农杆菌介导红三叶草遗传转化体系的建立

以红三叶草品种‘Altaswede’作为受体材料,以GUS基因为报告基因,研究了影响农杆菌介导红三叶草遗传转化的几种因素以及几种侵染方法对提高转化效率的影响。建立了农杆菌介导的红三叶草快速高效遗传转化体系,并获得了转基因抗性苗。研究结果表明,以上胚轴为外植体,在OD600值为0.6的菌液中侵染20 min,真空度6×10-2Pa处理9 min,共培养5 d后转入含卡那霉素50 mg/L的分化培养基中,4周后60%的外植体分化出不定芽并生根成苗。PCR分子检测表明有80%的植株为GUS阳性,转化率约为50%。     

农杆菌介导多年生黑麦草遗传转化体系的建立

AVP1基因能够提高植物的抗盐性,通过农杆菌介导AVP1基因转化多年生黑麦草,并建立了较为成熟的遗传转化体系。研究表明,将预培养4d的黑麦草胚性愈伤组织经OD600为0.6左右的农杆菌菌液在负压下侵染6min,共培养3d,用250mg/L的羧苄青霉素(Carb)脱菌,附加150μmol/L的乙酰丁香酮(AS),然后转接到含75mg/L潮霉素(Hpt)的筛选培养基上进行筛选培养的转化体系效果最佳。     

农杆菌介导普那菊苣遗传转化体系的建立

以普那菊苣(Cichorium intybus L.cv.Puna)叶片为试验材料,接种于含不同激素浓度配比的MS培养基上进行愈伤组织、芽分化以及根再生的诱导,分析了不同激素浓度及其配比对愈伤组织诱导和芽分化以及根再生效果的影响。以已经建立的再生体系为基础,以农杆菌菌株LBA4404(含质粒pBin438-TaNHX2)侵染转化普那菊苣,探索普那菊苣高效遗传转化体系。结果表明:对外植体适宜的预培养时间为2～3d,与农杆菌的共培养时间也应控制在2～3d;侵染时间控制在8min左右;卡那霉素(Km)阳性筛选的适宜选择浓度为60mg·L^-1。乙酰丁香酮(AS)200μmol·L^-1是促进农杆菌转化的最佳浓度,200 W超声波处理、20次负压处理也可提高农杆菌转化率效果。26mg·L^-1 Km是野生型普那菊苣苗能够存活的上限,头孢唑林钠和头孢噻肟钠在500～1000mg·L^-1浓度范围内、羧苄青霉素300mg·L^-1和氨苄青霉素在40～60mg·L^-1浓度范围内均能较好的诱导出愈伤组织和芽。将来自小麦(Triticum aestivum)的Na⁺/H⁺逆向转运蛋白(vacuolar Na⁺/H⁺exchanger or antiporter,简称NHX,NHE或NHA)导入普那菊苣;经抗生素筛选以及针对TaNHX2基因的PCR检测和Southern杂交分析,证明获得了28株转TaNHX2基因的普那菊苣植株。     

根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的建立与优化

以“中苜1号”紫花苜蓿7日龄无菌苗子叶和再生无菌苗的叶片为材料，建立了适用于农杆菌介导的转基因组织培养体系，并对MsNHX1基因进行转化。转化优化条件为：“中苜1号”紫花苜蓿7日龄无菌苗子叶、再生无菌苗叶片，用农杆菌菌液（A600=0.6）侵染6min，然后在培养基上铺一层灭菌滤纸培养7d后清洗，建立了苜蓿快速有效的遗传转化体系。     

假俭草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

以假俭草为材料,对影响ISSR—PCR扩增结果的因素进行了探讨,建立了适合假俭草ISSR—PCR分析的最佳反应体系。表明在20弘L总体积中,包含40ng模板DNA、ISSR引物0．4umol／L、dNTPs0．1mmol／L、Mg^2＋1．0mmol／L、0．1U TaqDNA聚合酶和10×buffer 2．0uL。扩增条件为．94℃预变性5min;94℃变性45s,55℃退火45s,72℃延伸1．5min,35个循环;72℃延伸7min。     

假俭草遗传多样性及应用研究进展

对假俭草的遗传多样性、抗逆性、建植管理进行了综合分析和论述，认为假俭草具有较强的耐瘠薄、耐粗放管理及抗病虫害的能力，可广泛应用于绿地草坪、高速公路边坡草坪与水土保持草坪等。     

农杆菌介导的桑树遗传转化条件的研究

本实验探讨了多种因子对桑树遗传转化的影响,结果表明:菌株LBA4404 比C58Cl转化效率高;不同外植体转化效率有差异,以叶盘、茎尖和愈伤组织为受体转化频率分别为8.7% 、5.6% 和2.8% ;农杆菌菌液浓度、感染时间、共培养时间等对桑树叶盘转化效率有一定影响;AgNO3 对遗传转化具有明显的促进作用。     

农杆菌介导禾本科植物遗传转化的研究进展

农杆菌介导的遗传转化是目前禾本科植物进行转基因的有效手段,高效遗传转化体系建立的关键是优化T-DNA导入的各因素。文中主要从农杆菌菌株及载体、植物受体的选择、侵染与共培养、抗生素及添加剂的筛选等方面详细阐述了农杆菌介导植物遗传转化的主要影响因素,为实践操作提供了理论依据。     

菊苣高效遗传转化体系的建立

研究了影响农杆菌GV1301菌株介导的菊苣遗传转化的几种因素,建立了菊苣高效遗传转化体系,获得了转基因抗性苗.结果表明,采用菊苣叶片,经预培养和共培养2 d,农杆菌浸泡时间为5～7 min,卡那霉素20 mg/L,头孢霉素600 mg/L,最高转化频率达7.1%,经PCR检测,目的基因已整合到菊苣基因组中.     

假俭草遗传多样性及应用研究进展

对假俭草的遗传多样性、抗逆性、建植管理进行了综合分析和论述,认为假俭草具有较强的耐瘠薄、耐粗放管理及抗病虫害的能力,可广泛应用于绿地草坪、高速公路边坡草坪与水土保持草坪等.     

假俭草杂种Ｆ１抗寒性遗传分析

 本研究选用抗寒性存在差异的假俭草品种Ｅ１４２和Ｅ０２２为亲本配制杂交组合,获得了杂种Ｆ_１群体;利用电解质渗透法对Ｆ_１ 群体及其亲本进行抗寒性鉴定,利用植物主基因＋多基因遗传分离分析方法分析假俭草抗寒性遗传特征。结果表明,１）杂种Ｆ_１群体不同单株间的抗寒变异较大,变异范围为－９．６３～ －１．４５℃,变异系数为－２９．２７％。２）Ｆ_１ 群体的抗寒性呈连续的混合正态分布,符合植物主基因＋多基因遗传模型。３）假俭草的抗寒性状最适遗传模型为Ｂ-１,即抗寒性状受２对主基因加性－显性－上位性控制,主基因的遗传率为９１．２８％。本研究明确了假俭草抗寒性状的遗传规律,为假俭草抗寒育种提供了科学依据,也为假俭草抗寒育种创造了材料。     

假俭草的形态特征及其草坪质量评价

结合植物生态学与生物统计学的方法,从叶和茎两个方面研究了假俭草的外部形态特征,并对其草坪质量进行了综合评价。结果表明,叶片的形态特征指标基本符合草坪草的要求;假俭草的匍匐茎和直立茎在形态上存在较大差异;假俭草草坪具有优良的景观质量,适合建植各种类型的草坪,尤其适合建植保土草坪。     

假俭草侧芽愈伤诱导和植株再生

以中国优良品系Ｅ １２６假俭草的侧芽为外植体建立高效的再生体系。试验结果显示,１）适宜于侧芽生长的培养基为ＭＳ＋ＢＡＰ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．８ ｍｇ／Ｌ;２）在最佳诱导培养基ＭＳ＋２,４ Ｄ１．０ ｍｇ／Ｌ＋ＢＡＰ０．１ ｍｇ／Ｌ上,侧芽愈伤诱导率达９３％。较强的光照能提高愈伤组织的诱导率;３）在最佳分化培养基ＭＳ＋ＫＴ２．０ｍｇ／Ｌ 上,绿苗分化率为１２．６％;４）试管苗最佳生长培养基为ＭＳ＋ＢＡＰ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．８ ｍｇ／Ｌ;５）在最佳生根培养基ＭＳ＋ＮＡＡ０．６ｍｇ／Ｌ 上,试管苗的生根率达９８％,植株移栽成活率为９４％。本试验为假俭草体细胞筛选和遗传转化提供依据。     

中国假俭草种质资源抗寒性初步鉴定

采用电解质渗透法，对有代表性的38份中国假俭草及2份美国假俭草种源(品种)的抗寒性进行了初步研究，得出如下结果，1)中国假俭草种源半致死温度(LT50)的变化范围为-4．1～-13．0℃，平均为-6．2℃，变异系数为26．49％，假俭草种内抗寒性差异较大；2)中国假俭草种源半致死温度与经度、纬度及海拔均无显著的线性关系；3)中国假俭草种源E033与美国进口假俭草Common和新品种TifBlair的抗寒性相近，而E006的半致死温度分别较“Common”和“TifBlair”低2．6和2．3℃，其他36份种源的抗寒性均明显低于“Common”和“TifBlair”。     

不同土壤基质对峨眉假俭草抗寒性的影响

以峨眉假俭草为材料,种植在石骨质土、紫色土、垃圾、河滩土、粗砂5种不同的基质上.采用随机区组设计,研究不同基质对峨眉假俭草抗寒性的影响.结果表明,以河滩土为土壤基质种植的峨眉假俭草抗寒性最强,采用电导率法测得半致死温度(LT50)最低,9月为-2.74℃,1月下旬为-5.65℃.抗寒性与田间绿色期的观测相一致.     

正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选

以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2 、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对假俭草SRAP反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的SRAP最佳反应体系.结果表明,假俭草SRAP-PCR最佳反应体系为:2 μL 10譖CR buffer、60 ng模板DNA、Mg2 1.50 mmol/L、dNTP 260 μmol/L、引物0.25 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U,总体积为20 μL.各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2 浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小.运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合.这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据.     

宁镇丘陵地区假俭草资源坪用特性初探

以宁镇丘陵地区的8份野生假俭草（Eremochloa ophiuroides）为试验材料,系统地观测其生长特性和越冬性,并对其草坪质量进行了评价。结果表明,8份假俭草的生长特性和越冬性均有较大差异。其中以采自浦口老山的假俭草(E10)匍匐茎生长速度、分枝数、绿色期以及越冬性同其他材料相比差异最显著;匍匐茎生长速度最快的是采自南京钟山的假俭草(E11),而叶片质地最好和综合评价得分最高的是仪征新集的假俭草(E12)。从花器宫色泽来看,采自浦口老山的假俭草(E10)具有黄色茎、白色柱头和黄色花药,而其他7个材料都具有紫红色茎、红色柱头和红色花药。对不同野生假俭草种质资源的综合评价可为假俭草的育种提供方便。     

假俭草种源抗寒性鉴定及其变异分析

为了进一步鉴定和发掘假俭草抗寒遗传资源,为假俭草抗寒育种和遗传研究提供材料和有价值的信息,本研究采用电解质渗透法对搜集的有代表性的110份假俭草种源进行了抗寒性鉴定。结果表明,我国假俭草不同种源之间的抗寒性存在较大变异,它们的半致死温度的变异范围为-2.55℃～-8.01℃,极差为5.46℃,平均半致死温度为-4.89℃,变异系数为18.01%;进一步对假俭草的半致死温度与地理因子（纬度,经度和海拔）进行了回归分析,结果发现假俭草的半致死温度与纬度,经度和海拔均无线性关系;根据假俭草的半致死温度进行系统聚类分析,可以将110份假俭草种源分为3个类群。     

假俭草抗寒性状与低温胁迫响应EST分子标记的关联分析

为深入研究抗寒分子机理以及为分子标记辅助育种奠定基础,以具有代表性的96份种源为材料,利用假俭草(Eremochloa ophiuroides)抗寒品种TifBlair低温诱导后所得的EST及其近缘种高粱NCBI中低温胁迫响应的EST开发分子标记,对假俭草抗寒指标LT₅₀观测值和EST分子标记位点进行关联分析.结果表明:开发的17对引物在假俭草群体共扫描到46个多态遗传位点,其中CINAU114-900,CINAU115-1500和CINAU116-400位点与抗寒指标LT₅₀有显著关联,其表型变异的解释率分别为5.10%, 4.04%和4.59%;其LT₅₀表型效应分别为0.2518℃,-0.3121℃和0.2449℃.CINAU114-900和CINAU116-400位点提高假俭草对低温的敏感性,而CINAU115-1500位点可提高其抗寒性.     

农杆菌介导的药百合鳞片遗传转化体系的建立

本试验以药百合鳞片高频再生体系为基础,研究了农杆菌介导的药百合鳞片遗传转化的几个影响因素。结果表明,预培养5 d有利于转化;共培养3 d并且添加100 μmol/L乙酰丁香酮有利于提高转化频率并抑制了农杆菌的过度生长;在侵染阶段添加150 μmol/L乙酰丁香酮,农杆菌侵染液pH 值5.7、光吸收值0.8,侵染时间10 min为最佳遗传转化体系。再生植株经gus基因的瞬时表达检测及hpt基因PCR检测证明载体已成功整合到药百合基因组中。