猴头菌菌株CB1的系统发育分析与木质素降解酶的检测

首先对猴头菌菌株CBI进行培养特性观察,表明菌株能产生较多的厚垣孢子;对其ITS序列进行扩增(GenBank登录号为GU584100),并与猴头菌属5个种的17个不同地域菌株进行基于ITS序列的系统发育分析,结果表明菌株CB1与猴头菌同种其他菌株遗传距离较近并聚类在一起.明确该菌株的分类地位后,对其进行木质素降解酶系统的检测,结果表明猴头菌可产生锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(laccase),但不产生木质素过氧化物酶(LiP).MnP和漆酶的酶活性变化是有规律的,Mn2是猴头菌产生MnP的必要因子,而漆酶的产生则不受该条件的制约.在含Mn2+的LNAS培养基中加入木屑为底物的条件下,猴头菌MnP最大酶活性为45.56 U·L-1,漆酶最大酶活性为61.85 U·L-1.     

灰树花的系统发育分析和主要木质素降解酶的测定

对灰树花菌株迁西二号进行了ITS序列扩增与测序(GenBank登录号为GU584099),并对灰树花及相关白腐菌进行了基于ITS序列的系统发育分析,结果表明灰树花与Grifola sordulenta (Mont.) Singer等白腐菌的亲缘关系较近。采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基添加4种不同底物,对菌株迁西二号在25 ℃恒温下静置培养,得到了不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测了在470 、420 、310 nm处对于2,6-二甲氧基苯酚 (2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、3,4-二甲氧基苯甲醇/藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为锰过氧化物酶(MnP)、漆酶(Laccase)和木质素过氧化物酶(LiP)产生和活性大小的依据,从而获得了灰树花木质素降解酶系统的主要酶系及其与培养基的成分和酶作用底物的基本关系。结果表明,灰树花可产生MnP和漆酶,但不产生LiP;对比4种成分不同的培养液酶活力测定结果,未添加底物的培养液MnP最大酶活仅为2.96 U·L^-1,漆酶最大酶活仅为4.49 U·L^-1。添加底物木屑和2,6-DMP后MnP最大酶活为8.06 U·L^-1,漆酶最大酶活为9.85 U·L^-1,表明在培养液内添加酶的底物木屑后能轻微地提高两种酶的分泌量。     

灵芝属木质素降解高效菌株筛选

The diagnostic methods of extracelluar oxidase mat were used to select lignin-degrading enzymes producers among nineteen Ganoderma lucidum fungal strains. The results showed that the producing laccase activity of G.sp.var. Tianzhi was the highest,followed by that of G.lucidum 10 and G.lucidum 8.The producing lignin peroxidase activity of G.sp.var Tianzhi was the highes, and the producing Manganese peroxidase activity of G.sp.var yuanzhi 6 and G.lucidum G8 were the highest, followed by that of the G.sp.var. Tianzhi and G.lucidum 10. It was found that G.sp.var Tianzhi, G.sp.var. Yuanzhi 6, G.lucidum 8 and G.lucidum 10 showed the highest lignin-degrading enzymes activity.     

锰过氧化物酶应用的研究进展

介绍了锰过氧化物酶(MnP)及其产生菌的研究概况,综述了近年国内外关于MnP在纸浆的生物漂白、有机污染物的降解、染料的脱色、褐煤的生物降解、农业废弃物的处理和催化聚合反应等方面应用的研究进展。     

木质素生物降解过程中木质素-介体反应系统的研究进展

对木质素降解酶作用过程中介体物质研究进展进行评述，包括漆酶/介体系统（LMS）在生物漂白、脱木质素、和环境污染治理方面的研究应用情况及其动力学研究进展。     

木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶高产菌株的诱变育种

利用低能N+注入,对产木质素过氧化物酶(Mnp)和锰过氧化物酶(Lip)活力均较高的菌株N1023进行诱变,研究了不同能量和不同剂量N+离子诱变后菌株的存活率与突变率、突变菌株的产酶活力及遗传稳定性.结果表明:不同能量和不同N+离子剂量注入对菌株有显著影响,诱变菌株N1023j产Mnp和Lip双酶活力分别提高了27.29%和22.58%,同时诱变菌株N1023j有很好的遗传稳定性.     

漆酶对木质素磺酸盐生物改性的研究

本研究由白腐菌液体培养基制得的粗漆酶改性麦麦草木质素磺酸盐。处理后木质素磺酸盐分子量分布明显向高分子量方向移动,木质素磺酸盐溶液的色度随之加深的同时,其分散性能得到明显氡改善,并且在此处理过程中漆酶具有很好的稳定性。     

偏肿栓菌产锰过氧化物酶条件优化

采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基用4种不同的底物处理方式,对白腐菌偏肿栓菌在28℃下进行静止培养,得到不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测在470,420,310nm处对于2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为其木质素降解酶系统锰过氧化物酶(MnP)、漆酶和木质素过氧化物酶(LiP)产生的依据。结果表明:偏肿栓菌可产生MnP(必须在Mn2+存在的条件下)和漆酶(不依赖于Mn2+),但不产生LiP;在培养液内添加底物木屑和2,6-DMP后可显著提高2种酶的分泌量。在此基础上,用含Mn2+和青杨木屑的LNAS培养基对偏肿栓菌在30℃下静止培养作为初始培养条件,然后采用2次正交试验和多种单因素试验对偏肿栓菌产MnP的培养基组分和培养条件进行优化。结果表明:在试验设定的因素和水平范围内的最优组合是培养液果糖浓度为5g.L-1、酒石酸铵浓度为15mmol.L-1、锰离子浓度是200μmol.L-1、吐温-80浓度为0.25mL.L-1,MgSO4.7H2O浓度为0.35g.L-1、矿质...     

几种真菌产木质素降解酶的比较研究

通过PDA-Bavendamm平板显色反应、PDA-RB亮蓝显色反应、变色圈试验,获得选择性降解稻草木质素的高酶活菌株:糙皮侧耳、彩绒革盖菌和粗毛栓菌。液态产酶活性试验结果表明,粗毛栓菌是供试菌株中Lac、Mnp、Hcel的高产菌株。粗毛栓菌出现2次产Lac酶高峰,分别为第6天和12天,12天产Lac酶达894U/L;产Mnp酶高峰出现在第6天,达185 U/L;在18天时出现产Hcel酶高峰,产酶达62.7U/L。     

YK-624产锰过氧化物酶的生产及初步纯化

利用白腐菌PhanerochaetesordidaYK 624(ATCC90872),采用Kirk液体培养基在富氧条件下进行振动培养,可得到锰过氧化物酶(MnP)活性较高和漆酶活性微量的酶液。该酶液通过超滤、透析、二乙氨基乙基琼脂糖凝胶(DEAE sepharoseCL 6B,pharmacia)离子交换柱层析的方法进行初步纯化后,得到比活性很高(1941.54IU/mg)的MnP酶液。漆酶活性和MnP活性比值的变化、SDS PAGE凝胶电泳试验和406nm附近的吸光值变化均表明,经离子交换柱层析后的YK1部分是主要的MnP,电泳试验同时表明纯化后的主要MnP的分子质量约为43kDa。经超滤、透析、离子交换柱层析纯化后得到的酶液YK1可用于进一步地研究及应用。     

杏鲍菇和乳白耙齿菌锰过氧化物酶活性规律的研究

采用LNAS培养基在4种不同培养液中,对白腐菌杏鲍菇和乳白耙齿菌在28℃下进行静止培养,得到了不同时间内的培养液,用紫外-可见分光光度计检测了在470 nm处对于2,6-DMP的氧化作用后光密度值的变化情况,作为锰过氧化物酶（MnP）产生和活性大小的依据,从而获得了杏鲍菇和乳白耙齿菌锰过氧化物酶与培养基的成分和酶作用底物的关系。结果表明,杏鲍菇和乳白耙齿菌均可产生MnP,对比4种成分不同的培养基酶活力测定结果,在培养液内添加酶的底物木屑和2,6-DMP后可提高MnP的分泌量。以前的研究认为：Mn2＋是MnP产生的必要因子。而本试验研究结果表明,Mn2＋并不是杏鲍菇和乳白耙齿菌产生MnP所必需的。论文为进一步利用这两种真菌产木质素降解酶,以及为进一步深入研究这两种真菌MnP对木质素及其它异生物质降解的作用机理提供基础的酶学研究。     

猴头菌锰过氧化物酶1基因在构巢曲霉的异源转化与表达

为提高猴头菌菌株CB1锰过氧化物酶(MnP)基因的表达产量,采用PEG/CaCl2介导的原生质体转化方法,将携带有He-mnp1的重组质粒pLB01/He-mnp1转入到构巢曲霉尿嘧啶尿苷营养缺陷菌株TN02A7的原生质体中,获得了转化子菌株TN02A7-He-mnp1,并在乙醇脱氢酶启动子alcA(p)控制下实现了异源表达。将TN02A7-He-mnp1、TN02A7、构巢曲霉野生型菌株WJA01、猴头菌菌株CB1在相同的木质素环境下进行培养并检测MnP酶活性,结果表明:转化子菌株TN02A7-He-mnp1在0.05 g.L-1血红素的情况下、诱导96 h后酶活性最高为38.31 U.L-1,比不添加血红素的酶活力高8.64倍,但比猴头菌菌株CB1的酶活力低,而TN02A7与WJA01始终无MnP酶活性,说明基因He-mnp1已经成功地被转化到TN02A7-He-mnp1中,并在木质素环境下得到表达,血红素是重组MnP基因异源表达的限制性因素之一。本文为生产MnP和提高MnP产量提供了新的途径。     

土壤盐分胁迫对三种暖季型草坪草保护酶活性及脂质过氧化作用的影响

对土壤盐分胁迫下的3种暖季型草坪草的保护酶活性以及脂质过氧化作用进行了研究。结果表明：0．6％～0．8％土壤盐分胁迫下的假俭草各类保护酶活性(SOD、CAT、POD、APX)随胁迫时间的延长逐渐下降，0．2％～0．4％盐分胁迫的假俭草以及结缕草、沟叶结缕草随盐分胁迫程度的增加，保护酶活性上升。MDA、RPP均随胁迫程度的增加和胁迫时间的延长，逐渐升高，其中上升幅度最大的是假俭草，最小的是沟叶结缕草。PAL活性，三种草坪草除0．8％条件下假俭草呈现先升后降的趋势外，其余均随盐分浓度的升高而上升。各类保护酶的活性大小和MDA含量、RPP高低，与三种草坪草的耐盐能力有关，认为耐盐能力最强的是沟叶结缕草，最弱的是假俭草。     

人工修复植被对锰矿区废弃地土壤酶活性的影响

以自然修复的矿区废弃地土壤为对照,从土壤酶活性的垂直分布、季节动态特征及其与土壤养分含量、重金属含量相关性研究了人工修复的栾树Koelreuteria paniclata、杜英Elaeocarpus decipens混交林(修复地)对湘潭锰矿区废弃地土壤酶活性的影响.结果表明:0～60 cm土层中,随着土层深度的增加,土壤酶活性逐渐下降;同一土层中,修复地土壤脲酶、蔗糖酶、过氧化氢酶活性均高于对照地,且脲酶、过氧化氢酶活性的差异均达到了极显著差异(P＜0.01),0～20 cm土层中蔗糖酶酶活性的差异达到显著水平(P＜0.05);同一季节修复地土壤脲酶、过氧化氢酶活性均显著或极显著高于对照地(P＜0.05),秋、冬季修复地土壤蔗糖酶活性显著高于对照地(P＜0.05),夏季差异不显著(P＞0.05),而春季修复地显著低于对照地(P＜0.05);土壤酶活性与土壤有机质、全N、Mg含量呈极显著(P＜0.01)或显著(P＜0.05)的正相关性,与土壤微生物数量之间均呈极显著或显著的正相关;土壤中重金属对土壤酶活性多表现为抑制作用,且以脲酶活性最敏感,其次是过氧化氧酶活性.人工修复植被能明显提高锰矿区废弃地土壤的酶活性.     

16种城市绿化树种叶片中铁锰铜锌元素的含量特征

于2003年对昆明、思茅、丽江3市不同程度污染地段、不同季节16个绿化树种叶片中的铁、锰、铜、锌4种重金属元素的含量进行了测定。依据其结果进行分析,此16个城市绿化树种对Fe、Mn、Cu、Zn 4种重金属元素的吸收能力不同,叶片中Fe含量最高的树种是冬樱花;叶片中Mn含量最高的树种是咕山含笑;叶片中Cu含量最高的树种是冬樱花;叶片中Zn含量最高的树种是咕山含笑。4种元素总含量最高的树种是咕山含笑,为1 125.64 mg/kg;最低的是栾树,为324.05 mg/kg,相差达3.47倍。叶片中Fe和Cu含量的相关性达到极显著的水平,其他元素之间相关性均不显著。在石楠、麻栗坡含笑、滇润楠、天竺桂、云南拟单性木兰、杜英、山玉兰、冬樱花8个绿化树种中,有的树种叶片中Fe、Cu的含量与空气中可吸入颗粒物污染指数间有显著或极显著的正相关性,可做为监测树种;而此8个树种叶片中Mn、Zn的含量与污染指数间的相关性显著。