蛹虫草产胞外多糖发酵培养研究

[目的]对蛹虫草产胞外多糖发酵培养进行研究。[方法]通过响应面方法分析蔗糖、蛋白胨和KH2PO43个主要因素对蛹虫草产胞外多糖得率的影响,以获得比较适宜的培养基组成。另外,对发酵培养的条件进行了研究。[结果]蛹虫草胞外多糖优化发酵培养基组成为：蔗糖2.00%,蛋白胨1.50%,KH2PO40.05%,酵母粉0.20%,硫酸镁0.01% 发酵培养的适宜条件为：pH值6.8,温度28℃。在上述条件下蛹虫草胞外多糖得率为19.4 g/L。[结论]得到蛹虫草产胞外多糖的优化工艺条件,为上罐提供理论依据。     

蛹虫草胞外多糖的体外抗氧化活性分析

从蛹虫草(Cordyceps militaris)BYB-08液体发酵液中提取胞外多糖并纯化,测定蛹虫草胞外多糖粗品(exopolysaccharides,EPS)和纯化品(EPS-1)清除DPPH、·OH、O2-·以及螯合Fe2+的能力和总还原能力。结果表明:EPS和EPS-1对DPPH、·OH、O2-·都具有一定的清除能力以及螯合Fe2+的能力和总还原能力,且其抗氧化效果与多糖质量浓度呈良好的剂量-效应关系。当多糖质量浓度为10mg/mL时,EPS和EPS-1对DPPH的清除率分别达到96.07%、95.51%,对·OH的清除率分别达到74.00%、68.39%,对O2-·的清除率分别达到75.10%、62.12%,对Fe2+螯合率分别达到54.12%、28.13%,同时EPS和EPS-1的总还原力分别达到62%、54%。胞外多糖粗品EPS的抗氧化效果优于纯化品EPS-1。     

磁处理对蛹虫草菌丝生长的影响

[目的]明确磁处理对蛹虫草[Cordyceps militaris （L.） Link.]菌丝生长的影响,为磁处理在蛹虫草菌丝生产中的应用提供理论依据和参数。[方法]设置不同磁场强度和不同处理时间的组合条件,采用菌丝重量法研究磁处理对菌丝生长量的生物学效应,并筛选出最佳的磁场处理组合。[结果]不同处理条件对蛹虫草菌丝生长量的生物学效应不同,产生正生物学效应的最佳磁处理条件为1.250T/10 min。[结论]得出蛹虫草最佳的磁处理条件,为磁处理在蛹虫草菌丝生产中的应用提供了理论依据。     

蛹虫草无性型的研究：Ⅱ.液体发酵培养菌丝体及胞外多糖的提制

为开发利用蛹虫草及其制品提供新的思路,对蛹虫草液体深层发酵进行了研究。正交试验结果表明,最佳培养基组成是：５％大米粉,１．５％豆饼粉,１．５％麦芽粉,０．１％ＫＨ２ＰＯ４,０．０５％ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ．中试发酵液中干菌丝得率为３８．５１ｍｇ／ｍＬ,胞外多糖的质量浓度为４．９８ｍｇ／ｍＬ。此外,还探讨了胞外多糖的提制工艺。     

一种虫草胞外多糖的初步研究

本试验改变虫草发酵液的预处理以及胞外多糖的提取方法,并以多糖的生物活性为检测指标,确定G106-1虫草菌胞外多糖的分离方法.结果表明,去除30%乙醇沉淀析出部分后,调节乙醇终浓度为50%提取出的粗多糖的活性部分,经检测可诱导B和T淋巴细胞增殖,具有免疫增强作用.果蝇寿命试验表明,50%醇沉部分可延长果蝇寿命,其延长率为31.5%.此活性部分(简称EPS)经DEAE-DE52色谱柱纯化,得到两个组分(EPSⅠ、EPSⅡ),得率分别为12%和29%,其总糖含量分别为87%和96%.     

蛹虫草菌丝体胞内多糖最佳提取工艺研究

采用正交试验确定蛹虫草菌丝体多糖提取工艺中各因素的影响大小以提高多糖得率,结果表明,最佳提取工艺参数为:料液比1∶30,浸提时间3 h,浸提温度80℃,乙醇终浓度70%,该条件下多糖得率为3.16%。     

蛹虫草多糖对果蝇种群期望寿命的影响

采用统计学方法,研究了蛹虫草多糖对果蝇种群期望寿命的影响.结果表明:蛹虫草多糖能显著提高果蝇种群的期望寿命.0.15%浓度组在果蝇的各个年龄阶段的生命期望值都比对照组相应的年龄阶段高出30%以上,50 d年龄组高出70%多;60 d年龄组则高出100%;且用各种浓度的蛹虫草多糖喂养的果蝇在老龄后生命力很强,说明蛹虫草多糖对老龄果蝇的生命有明显促进作用.     

蛹虫草多糖对果蝇种群期望寿命的影响

采用统计学方法,研究了蛹虫草多糖对果蝇种群期望寿命的影响。结果表明：蛹虫草多糖能显著提高果蝇种群的期望寿命。0.15%浓度组在果蝇的各个年龄阶段的生命期望值都比对照组相应的年龄阶段高出30%以上,50d年龄组高出70%多;60d年龄组则高出100%;且用各种浓度的蛹虫草多糖喂养的果蝇在老龄后生命力很强,说明蛹虫草多糖对老龄果蝇的生命有明显促进作用。     

蛹虫草多糖的抗氧化活性研究

【目的】研究蛹虫草多糖的体内外抗氧化活性,为蛹虫草多糖的开发利用提供依据。【方法】以蛹虫草为原料,采用水提醇沉法制备蛹虫草粗多糖(cordyceps militaris polysaccharide, CMPs),再以二乙氨基乙基纤维素52(DEAE cellulose 52,DEAE-52)柱色谱法进行分离纯化,通过苯酚-硫酸法测其总糖含量;测定蛹虫草多糖对羟自由基、超氧阴离子、ABTS·和DPPH·的清除作用;建立D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型,进一步研究CMPs的体内抗氧化活性。【结果】纯化后的蛹虫草多糖总糖含量为82.57%;体外抗氧化活性结果表明,蛹虫草多糖(CMPs)对羟自由基、超氧阴离子、ABTS·和DPPH·均有良好的清除作用,且呈现良好的剂量效应关系,其半数有效质量浓度(EC₅₀)分别达到1.912,2.153,1.612和2.058 mg/mL。体内抗氧化活性结果表明,CMPs能够显著提高衰老模型小鼠血清和肝脏组织中的T-SOD、CAT和GSH-Px活力,同时能显著降低MDA含量,并且呈现良好的质量浓度依存关系,尤其是在高剂量时可以使衰老模型小...     

蛹虫草多糖含量测定样品前处理的研究

目的:建立蛹虫草多糖含量测定样品前处理方法。方法:以蛹虫草多糖含量为指标,筛选粉碎细度、醇沉时样品浓度、提取温度、提取时间为有关因素,不考虑交互作用,选择三水平进行了L9(34)的正交试验。结果:经极差分析,对多糖检测结果的影响大小的顺序为粉碎细度因素>醇沉时样品浓度>提取时间>提取温度。结论:最佳前处理条件为A3B3C3D2,即为粉碎细度200目、醇沉时样品浓度1g→10ml、提取温度100℃、提取时间1h。     

北冬虫夏草固体发酵产胞外多糖条件的研究

[目的]研究北冬虫夏草固体发酵产胞外多糖的条件。[方法]采用固体发酵法培养北冬虫夏草,研究碳源和氮源种类、酵母粉含量、KH2PO4含量、初始pH值、接种量、种龄及发酵时间对北冬虫夏草发酵产胞外多糖的影响。[结果]单因素试验和正交试验表明,最佳的发酵条件为:大米∶米糠=90∶10,酵母粉1.0%、KH2PO40.25%、初始pH 6.0、种龄4 d、接种量8%(V/W)、温度28℃、固水比1∶1(W/V)、发酵时间6 d。在此发酵条件下,北冬虫夏草胞外多糖产量达38.625 mg/g.干基。[结论]该研究为开发新型动物保健饲料提供了理论支持。     

蛹虫草菌丝固体法培养初探

试验采用点接法进行了蛹虫草菌丝适宜C、N源的筛选。结果表明,蛹草拟青霉可以利用的C、N源种类较多,常规饲料原料均可利用;根据C、N源筛选结果,设计了固体培养基配方;试验所设计的豆粕、麸皮、玉米面等固体配方可以满足蛹虫草菌丝生长的要求,蛹虫草菌丝的固体培养切实可行。     

北虫草栽培技术研究

[目的]探讨栽培技术对尖头北虫草产量的影响。[方法]设置液体培养基、菌种代数、栽培培养基养分和VB1含量、菌液接种量、补充液体成分等不同处理,按照常规方法栽培北虫草,测定子实体产量,用SPSS软件对数据进行统计分析。[结果]液体培养基成分对子实体产量有显著性影响(P0.05);F1代和F2代产量没有显著性差异(P0.05);不同栽培培养基养分和VB1含量处理产量之间没有显著性差异(P0.05);接种5 ml菌液的处理产量极显著高于接种2 ml菌液的处理产量(P0.01);补充清水和营养液子实体产量之间没有显著性差异(P0.05)。[结论]液体培养基中添加一定天然有机物可以提高子实体产量;尖头北虫草菌种继代1～2次对产量没有明显影响,栽培培养基营养液成分和VB1含量对产量没有明显影响,足够的菌液接种量可以提高产量;培养过程中补充清水即可。     

蛹虫草在豆天蛾上的接种试验

[目的]探讨蛹虫草在豆天蛾幼虫和蛹上的接种效果。[方法]以豆天蛾幼虫和蛹为寄主,进行蛹虫草接种试验,比较不种接种方法对豆天蛾幼虫和蛹感染虫草菌种的影响及接种效果。[结果]不同接种方法对豆天蛾幼虫和蛹感染虫草能力有影响。从感染虫草菌能力方面看,用浸过虫草液体菌种的洋槐叶饲喂的豆天蛾幼虫为寄主进行的接种试验的效果最好,其次为以放置在已经发满菌丝的固体培养基上并用洋槐叶饲喂的豆天蛾幼虫为寄主进行的接种试验;而豆天蛾蛹上接种的最佳方法为注射50山的液体菌种。[结论]该研究为蛹虫草寻求廉价的寄主和工厂化生产提供了理论依据。     

蛹虫草无性型蛹草拟青霉的电泳核型分析

采用等高锁状均质电场(CHEF)凝胶电泳技术,对蛹虫草无性型-蛹草拟青霉(Paecilomyces militaris Liang)进行电泳并分析其核型.以温汉逊氏酵母(Hansenula wingei)及粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)菌株的染色体DNA大小作为分子量标记,3株蛹草拟青霉基因组中各包含7条染色体DNA,其大小都在2 Mb至5.7 Mb之间.实验结果表明各菌株间核型不完全相同,存在一定的差异,呈现多态性.     

微波法提取北冬虫夏草中黄酮类化合物

研究了微波法从北冬虫夏草中提取黄酮类化合物的工艺.分别考察了原料颗粒度、溶剂组成、提取时间、提取次数、液固比等因素对提取总黄酮产量的影响.确定适宜工艺参数为:原料颗粒度为60目,以水作为提取溶剂,微波功率为120 W,提取时间累计为10 min,分3次提取,提取液固比为25 ml∶1 g.在此工艺参数下,黄酮产量可达到14.69 mg/g.     

蛹虫草主要有效成分分析

[目的]进一步开发蛹虫草,满足人们对药品和滋补保健品的需求。[方法]通过用HPLC测定核苷类化合物和氨基酸,乙醇沉淀法测定虫草多糖,比色法测定虫草酸,SOD Assay Kit-WST试剂盒测定SOD酶酶活分析蛹虫草的主要有效成分。[结果]蛹虫草子实体中含有虫草素(3′-脱氧腺苷)、腺嘌呤、脱氧胸苷、尿嘧啶、腺苷、次黄嘌呤、鸟苷、尿苷等核苷类化合物,18种氨基酸,其中以谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸、亮氨酸含量最高;甘露聚糖和葡萄糖含量分别为13.88和16.68 mg/g,虫草酸含量为17 mg/g,胞内SOD酶酶活为515.40 U/g。[结论]蛹虫草的主要有效成分为:核苷类化合物(虫草素、腺苷、鸟苷、尿苷、肌苷)、虫草酸、虫草多糖、氨基酸、SOD酶等。     

北冬虫夏草人工栽培条件的优化

通过单因素试验和主要因素的正交试验对北冬虫夏草人工栽培条件进行优化,结果表明:北冬虫夏草栽培的最适培养基为大米培养基,最佳接种量为20 ml,菌丝和子实体生长的最佳温度均为21℃,最佳光照时间为14 h/d。     

蛹虫草多糖提取及纯化工艺研究

采用以大米、蚕蛹为主原料的培养基培养蛹虫草子实体。通过正交实验对蛹虫草水溶性多糖的提取工艺进行了研究,利用蒽酮-硫酸法来测定多糖含量。发现90℃、加水20倍、分3次提取、每次3 h为最佳提取条件。同时考查了不同除蛋白方法对虫草多糖的蛋白去除效果。