苄西林、氟苯尼考、氯霉素、复方新诺明、磺胺异恶唑的耐药率也均在90%以上;对美罗培南、阿米卡星敏感率在80%以上。说明福建省龙岩地区猪源大肠杆菌分离菌株对各抗生素的敏感性不同。     

鸡源大肠杆菌多重耐药性的监测

为了了解和掌握鸡群中大肠杆菌耐药菌株的产生情况和耐药程度,了解其对各种抗菌药物的敏感程度,自哈尔滨地区部分鸡场分离、鉴定出80株鸡源大肠杆菌临床株,采用纸片扩散法测定30株分离菌株对18种抗菌药物的敏感性。结果表明:鸡源大肠杆菌分离株对各抗生素的敏感性不同,且多重耐药现象严重;分离的菌株对阿莫西林/克拉维酸钾、氨苄西林、环丙沙星的耐药率为100%,但对氨曲南、安普霉素、多黏菌素B高度敏感,对庆大霉素、新霉素较敏感。     

重庆一例猪源及鸡源大肠杆菌的分离鉴定和药敏试验

为了解重庆市北碚区龙凤桥镇养殖场中大肠杆菌对抗菌药物的敏感性,笔者在该镇某猪场及某鸡场采集了5份猪粪及10份鸡粪,从中分离出大肠杆菌,随后进行药物敏感性检测。结果显示:在15份粪便中分离到了15株大肠杆菌,包括5株猪源性大肠杆菌和10株鸡源性大肠杆菌;药物敏感性试验表明,这15株大肠杆菌的耐药率很高,2/3的菌株对超过23种抗菌药物有耐药性。     

雁源大肠杆菌耐药性的检测与分析

对养殖场雁源大肠杆菌进行分离培养,开展耐药性调查。采用纸片扩散法测定各分离菌株对20种抗生素的敏感性。结果表明:雁源大肠杆菌各分离株对各抗生素的敏感性不同。对氨苄西林、四环素、氯霉素和复方新诺明的耐药率均在80%以上,对头孢他啶、阿米卡星和亚胺培南敏感率均在70%以上。     

陕西省部分地区鸡源A型产气荚膜梭菌分离株的药敏试验

通过应用纸片法对52株分离自陕西部分地区的A型鸡源产气荚膜梭菌分离菌株进行药物敏感性检测,了解各菌株对常见抗菌药物的耐药状况。结果分离菌株对磺胺异恶唑、复方新诺明、强力霉素耐药率较高,均在70%以上;对万古霉素、氯霉素、杆菌肽的敏感率均在80%以上;大部分菌株为多重耐药。结果表明,陕西部分地区的鸡源性产气荚膜梭菌的耐药性较为严重。     

粤西地区分离的鸡源大肠杆菌耐药性检测

用纸片扩散法测定粤西地区田间分离的19株鸡源大肠杆菌对11种常用抗菌药物的耐药性。结果表明,19种大肠杆菌对抗菌药物的耐药性存在较大差异,其中显示出高敏感性药物为头孢噻肟和氟苯尼考,中度敏感的药物为安普霉素、黏菌素、阿米卡星和乙酰甲喹,大肠杆菌菌株对其余大部分药物出现耐药。     

色氨酸水平对12～17周龄金定蛋鸭抗氧化性能影响的研究

试验旨在通过研究不同水平色氨酸对12~17周龄金定蛋鸭抗氧化指标的影响,最终确定最佳的色氨酸水平。试验采用单因素完全随机分组法,将12周龄健康的金定蛋鸭300只随机分成5组,每组设6个重复,每个重复10只。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组饲喂的色氨酸水平依次为0.199%、0.220%、0.240%、0.260%、0.300%。采用二次曲线方程确定12~17周龄金定蛋鸭色氨酸的最佳水平。结果表明:0.250%~0.267%水平的色氨酸能显著提高试鸭血清和肝脏过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.05),显著提高试鸭肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05),但是对试鸭血清SOD活性影响不显著(P>0.05),显著降低试鸭血清和肝脏丙二醛(MDA)浓度(P<0.05)。综上,0.250%~0.267%水平的色氨酸对12~17周龄金定蛋鸭抗氧化功能具有最好的调节作用。     

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫效力研究

为评估重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫保护效果,本研究将该疫苗按照现地免疫程序分别接种10日龄白羽肉鸡和14日龄黄羽肉鸡,疫苗接种前和接种后每周采血,分离血清,检测H5亚型Re-8株和H7亚型H7-Re1株禽流感病毒(AIV)HI抗体滴度,并在初次免疫后3周和出栏时以鼻腔感染方式分别进行攻毒试验。结果显示,免疫前,所有肉鸡血清中H7亚型H7-Re1株AIV HI抗体滴度均低于1log2,H5亚型Re-8株AIV平均HI抗体滴度分别为5.3log2(白羽肉鸡)和4.1log2(黄羽肉鸡);一次免疫的白羽肉鸡在免疫后3周至出栏时,2种亚型AIV平均HI抗体滴度在6.0log2~6.7log2;2次免疫的黄羽肉鸡在初次免疫后3周至出栏时,2种亚型AIV平均HI抗体滴度均在6.0log2以上。在一次免疫后3周时和出栏时,采用高致病性H5、H7亚型AIV攻毒后,对照组白羽肉鸡和黄羽肉鸡均全部死亡,免疫组白羽肉鸡和黄羽肉鸡均不发病、不排毒、不死亡,获得100%的免疫保护。本研究结果表明,重组AIV二价灭活疫苗对商品肉鸡具有良好的免疫效果,为该疫苗的现地应用提供了参考依据。     

不同季节收获的星星草对绵羊采食量和养分消化率的影响

旨在研究不同季节收获的星星草(Puccinellia tenuiflora)对绵羊采食量及养分消化率的影响。选用平均体重为30.37±2.15kg的乌珠穆沁公羊12只,随机分为4个处理,每个处理3个重复,分别饲喂四季收获的星星草。试验绵羊采取单笼饲养,预饲期15d,正式试验期7d,自由采食和饮水,采用全收粪法进行消化代谢试验。结果表明:绵羊四季采食星星草干物质含量分别为412.42、639.23、741.49和321.30g/d,秋季显著高于春季和冬季的干物质采食量(P<0.05);秋季星星草有机物消化率显著低于其他季节(P<0.05);不同季节的星星草对绵羊的碳、氮采食量均有显著影响(P<0.05),饲喂不同季节星星草的绵羊均处于氮的负平衡状态,分别为-1.12、-0.78、-0.13和-3.16。总之,星星草低的含氮量和采食量是限制星星草饲喂价值的重要因素。     

MDCK细胞中IFN-γ诱导的免疫相关GTP酶在弓形虫PVM表面的定位研究

为探究犬MDCK细胞中γ-干扰素(IFN-γ)诱导的免疫相关的GTP酶在刚地弓形虫(T.gondii)的纳虫空泡膜表面的定位情况,本研究采用慢病毒包装载体将免疫相关的GTP酶(Irgb11)与GFP的融合基因(Irgb11-GFP)引入犬MDCK细胞中,经荧光鉴定和western blot检测到Irgb11-GFP融合蛋白的表达,表明构建了过表达Irgb11的细胞系。采用IFN-γ诱导该细胞系24h后,接种弓形虫PLK株,以间接免疫荧光试验检测,并通过激光共聚焦扫描显微镜观察,结果显示Irgb11-GFP蛋白获得表达并能够与弓形虫PLK株的纳虫空泡膜(PVM)发生共定位,表明在IFN-γ存在的情况下,犬MDCK细胞中的Irgb11可以被募集到弓形虫PVM表面,从而发挥其破坏弓形虫PVM的功能。本实验为进一步研究犬细胞中抑制弓形虫生长的机制奠定基础。     

人工感染鸭源新城疫病毒对绍鸭β-防御素和细胞因子基因表达的影响

试验旨在探讨人工感染鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对绍鸭β-防御素(avianβ-defensins,AvBDs)和细胞因子基因表达的影响。选用45只20日龄SPF绍鸭,随机分为攻毒组(27只)和对照组(18只),攻毒组采用滴鼻点眼的途径(108.38 EID50)接种鸭源NDV强毒株(Md/CH/LGD/1/2005),对照组接种磷酸盐缓冲液。在攻毒后24和48h,从对照组及攻毒组各随机取6只鸭屠宰,分别采集肾脏、肺脏、气管、腺胃、骨髓、脾脏、盲肠扁桃体、哈德氏腺、法氏囊9个组织,运用实时荧光定量PCR法检测组织样品中9种AvBDs和细胞因子的表达量;剩余鸭每天持续观察,每隔4d采血1次,直至24d,检测血清抗体水平;于攻毒后24、48、72和120h采集咽喉及泄殖腔拭子,以确定排毒周期。结果表明,感染该NDV毒株后,鸭没有临床发病症状和死亡情况发生;感染后鸭排毒开始于攻毒后第1天,到第5天停止,在攻毒组咽喉及泄殖腔拭子中均检测到NDV。抗体水平检测结果显示,该NDV能够诱导鸭体内产生抗NDV特异抗体。实时荧光定量PCR结果发现,与对照组相比,感染后24h,部分鸭组织中AvBD1、AvBD2、AvBD5、AvBD6、AvBD9和AvBD16表达量均显著升高(P<0.05);感染后48h,AvBD1和AvBD6在部分鸭组织中表达量均显著上调(P<0.05);感染后48h法氏囊中白细胞介素6(IL-6)和脾脏中干扰素γ(IFN-γ)的表达量明显低于感染后24h的表达量。综上所述,该鸭源NDV毒株感染可诱导绍鸭体内在早期产生天然免疫反应,这些反应可能与病毒在机体内复制有关。     

猪链球菌2型05ZYH33菌株具有N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性蛋白的鉴定及功能研究

为了研究猪链球菌2型(SS2)05ZYH33菌株是否具有N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)及同工酶,本研究通过同源蛋白比对,发现05ZYH33菌株表面蛋白SSU050630 C端Ss GH20结构域与肺炎链球菌(S.pneumoniae)的NAG Str H的GH20-1结构域具有60%的同源性;经基因克隆、蛋白表达及纯化后的酶活性分析表明Ss GH20具有NAG活性,且其活力为371 U/mg蛋白;其最适反应温度为50℃、最适p H为5.5;其Km值为0.69。通过构建SS2 ssu050630基因缺失株及全菌酶活性测定,显示SS2 05ZYH33菌株具有NAG活性,而ssu050630基因缺失后的菌株则失去了NAG活性,表明SSU050630是SS2 05ZYH33菌株唯一具有NAG活性的蛋白。本研究为进一步探究Ss GH20在SS2致病中的作用及SS2逃避宿主免疫反应的机制奠定了基础。     

转录因子JunD在HIV-1前病毒DNA转录调控中的作用研究

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)潜伏感染的形成与AP-1家族蛋白的转录调节作用密切相关。为研究AP-1家族成员JunD分子在HIV-1潜伏感染形成中的作用,本研究基于可支持HIV-1复制的T细胞系Jurkat,构建敲除JunD和稳定(过)表达JunD的细胞系;拯救HIV-1假病毒并分别感染对照细胞、JunD敲除以及JunD稳定表达的细胞系,通过荧光素酶技术检测HIV-1前病毒DNA转录水平的变化。结果显示,与对照组相比,JunD敲除显著抑制了HIV-1的复制,而过表达JunD则促进了HIV-1的复制。该结果表明,JunD参与了HIV-1前病毒DNA的转录调控,并可能由此影响HIV-1在宿主细胞内的复制。本实验为研究激活HIV-1细胞潜伏感染的靶点提供了实验数据。     

一株重配型H1N2猪流感病毒的进化分析及对小鼠的致病性

为了进一步了解我国辽宁省猪流感(SI)的流行情况及病原的进化规律,对2016年年末在辽宁省某生猪屠宰场进行SI病原学监测时分离到的一株H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Liaoning/FX575/2016(简称FX575)进行全基因组序列测定,通过对其8个基因片段的基因来源进行分析,确定基因型;构建系统进化树;分析相关分子特征;进一步以6周龄雌性BALB/c小鼠为感染模型,通过测定感染后小鼠的体重变化和脏器病毒含量评估病毒的致病性。结果显示:FX575为一株三重重配型的H1N2病毒,遗传进化分析结果显示病毒的HA基因来自于欧亚类禽型H1N1(EA H1N1)分支的SIV,NA基因来自于北美三重配型H1N2分支的SIV,6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M和NS)均来自于2009/H1N1分支的病毒。以10~6EID₅₀的剂量经鼻腔途径感染小鼠后,能够引起小鼠出现明显的体重下降,其中有1只小鼠在感染后第7天体重下降的比率超过25%,判为死亡;感染后第3天在小鼠肺及鼻甲骨中均检测到较高滴度的病毒,含量分别为4.82、4.20 log₁₀EID₅₀·mL^-1。结果表明SIV在不断流行的过程中,不同基因型病毒之间发生重组导致出现基因三重配的病毒,病毒对小鼠呈现中等致病力特征,提示应进一步加强对SI的主动监测,从而降低病毒对兽医及公共卫生学风险。     

抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用

Toll样受体3(TLR3)是激发机体天然免疫的模式识别受体,为了制备能与天然结构的鸡TLR3(chTLR3)蛋白结合的单克隆抗体,将前期构建的可以在细胞内表达的真核重组质粒pVAX1-Igk-chTLR3免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗chTLR3单克隆抗体;并应用该抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术检测镉中毒雏鸡外周血淋巴细胞与脾内chTLR3的表达变化。结果发现,获得1株阳性杂交瘤细胞,该细胞株单个细胞染色体数量为(94±2)条,细胞上清效价为1∶25,抗体亚类鉴定为IgG3,细胞上清能够与原核表达的chTLR3胞外区蛋白及鸡外周血淋巴细胞中的chTLR3特异性结合。应用此抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术均能够在对照组和染镉组雏鸡外周血淋巴细胞及脾内检测到chTLR3的蛋白表达。结果表明,成功制备了具有天然活性的chTLR3单克隆抗体,该抗体可用于Western blot、间接免疫荧光技术及流式细胞术研究chTLR3在鸡组织细胞的分布定位、表达变化,为示踪chTLR3蛋白分布、表达及研究其在鸡发病机制中的作用提供了重要的物质基础。     

抗猫细小病毒嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达与鉴定

为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb(3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质粒,经昆虫杆状病毒表达系统对重组嵌合抗体进行表达。SDS-PAGE和western blot试验显示鼠-犬嵌合抗体重链为55ku、轻链为25ku。间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗犬IgG和FPV特异性结合。上述结果表明,嵌合抗体保留了原MAb3EB对病毒特异结合能力的基础上,将鼠源恒定区替换为犬源NAb的恒定区。病毒中和试验表明嵌合抗体保留了3EB对FPV、CPV的中和活性。本研究首次通过昆虫杆状病毒表达系统表达了抗FPV、CPV的嵌合抗体,降低了原MAb的免疫原性,对FPV、CPV病临床治疗用抗体药物的研制具有重要指导意义。