一例猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断与防治

2008年3月,新乡市某猪场发生了以一种经产母猪和初产母猪流产、死产、产木乃伊胎、死胎及弱仔为特征的疾病.为确定病原,采集流产胎儿和死胎的肺、肝、脾脏等病料,制悬液,取上清,进行细胞培养,观察细胞病变,另根据猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲株VR-2332 ORF7基因序列设计一对特异引物,提取流产胎儿的肺、肝等组织中PRRSV的RNA,经RT-PCR扩增,检测猪繁殖与呼吸综合征病毒为阳性,结合病史和临床症状,诊断为猪繁殖与呼吸综合征.通过对该猪场采取紧急接种疫苗、彻底消毒等综合防治措施,控制了该病的流行与蔓延.     

猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断方法的建立

为建立一种方便快捷的检测猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因设计一对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了检测猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR方法,进而对对照病毒及采集的病料组织进行了特异性、敏感性和重复性检测。结果显示,该研究建立的RT-PCR方法敏感性高,最低检测阈为10 TCID50/mL,扩增产物的特异性良好,重复性良好,可用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断及流行病学调查。     

猪繁殖与呼吸综合征的诊断要点及防制措施

猪繁殖与呼吸综合征是一种由猪繁殖与呼吸与道综合征病毒引起的免疫抑制性传染病,该病在我国规模化猪场的传播与蔓延日益严重,给养猪企业带来难以估算的损失。介绍了猪繁殖与呼吸综合征的诊断要点和防制措施。     

猪繁殖与呼吸综合征的发生与防制

分析了猪繁殖与呼吸综合征的发病与流行特点,并提出了防制措施,以期为猪繁殖与呼吸综合征的防制提供参考。     

RT-PCR技术检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)

根据猪PRRSV的ORF7基因序列,设计并合成了1对引物,以PRRSV RNA为模板,筛选最佳反应条件,建立了检测PRRSV的RT-PCR方法。应用该方法对病毒细胞培养物进行基因扩增,均获得了分子量为443bp的特异性目的片段,而对PCV2、PRV、CSFV及Marc-145细胞进行同条件检测,结果均为阴性;PRRSV扩增产物测序结果与文献报道的PRRSV其他毒株序列同源性达92%~98%。敏感性试验表明,该体系可检测到2.39TCID50的PRRSV;对2004~2005年送检的81份临床样品进行检测,阳性率为23.4%。上述研究结果表明,建立的RT-PCR特异性好、敏感性高,可用于猪繁殖与呼吸综合征的诊断和流行病学调查。     

猪繁殖与呼吸综合征的诊断技术与防制方法

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称“蓝耳病”,它是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起,以成年母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要症状的猪的主要传染病之一,临床上主要以怀孕母猪发生流产、早产、死胎和木乃伊等严重的繁殖障碍．仔猪的呼吸系统症状和断奶前死亡率增高,育成猪呼吸困难,发育迟缓,公猪性欲减退、精液品质下降等为特征的一种新型传染病。该病已被国际兽疫局（OIE）列为法定报告的B类传染病,中国也将其列为二类传染病．是危害养猪业最严重的病毒性疾病之一,已给各地养猪业的发展造成了严重的经济损失。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒CD163受体功能域鉴定

猪繁殖与呼吸综合征是危害养猪业重要传染病之一,CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染易感细胞受体。研究表明CD163受体的前2个SRCR区域与PRRSV感染无关。为确定PRRSV感染细胞过程中CD163受体关键SRCR区域,构建表达野生型CD163受体和缺失不同个数SRCR区域的CD163受体突变体质粒。将质粒转染BHK-21细胞24 h后,XH-GD株PRRSV感染细胞,进行间接免疫荧光(IFA)观察。结果显示,CD163前4个SRCR重复区缺失不影响PRRSV感染,SRCR5是PRRSV感染细胞所必须。为进一步研究CD163受体在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的作用及与其他受体之间相互关系提供试验基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的RT-PCR检测

根据NCBI登录的PRRSV G5、CSFV E2的全基因序列,设计2对引物,以PRRSV、CSFV总RNA为模板,通 过筛选最佳RT-PCR反应条件,利用RT-PCR成功扩增出目的片段,证明所检测病料为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)混合感染.     

猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF7N基因、猪乙型脑炎病毒（JEV）NS1基因序列,设计了2对引物,通过反应条件的优化,成功研制了检测PRRSV和JEV的双重一步法RT-PCR诊断试剂盒,扩增产物分别为245、504 bp。敏感性、 特异性结果显示,该RT-PCR诊断试剂盒对2种病毒的最低核酸检测量分别为PRRSV0.2ng/L、JEV 0.4ng/L,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒的扩增结果均为阴性。对52份疑似病猪样品的检测结果表明,该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒具有很好的特异性和敏感性,可用于临床猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎的检测。     

猪繁殖与呼吸综合征研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是1987年发现的一种猪的接触性传染病。目前还没有有效的疫苗和治疗措施。2006年夏季以来,我国部分地区陆续发生猪高致病性PRRS疫情,其死亡率高并呈多发态势,为进一步了解该病,本文综述了PRRS病源分子生物学及其防制。     

应用RT-PCR方法快速诊断猪繁殖与呼吸综合征的研究

参照国内外已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5基因序列设计1对引物,建立检测PRRSV的RT-PCR方法,并对长春周边不同地区10个猪场送检的20份病料进行检测。特异性试验、敏感性试验和重复性试验结果表明,此方法可以用于临床检测PRRSV。应用该方法从3个猪场的4份病料检出PRRSV,证实长春周边地区存在PRRSV感染。     

猪蓝耳病的诊断与防治

动物防疫工作与每个消费者、经营者、生产者乃至政府息息相关。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的RT-PCR鉴别诊断方法

为了快速鉴别诊断高致病性猪繁殖与呼吸综合症,参照GeneBank已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的Nsp2基因,设计了1对引物,建立了一种RT-PCR检测方法.该方法可以区分高致病性PRRSV毒株与经典PRRSV弱毒疫苗株,扩增PCV2、PRV、PPV和CSFV等均为阴性.该方法敏感性较高,可以检测到0.2 ng的病毒核酸.     

猪繁殖与呼吸道障碍综合征的诊断与防制

根据尚义县养猪场猪繁殖与呼吸道障碍综合征的发病情况、实验室诊断,证明了养猪场猪繁殖与呼吸道障碍综合征的存在,并采取了相应的防制措施.     

新疆南疆一起猪繁殖与呼吸综合征的诊断

为了明确新疆南疆某猪场猪一起疫情发病原因,本研究采用发病情况调查、临床症状检查、病理学剖检、病理组织学观察和RT-PCR方法进行系统分析。结果诊断为该猪场猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒,且初步鉴定为高致病性猪繁殖与呼吸综合征。该诊断结果为该场乃至新疆南疆猪病的诊断和防制提供一定的方法和指导意义。     

用反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株的基因序列设计了一对特异性引物P1/P2,扩增的片段为550bp,根据欧洲型毒株设计了一对特异性检测引物P3/P4,扩增的片段为433bp,建立PRRSV的RT-PCR的检测与血清型鉴别方法。特异性试验表明,这2对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的RNA或DNA。敏感性试验表明,这2对引物可以分别到检测10-5TCID50和10-4TCID50的病毒含量。利用该方法对重庆、四川某些猪场中临床上疑似为PRRS的20份送检组织样品进行检测,只有引物P1/P2能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物;其中有15份样品呈PRRSV阳性结果,阳性率为75%,说明送检的样品感染的PRRSV为美洲型。试验结果表明该方法快速检测病料组织中PRRSV是可行的,是临床上对PRRS进行快速诊断和分子流行病学调查的实用方法。     

猪繁殖与呼吸综合症的诊断与防治

猪繁殖与呼吸综合症是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起的一种以猪的繁殖障碍和呼吸道病为特征的高度接触性传染病.最近,此病在我国部分地区流行十分猖獗,引起的损失非常惨重.本文介绍了该病的几种诊断方法,同时提出一些防治措施供参考.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪Ⅱ型圆环病毒混合感染的诊断

采用病理学、PCR等实验室检测方法对采自吉林省某猪场的发病猪组织病料进行PRRSV、PCV2检测,结果表明该猪场的发病猪存在PRRSV和PCV2混合感染。对PRRSV和PCR扩增结果进行克隆分析,该基因序列与模板(EF112445.1)碱基序列有很高的同源性。