毁灭炭疽菌RAPD和ISSR-PCR最佳反应体系的建立

对影响PCR反应的主要因子-Md2+、dNTP、Taq酶、引物浓度进行优化,建立起适合于毁灭炭疽菌基因组DNA的RAPD和ISSR反应体系.RAPD反应体系(25μL):Mg2+浓度为2.5 mmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,Taq酶用量为1U,引物浓度1μmol/L.ISSR反应体系(25μL)为:Mg2+浓度为2 mmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,Taq酶用量为0.5 U,引物浓度为1.25 μmol/L.     

烟草炭疽菌的分子鉴定与检测

克隆并测定烟草炭疽菌r DNA全序列,序列全长2870 bp。序列比对发现,烟草炭疽菌与胶孢炭疽菌的rDNA序列相似性最高,达96.0%~96.2%;从构建的系统关系树也可以看出,烟草炭疽菌与胶孢炭疽菌聚成一个单独的分支,说明烟草炭疽菌与胶孢炭疽菌的亲缘关系最近。因此,结合烟草炭疽菌的形态学特征,可以初步将从贵州烟草分离的烟草炭疽菌鉴定为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。根据所测烟草炭疽菌的rDNA序列设计特异性引物,不仅可以从8种不同的烟草病原真菌中鉴定出烟草炭疽菌,而且可以从7种炭疽菌中鉴定出烟草炭疽菌。用烟草炭疽菌接种普通烟,以接种发病的病组织总DNA为模板,利用该特异性引物进行PCR扩增,同样可以扩增出特异性条带,表明该方法可用于烟草炭疽菌的鉴定和快速检测。     

黄曲霉的快速分子检测

黄曲霉Aspergillus flavus是一种广泛存在的致病真菌,早期准确检测黄曲霉并加以控制是减少黄曲霉毒素产生的有效措施。本研究利用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增黄曲霉转录间隔区并进行克隆测序,通过序列比对,设计1对黄曲霉特异性引物S1/X2,由此建立的PCR检测体系对包括黄曲霉在内的5种曲霉菌及其他17种不同的真菌、细菌基因组DNA进行扩增,结果只有不同来源的黄曲霉菌株能扩增出334bp的特异性条带,而其余参试菌株均无扩增产物,其检测灵敏度在DNA水平上可达到280fg。该检测体系能从自然发病的花生或玉米组织中扩增到334bp的特异片段,实现对黄曲霉的快速可靠检测。     

3个红掌品种杂交后代的部分植物学性状及分子鉴定

为了鉴定红掌杂交种的真实性，以红掌情人红、阿拉巴马和阿里桑娜为材料，进行杂交育种，并对其中的两个杂交后代进行分子鉴定。结果表明：以情人红为母本，阿里桑娜为父本，杂交得到一个叶型似母本，苞片似父本的杂种B；以阿拉巴马为母本，以情人红和阿里桑娜的混合花粉为父本，杂交后得到一个叶片似母本，苞片似父本阿里桑娜的杂种E。利用ISSR分子标记对杂种后代进行鉴定，杂种B的鉴定中，子代在3个引物中均出现父本的特征带，说明杂B是情人红和阿里桑娜的真正杂种。杂种E的鉴定中，子代在3个引物中均出现父本阿里桑娜的特征带，说明杂种E是阿拉巴马和阿里桑娜的真正杂种。     

红掌花叶病病原鉴定及检测方法的建立

以红掌为材料,利用RT-PCR方法鉴定出红掌花叶病的一种病原--芋花叶病毒（Dasheen mosaic virus,DMV）,并建立了该病毒的RT-PCR检测方法.依据该方法,将从0.1 g染病组织中提取的总RNA稀释500倍,仍能从中检测出DMV的存在,说明该方法的灵敏度高.该检测方法的建立,为红掌栽培,尤其是工厂化生产红掌无毒种苗提供了技术支持.     

喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

为寻求喀斯特炭疽菌的快速检测方法,利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,以喀斯特炭疽菌基因组中的ACT基因为靶序列设计并筛选特异性引物探针,通过特异性、灵敏度、重复性试验建立喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。结果表明:建立方法的特异性较强、灵敏度较高、重复性稳定性较好,最低检测限为0.2pg DNA/反应,标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.998。该方法操作简便,可用于进出境口岸喀斯特炭疽菌的检疫。     

番茄白粉菌的PCR分子检测

根据番茄白粉菌核糖体DNA的ITS(internal transcribed spacer)序列的特异性,设计2对引物OidF1/R1、OidF2/R2,对番茄白粉菌进行了PCR特异性扩增试验。结果表明:2对引物都可以从番茄白粉菌基因组DNA中扩增出350 bp左右的特异性扩增产物,并具有专一性,只在白粉菌和接种感病组织DNA中有扩增条带,而番茄早疫病菌、叶霉菌以及健康组织DNA中均无特异性扩增片段;引物具有高度的灵敏度,可以检测含有1 ng的番茄白粉菌DNA。由此证明,该方法可快速、准确和灵敏地鉴定和检测番茄白粉病的发生。     

胶胞炭疽菌DNA的PCR特异性扩增

利用1对胶灰疽菌特异寡聚核苷酸引物，对31个来自于橡胶树，芒果树的胶胞炭疽菌菌株的全基因组DNA进行扩增，均扩增到约500bp的DNA片段，而芭蕉炭疽功，辣椒疽菌，菜豆炭疽菌，腐霉菌，镰刀菌则不能被扩增。这表明，通过种间DNA特异片段的PCR扩增，能将胶胞炭疽菌与其他炭疽菌种类区别开来。采用该方法鉴别胶胞炭疽菌，其结果与形态鉴别的相吻合。     

大豆疫霉的分子检测

利用核糖体内转录间隔区(internaltranscribedspacer,ITS)序列通用引物ITS1/ITS4分别获得了大豆疫霉(Phytophthorasojae)和辣椒疫霉(P.capsici)的ITS序列,通过获得序列设计了大豆疫霉的特异性引物PS1和PS2,并建立了分子检测方法。该方法对大豆疫霉(P.sojae)菌丝体和土壤中卵孢子检测的灵敏度分别为10-5ng/μL和每克土壤0.05个卵孢子。     

牛源环孢子虫套式PCR检测方法的建立及初步应用

 【目的】 建立牛源环孢子虫套式PCR检测方法并初步应用于临床检测。【方法】根据牛源环孢子虫18S rDNA序列，设计1对保守引物和1对特异性引物，建立牛源环孢子虫套式PCR检测方法。通过阳性参照摸索出该检测方法的最佳反应条件，进行特异性和敏感性试验。并对168份临床样品进行了检测。【结果】该套式PCR能特异性地扩增出牛源环孢子虫基因组DNA中相应片段，与艾美耳球虫、隐孢子虫、贾第虫等10种相关原虫基因组DNA无交叉反应；最低能检测到2.85×10-2 fg的阳性参照DNA；对临床样品检测结果表明PCR技术检查阳性者显微镜检查都为阳性。【结论】建立的套式PCR方法具有高度的特异性和敏感性，有较好的临床应用价值。     

火鹤花上的几种线虫鉴定

记述了从火鹤花根部分离鉴定的咖啡根腐线虫(Pratylenchuscoffeae)、食菌茎线虫(Ditylenchusmyceliophagus)、锡博尔滑刃线虫(Aphelenchoidescibolensis)、蘑菇滑刃线虫(A.composticola)和燕麦真滑刃线虫(Aphelenchusavenae)等5种植物线虫.     

山东省主产烟区烟草炭疽病菌的鉴定与分子检测

从山东临沂等地采集烟草炭疽病害标本,并进行分离、检测、鉴定。结果表明,山东烟草炭疽病原为毁灭炭疽菌。根据烟草炭疽菌与其它烟草病害病原菌核糖体转录间隔区(internal transcribed spacerI,TS)序列间的差异,设计了一对特异性引物Co1/Co2。利用此引物可从烟草炭疽菌总DNA中扩增约300 bp的特异性片段,其余菌株和对照PCR结果为阴性。灵敏度实验证明,可以检测到目的片段的DNA浓度为0.1 pg/μl。对土样检测结果表明,该引物能特异性地检测到Colletotrichum destructivum的存在,为快速、灵敏地检测烟草炭疽菌提供了应用依据。     

红掌组织培养育苗技术的研究进展

红掌(Anthurium andraeanum)为天南星科花烛属多年生常绿草本植物,具有花形美、花色鲜艳和花期长等特点,种植经济效益较高。红掌传统的分株繁殖由于其分蘖能力弱,造成繁殖系数低;种子繁殖的种子难以获得,且播种到成苗周期长。红掌组织培养育苗能保持母本的优良品性,目前商业生产主要通过组织培养进行繁殖育苗。为促进红掌组织培养育苗技术的研究与推广,对红掌组织培养育苗过程中外植体处理、组培发生途径、培养基配方、光照条件和炼苗移栽等关键技术进行综述,并提出存在的问题与对策。     

海藻精在红掌栽培中的应用

[目的]研究海藻精对红掌生长的影响,以有效促进红掌生长与开花,并提高其抗逆性,使红掌安全过冬。[方法]试验采用300倍艾格600海藻精肥处理3种红掌品种(特伦萨、马都拉、骄阳),研究海藻精肥对红掌生长和花芽形成的影响。[结果]海藻精对红掌根系加粗和发根数量有明显促进作用,并可促进其株高、叶长、叶宽的生长,也增加了单株的花芽数;不同品种间处理效应有差异,对特伦萨、骄阳、马都拉3个品种叶片生长和花芽形成的促进作用呈依次减弱现象;同时,海藻精处理植株的抗逆性也明显提高,无冻害叶发生。[结论]海藻精可促进红掌生长和花芽的形成,提高植株抗逆性。     

红掌工厂化育苗关键技术研究

[目的]研究红掌工厂化育苗的关键技术。[方法]以红掌盆花和切花品种的叶片、叶柄、花苞片和花苞柱头为外植体,进行组培快速繁殖技术研究,探讨外植体的选择和消毒条件以及不同培养基对红掌愈伤组织的诱导、增殖和生根影响。[结果]叶柄为最佳外植体,愈伤诱导率最高,达78.3%;外植体采用0.1%HgCl2消毒8min的效果最好;粉冠军和MIDORI的最佳愈伤组织诱导培养基为1/2MS＋6-BA1.50mg/L＋KT1.00mg/L＋2,4-D0.10mg/L;最佳愈伤组织继代培养基为MS＋6-BA0.50mg/L＋KT0.50mg/L＋NAA0.10mg/L,添加10%的椰子汁或香蕉浆有利于增殖和丛芽生长,增殖率最高达2.83倍;最佳生根培养基为1/2MS＋NAA0.10mg/L＋IAA0.10mg/L,生根率达100%。[结论]该结果为红掌工厂化育苗体系的建立奠定了基础,对确保红掌产业的发展具有重要意义。     

红掌工厂化育苗关键技术研究

[目的]研究红掌工厂化育苗的关键技术。[方法]以红掌盆花和切花品种的叶片、叶柄、花苞片和花苞柱头为外植体,进行组培养快速繁殖技术研究,探讨外植体的选择和消毒条件以及不同培养基对红掌愈伤组织的诱导、增殖和生根影响。[结果]叶柄为最佳外植体,愈伤诱导率最高,达78.3%;外植体采用0.1%HgCl2消毒8 min的效果最好;粉冠军和MIDORI的最佳愈伤组织诱导培养基分别为1/2MS＋6-BA1.50 mg/L＋2,4-D0.50 mg/L＋NAA0.10 mg/L和1/2 MS＋6-BA1.50 mg/L＋KT1.00 mg/L＋2,4-D0.10 mg/L;最佳愈伤组织继代培养基分别为MS＋6-BA1.00 mg/L＋NAA0.50 mg/L＋2,4-D0.30 mg/L和MS＋6-BA0.50 mg/L＋KT0.50 mg/L＋NAA0.10 mg/L,添加10%的椰子汁或香蕉浆有利于增殖和丛芽生长,增殖率最高达2.83倍;最佳生根培养基为1/2 MS＋NAA0.10 mg/L＋IAA0.10 mg/L,生根率达100%。[结论]该结果为红掌工厂化育苗体系的建立奠定了基础,对确保红掌产业的发展具有重要意义。     

不同处理对红掌水生根系的诱导效果研究

[目的]探寻诱导红掌(Anthurium andraeanum)水生根的最佳方法。[方法]采用不同方法浸泡、覆盖红掌根系。[结果]用清水培养烂根少,发根快,但是叶片失绿,老叶枯萎;单纯用营养液培养,根系腐烂严重,但叶片浓绿、长势良好;综合叶片和根系的生长情况,在清水中加入碎花泥覆盖根系,并适时滴加营养液,能减轻根系腐烂,并有效地改善叶片的营养,保持株型。[结论]该研究可为红掌生产提供技术参考。     

红掌不同外植体愈伤组织诱导与不定芽分化的研究

以红掌3个不同部位的材料（叶片、叶柄、茎段）为接种外植体,对红掌的离体培养技术进行了初步的研究。结果表明,不同部位对愈伤组织诱导差异显著,其中叶柄诱导率最高,达到86.7%,为最佳取材部位。诱导愈伤组织培养基以MS+6BA2.0　mg·L-1+2,4D0.2　mg·L-1为最好; MS+BA2.0 mg·L-1+NAA0.25 mg·L-1对不定芽分化效果良好。第3期郭军战等红掌不同外植体愈伤组织诱导与不定芽分化的研究     

火鹤花短尾盾线虫和细尾丝尾线虫鉴定

短尾盾线虫(Scutellonemabrachyurum)和细尾丝尾线虫(Seinuratenuicaudata)采自火鹤花(Anthuriumandraeanum)根部及其栽培介质.短尾盾线虫具1阴门盖,唇部具3个唇环,基唇环可再分为2个不完全的小唇环,侧尾腺口直径3-4μm,位于肛门后1-2个体环.细尾丝尾线虫唇区缢缩,有11-12个唇环,侧带具3条侧线和网格纹.     

红掌基因组DNA提取方法的优化

[目的]采用改良的SDS法提取红掌基因组DNA。[方法]以4种不同花色的红掌品种为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取红掌基因组DNA,用紫外分光光度计测定英DNA在A260nm和A280nm下的吸光值,根据A260nm/A280nm的比值检测DNA的纯度和浓度。[结果]用改良SDS方法提取的DNA透明且无杂质,A260nm/A280nm比值在1．6—2．0,DNA纯度较高,可满足红掌分子生物学试验的要求;用CTAB法提取的DNA呈褐色或淡黄色,A260nm/A280nm,比值小于1．6,DNA纯度较低并且浓度低,舍有大量蛋白,此方法不适于提取红掌基因组DNA。[结论J采用改良SDS法可以提取到高质量的红掌基因组DNA,所提取的DNA的纯度和浓度可以满足红掌分子生物学研究的要求。