草地早熟禾BBML基因的克隆及表达模式分析

为探究婴儿潮(BABY BOOM,BBM)基因诱导草地早熟禾(Poa pratensis)体胚发生的潜在功能,本研究采用同源克隆方法获得PpBBML(PpBBM-like)基因,并对其进行生信分析、亚细胞定位和表达模式分析。结果表明：PpBBML编码的蛋白具BBM特有的bbm-1基序且定位于细胞核,并与小麦(Triticum aestivum)BBM亲缘关系最近。PpBBML的表达水平存在组织特异性,表达量为花药>茎基>幼叶>根茎>老叶>不定根。6-BA,NAA(除0 h外),MeJA和EBR(除4 h外)处理后的PpBBML表达量均高于CK;GA₃处理后的PpBBML表达量均低于CK。在仅添加生长素的愈伤组织诱导培养基上,其表达量在接种第2 d最高。综上所述,PpBBML是AP2亚家族的转录因子基因,其表达量在幼嫩组织中最高且受到不同激素的诱导,并在愈伤组织形成初期表达量急剧上升,因此,该基因可能具有诱导草地早熟禾胚性愈伤组织发生的潜力。     

草地早熟禾转CMO-BADH双基因和转CMO基因耐盐性分析

通过对非转基因草地早熟禾(Poa pratensis L.)、转CMO-BADH双基因草地早熟禾、转CMO基因草地早熟禾进行不同浓度的NaCl胁迫试验,测定其细胞膜的透性,丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、氧化氢酶(CAT)活性,评定各株系耐盐能力的强弱,同时还验证并比较了CMO-BADH双基因和CMO基因的耐盐性功能,为耐盐新品种的选育提供了理论依据。结果表明:所有株系的相对电导率、MDA含量均随盐浓度增加而增大,在NaCl胁迫下相对电导率和MDA含量的大小顺序为:非转基因株系>转CMO基因株系>转CMO-BADH双基因株系;在NaCl的胁迫下,各个株系的SOD活性、POD活性、CAT活性都有明显的提高,此3种指标的大小顺序为:转CMO-BADH双基因株系>转CMO基因株系>非转基因株系;综合考虑各个指标,各株系耐盐性强弱顺序为:转CMO-BADH双基因株系>转CMO基因株系>非转基因株系。     

利用RAPD标记鉴定草地早熟禾种质资源的遗传多样性

草地早熟禾是一种重要的冷季型草坪草,广泛种植于温带地区,且拥有众多的商品品种和丰富的野生资源。本研究收集了国内外72份草地早熟禾材料,对它们苗期的株高、叶宽、叶色及分蘖情况进行了考察,结果显示材料间的表型差异显著。此外,又在材料间进行了RAPD扩增产物的多态性鉴定,20条引物共扩增出115条多态性条带,多态性比率达91%。UPGMA聚类显示,材料被聚成两大类:一类为4个国内品种/系(“沪夜”、“沪青”、“沪禾2号”和“杂禾”),另一大类为剩余的所有材料。当遗传相似系数增大后,后一大类分成3组,组Ⅰ以国外引进品种为主,组Ⅱ和组Ⅲ则集中了更多的野生材料。RAPD聚类分析结果与材料背景来源之间存在一定程度的相关,但与苗期表型性状没有相关性。     

草地早熟禾NAC基因鉴定及非生物胁迫下表达模式分析

草地早熟禾(Poa pratensis)是世界上广泛应用的草坪草种,其抗逆基因的挖掘对抗逆新品种的选育具有重要意义.NAC基因家族是植物特有的转录因子之一,在植物逆境响应中起到重要作用.以二穗短柄草(Brach ypodium distach yon)的NAC蛋白序列为请求序列,从草地早熟禾转录组数据库序列比对分析得到15个草地早熟禾PpNACs基因的cDNA全长序列,具有完整的开放阅读框.运用生物信息学方法预测早熟禾NAC家族成员的理化性质和保守结构域,发现15个PpNACs转录因子都是酸性蛋白,除PpNAC16外都属于不稳定蛋白,疏水性蛋白,具有相似的结构,通过聚类分析可将15个PpNACs成员分为3类.荧光定量PCR结果显示,在重金属胁迫下显著上调表达的基因有Pp-NAC10、PpNAC18、PpNAC19和PpNAC24,在盐胁迫过程下显著上调表达的基因有PpNAC10和PpNAC24,在干旱胁迫下显著上调表达的基因有PpNAC1、PpNAC6、PpNAC10和PpNAC13,在低温胁迫下显著上调表达的基因有PpNAC1、PpNAC10和PpNAC18,在高温胁迫下显著上调表达的基因有PpNAC20.其中,PpNAC10在重金属、盐、干旱和低温胁迫下均被显著诱导上调表达,Pp-NAC18在重金属、干旱和低温胁迫下均被显著诱导上调表达,PpNAC10和PpNAC18可作为草地早熟禾逆境胁迫响应的候选基因.     

用RAPD标记分析草地早熟禾遗传多样性

采用RAPD分子标记技术对从美国引进的12份草地早熟禾(Poapra tensis L.)品种的遗传多样性进行分析。结果表明,从60个随机引物中筛选的17个有效引物共扩增出104条带,其中多态性带65条,占总带数的62.5%,平均每个引物扩增出多态性带3.82条;利用NTSY S-PC软件计算品种间Jaccard遗传相似系数(GS),变化范围为0.362~0.971;用非加权组法(UPGMA)聚类分析,建立供试品种的分子系统树状图,以相似系数0.7为标准分为5类,其中新哥来德(NuGlade)、解放者(Liberator)、浪潮(Impact)、午夜(Midnight)、自由Ⅱ(Freedom Ⅱ)、超级伊克利(Total eclipse)和纳苏(Nassau)共7个品种聚为一类,兰神(Nublue)和美洲王(America)聚为一类,其余品种各自为一类;该结果对引进草地早熟禾品种资源评价与利用具有一定的参考价值。     

草地早熟禾无融合生殖的细胞学鉴定

应用胚囊整体染色透明法，对不同品种和来源的草地早熟禾无融合生殖进行了初步研究。从观察胚囊的发育过程入手，探讨了草地早熟禾（ＰｏａｐｒａｔｅｎｓｉｓＬ．）的３个引进栽培品种：Ｗａｂａｓｈ、Ｆｙｌｋｉｎｇ、Ｋｅｎｔｕｃｋｙ以及采自甘肃天祝、肃南和甘南的３个野生种群的无融合生殖的类型和特点。指出草地早熟禾是兼性二倍体无孢子生殖，无融合生殖率因品种和来源不同而异，Ｗａｂａｓｈ为６５％，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ为５４％，Ｆｙｌｋｉｎｇ为４８％，天祝、甘南、肃南的３个草地早熟禾野生种群的分别为２３％、１２％和５％。此外，还观测到了草地早熟禾的多胚现象。     

草地早熟禾NADH-GOGAT基因的克隆及表达分析

氮素是制约草坪草生长发育的重要因素之一,GS/GOGAT循环是植物氮同化的主要途径,谷氨酸合酶（glutamine：2-oxoglutarate amidotransferase,glutamate synthase,GOGAT）在植物氮素转化过程中发挥着重要的催化作用。本研究以草地早熟禾（Poa pratensis）为试材,基于二代测序RNA-seq相关数据,克隆得到草地早熟禾NADH-GOGAT基因,并进行生物信息学分析。结果表明：草地早熟禾NADH-GOGAT基因序列为3 236 bp,完整的开放阅读框（Open Reading Frame Finder,ORF）为1 338 bp,编码445个氨基酸残基组成的蛋白;预测NADH-GOGAT蛋白的分子量为49.89KD,等电点（isoelectric point,pI）为6.11,无信号肽,含有1个Glu_syn_central结构域,属于Glu_syn_central超级家族;二级结构以无规则卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角为主;同源进化分析结果表明草地早熟禾NADH-GOGAT与硬粒黑小麦氨基酸序列相似度为97%。草地早熟禾NADH-GOGAT基因在叶部的相对表达量高于根与茎,低氮浓度更有利于该基因的表达。NADH-GOGAT在干旱胁迫和水氮互作中表达差异显著（P<0.05）。草地早熟禾NADH-GOGAT基因的克隆,及相关序列分析和基因表达,对进一步研究该基因的功能和草地早熟禾GS/GOGAT循环的调控过程具有一定意义。     

草地早熟禾荧光定量PCR分析中内参基因的筛选

为筛选出草地早熟禾实时荧光定量中的最适内参基因,利用实时荧光定量PCR技术,分析检测6个传统内参基因ACT、GAPDH、UBQ、EF-1α、18s rRNA和β-tublin在草地早熟禾不同组织器官、叶片不同发育期、非生物胁迫和不同激素诱导下mRNA的表达差异情况。利用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件综合评价6个候选内参基因的表达稳定性。结果表明,在不同组织、叶片不同发育期、激素诱导和非生物胁迫下,候选内参基因的表达稳定性存在差异。GAPDH在草地早熟禾不同组织器官中表达最为稳定;EF-1α在非生物胁迫下表达最为稳定;不同激素下首选β-tublin;在叶片不同发育期ACT表达最为稳定。综上所述,通过筛选出不同条件下适宜的内参基因不仅有助于提高草地早熟禾基因表达分析的准确性,也为早熟禾属植物其他内参基因的开发提供了理论参考。     

草地早熟禾根际固氮菌的分离与鉴定

选用无氮培养基(NFM)对草地早熟禾(Poa pratensis)根际土壤样品中的固氮菌株进行了分离和纯化,共获得21个固氮菌株的纯培养,对其形态学和生理生化特性进行了研究。结果表明,草地早熟禾根际的固氮菌以Azoobacter为主,其次为Pseudomonas、Bacillus及Enterobacter,菌株细胞基本形状为杆状或类球状,有少量的菌株(N1、N5、N8、N16)存在芽孢;过氧化氢酶、溶菌酶试验均为阳性反应,不能水解果胶,不产生吲哚,在pH为5.7的营养肉汤培养液中都生长不良,在厌氧性测定反应中除了菌株N13和N14能厌氧生长外,其他菌株均为好氧生长。     

草地早熟禾牧草生长的气象条件分析

根据新疆乌鲁木齐市牧业气象试验站牧草观测资料,对草地早熟禾牧草生长期、生长高度和产草量的气候条件进行了分析,以期为开展牧业气象服务提供依据.     

草地早熟禾派伦霉叶枯病病原菌的分离、致病性测定及鉴定

【目的】鉴定草地早熟禾（Poa pratensis）叶枯病。【方法】对草地早熟禾叶枯病症状进行描述, 并利用形态学特征及分子生物学方法对病原进行鉴定。【结果】早熟禾叶枯病主要危害中上部叶片,常在叶尖和叶缘开始发病,逐渐向内扩展,形成较大枯死斑,病斑上形成大量小黑点。病原菌在 PDA 培养基上初呈白色,后变成橄榄绿和暗褐色,产生橘黄颗粒状液滴,背面有轮纹;菌丝有隔膜,无色或淡褐色;分生孢子多为长椭圆形,单胞无色,两端含油球,大小为 4. 2 μm×1. 8 μm~7. 7 μm×4. 8 μm（平均值 5. 8 μm×3. 4 μm）;分生孢子器呈卵球形、长椭圆形或球形,大小为 48. 3 μm×193. 1 μm~38. 5 μm× 139. 6 μm（平均值 106. 0 μm×86. 4 μm）。【结论】根据形态学特征和 ITS 基因序列分析,将病原鉴定为 Peyronellaea glomerata,将该病害鉴定为早熟禾派伦霉叶枯病。该研究结果为早熟禾叶枯病的诊断和综合防治奠定了基础。     

草地早熟禾类草坪草在寒冷半干旱带(兰州)适应性的研究

鉴于草地早熟禾在田间试验条件下各品种的适应能力无明显差异 ,只有在逆境胁迫下才表现其适应力的差别 ,将实验室测试的生理生化指标与田间观察结果加以综合 ,对 2 0个草地早熟禾品种用抗逆性指数 (Si)进行排序和分类 ,抗逆性强的有 2个 ,中等的 15个 ,差的 3个。     

Identification of the tet(B) resistance gene in Streptococcus suis

The tetracycline resistance gene, tet(B), has been described previously in Gram negative bacteria. In this study tet(B) was detected in plasmid extracts from 17/111 (15%) Streptococcus suis isolates from diseased pigs, representing the first report of this resistance gene in Gram positive bacteria.     

利用植物生长调节剂促控早熟禾、高羊茅生长速度的研究

利用植物生长调节剂对早熟禾、高羊茅的生长速度进行促控研究表明:返青初期,叶面喷施30～42.5mg/L赤霉素,每公顷750kg药液,可以促进生长,提早返青;叶面喷施300～600mg/L多效唑或200～400mg/kg烯效唑,每公顷750kg药液,可以控制生长,从而减少刈剪次数,喷施1次,药效可持续3个月。     

羊口疮病毒广东大浦株的分离鉴定及其遗传进化分析

对广东大浦发生的羊口疮病例进行了病毒的分离、鉴定及011基因和059基因的遗传演化分析。结果表明,利用胚胎羊鼻甲细胞成功的分离到了羊口疮病毒GDDP株,扩增了GDDP株ORFV的011基因和059基因,该毒株的011基因和059基因与福建和新疆流行的毒株具有密切的亲缘关系,可能为这些流行毒株的重组毒株,这也进一步证明了广东省羊口疮流行的复杂性。鉴于广东养羊业发展迅速,因此有必要开展更为深入的流行病学调查,为防控广东省的羊口疮奠定基础。     

山羊化脓隐秘杆菌分离鉴定及其神经氨酸酶遗传进化分析

为确诊重庆涪陵地区一山羊养殖场发生山羊皮下脓肿的病原,采集病料分离病原、进行药敏试验。通过生化试验和16S rRNA分子方法鉴定病原菌;PCR扩增分离株的神经氨酸酶基因(neuraminidase,NA),并利用细菌神经氨酸酶的隐马尔科夫模型(Pfam编号为PF13088)搜索自建的本地蛋白质组数据库,通过MEGA7.0构建系统进化树,从而分析神经氨酸酶基因在脊椎动物、寄生虫、真菌、细菌和病毒中的遗传进化特征,并利用PredictProtein进行分离株神经氨酸酶的点突变分析。结果表明,分离株的16S rRNA基因与JQ975932.1(中国新疆)株化脓隐秘杆菌序列同源性高达99.7%,结合生化特性确诊分离株为化脓隐秘杆菌;利用模型进行检索,共检索到214条神经氨酸酶氨基酸序列。神经氨酸酶遗传系统进化树显示,细菌神经氨酸酶主要集中在放线菌门中,脊椎动物的神经氨酸酶主要聚集在GroupⅠ和GroupⅡ,寄生虫的神经氨酸酶主要集中于GroupⅠ,真菌神经氨酸酶分布较广,存在GroupⅠ、GroupⅡ以及GroupⅣ中,而病毒神经氨酸酶主要分布于GroupⅠ和GroupⅡ。点突变分析表明,细菌神经氨酸酶不同位点的氨基酸突变对神经氨酸酶功能的影响不同。     

11份草地早熟禾种质材料对PEG-6000胁迫的生理响应和耐旱性评价

为鉴定评价11份不同草地早熟禾种质材料幼苗的耐旱性,将种子播种于育苗钵中,待幼苗生长至4～5片真叶时进行15％PEG-6000模拟干旱胁迫处理.测定相对含水量(RWC)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性、叶绿素(Chl)、脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)和可溶性糖(SS)含量....     

鸽源新城疫病毒的鉴定及HN基因遗传演化分析

根据发病鸽群的临床症状、病理剖检、组织病理学变化,并结合RT-PCR方法对武汉地区某鸽场疑似鸽新城疫进行了确诊,同时对分离的2株鸽源新城疫病毒(NDV)进行了HN基因结构特征及其与已知毒株的遗传相关性分析。结果表明:两株鸽源NDV分离株HN基因片段均含有6个保守的糖基化位点。2株NDV分离株HN基因序列与参考株同源性在80.0%~97.2%,与湖北株(AY225110.HB92)、印度株(KM056357.ndv61/B1)、江苏株(GQ245832.YC-24-07-CH)、陕西株(JF795531.HX01)在同一分支上,为基因II型。研究为武汉地区鸽新城疫的防控提供了理论依据。     

Divergent development of testosterone secretion in male zebu (Bos indicus) and crossbred cattle (Bos indicus x Bos taurus) and buffaloes (Bubalus bubalis) during growth

Delayed pubertal development and low fertility of Bos indicus x Bos taurus crossbred male cattle and domestic buffaloes is hardly understood hence, a sensitive enzymeimmunoassay (EIA) was developed using the second antibody-coating technique and testosterone-3-O-carboxymethyloxime-horseradish peroxidase conjugate as a label for determination of testosterone in blood plasma. The EIA was validated by standard criteria. Blood samples were collected by venipuncture from growing male cattle (Karan Fries and Sahiwal) and buffalo (Murrah) and testosterone was estimated using the EIA procedure. Plasma testosterone concentrations increased significantly (P < 0.05) with advancing age. Testosterone concentrations were significantly (P < 0.01) higher in Sahiwal males in comparison to Karan Fries males. The low testosterone levels in crossbred than Sahiwal could imply that crossbred males have either not stabilized genetically or not adapted well in Indian climatic conditions resulting in poor libido and poor semen quality. The low testosterone levels in Murrah buffalo males may be the possible reason for delayed maturity in this species. The direct, sensitive EIA validated for estimating the plasma testosterone concentration was reliable for studying the testosterone profile in blood plasma of males. The results suggest that there could be a requirement for higher testosterone secretion by males during early stages of growth for attaining early sexual maturity.     

Candidate gene polymorphisms (BoIFNG, TLR4, SLC11A1) as risk factors for paratuberculosis infection in cattle

Paratuberculosis (Johne's disease) imposes a significant problem to the world dairy and beef industries and today is considered a potential zoonosis. The disease is caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis and is characterized by progressive weight loss and profuse diarrhoea. Susceptibility to infection is suspected to have a genetic component, and moderated values for heritability of infection have been reported. Interferon gamma is an inducible cytokine with a crucial role in the innate host response to intracellular bacteria. Toll-like receptors are trans-membrane structures responsible for coordination of innate and adaptive immune responses. The solute carrier family 11 member 1 (SLC11A1, formerly NRAMP1) gene plays an important role in innate immunity, preventing bacterial growth in macrophages during the initial stages of infection. The objective of this candidate gene case–control study was to characterize the distribution of polymorphisms in three candidate genes related to the immune function; interferon gamma (BoIFNG), toll-like receptor 4 (TLR4), and SLC11A1 genes and to test their role as potential risk factors for paratuberculosis infection in cattle. The statistical analysis demonstrated significant differences in allelic frequencies between cases and controls for BoIFNG-SNP₁2781 and SLC11A1 microsatellites, indicating a significant association between infection and variant alleles. In the analysis of genotypes, a significant association was also found between infection status and BoIFNG-SNP₁2781 and SLC11A1-275-279-281 microsatellites. However, when variables such as breed and age were included in the multivariate logistic regression analysis, a tendency toward statistical significance for the effect of polymorphisms in the odds of infection was only found for alleles SLC11A1-275 and 279.