茶叶中东莨菪素和东莨菪苷的测定及相关基因表达

东莨菪素和东莨菪苷是香豆素类化合物,具有多种生物活性,是传统中药丁公藤类生药的主要活性成分.茶树多酚、生物碱等次生代谢物丰富,但有关东莨菪素和东莨菪苷代谢相关的研究还鲜有报道.本研究建立了利用高效液相色谱测定茶叶中东莨菪素和东莨菪苷的检测方法,东莨菪素的平均回收率为93.5%,相对标准偏差(RSD)为2.64%;东莨菪苷的平均回收率为91.7%, RSD为3.32%.利用该方法检测了不同发育时期新梢(鱼叶期到一芽三叶期)、不同处理(茶尺蠖为害和低温胁迫)叶片和不同品种/单株叶片中东莨菪素和东莨菪苷的质量分数变化.结果表明,茶树新梢中东莨菪苷的质量分数高于东莨菪素,并且其质量分数随新梢成熟度增加而升高,而东莨菪素的质量分数变化无统计学意义;东莨菪素和东莨菪苷的质量分数与茶树品种遗传差异相关,其中东莨菪素质量分数为18.34～50.88μg/g,东莨菪苷质量分数为25.84～80.76μg/g;东莨菪素和东莨菪苷的质量分数受低温和茶尺蠖胁迫的影响差异无统计学意义.对不同发育阶段茶树新梢中东莨菪苷生物合成相关的基因表达水平进行检测,结果表明,合成通路上游基因的表达模式与东莨菪苷的积累模式间不...     

9种杀螨剂对朱砂叶螨不同发育阶段的室内毒力测定

室内采用FAO推荐的玻片浸渍法和叶碟法分别测定了9种杀螨剂对朱砂叶螨雌成螨和卵的毒力。结果表明,杀螨活性最高的是阿维菌素,其次是溴虫腈,卡死克、噻螨酮、哒螨灵、三唑锡也具有较好的杀螨效果,炔螨特的杀螨效果较差,甲氰菊酯和氧化乐果的杀螨效果最差;阿维菌素对朱砂叶螨卵的毒力最高,毒力次之的是噻螨酮、哒螨灵、溴虫腈、三唑锡和卡死克,甲氰菊酯、炔螨特和氧化乐果对卵的毒力最差。另外,对朱砂叶螨雌成螨和卵毒力相差最大的是噻螨酮和哒螨灵,毒力分别相差150.27和134.28倍;其次为三唑锡,相差69.80倍;溴虫腈、卡死克、阿维菌素、氧化乐果、甲氰菊酯、炔螨特对卵和雌成螨的毒力差别相对较小。     

11种常用药剂对蔬菜朱砂叶螨的室内毒力测定

采用玻片浸渍法,室内测定了11种常用药剂对北京地区蔬菜上朱砂叶螨的毒力效果。结果表明,阿维菌素对朱砂叶螨雌成螨毒力最高,其致死中浓度LC50为0.0007mg/L,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氧苦?内酯的毒力较高,LC50分别为0.0130 mg/L和0.1461 mg/L;哒螨灵和虫螨腈的效果次之,其LC50分别为21.3122mg/L和34.8519 mg/L。其他药剂如克螨特、高效氯氟氰菊酯和多杀菌素对雌成螨毒性较低,螺螨酯、氯虫苯甲酰胺和噻螨酮对朱砂叶螨雌成螨毒力很差。     

葎草不同溶剂提取物对朱砂叶螨的毒力分析

在温度(28±1)℃、相对湿度(75±10)%、光暗周期16h-8h的条件下,研究了葎草不同溶剂(正己烷、乙醇、乙酸乙酯)提取物对朱砂叶螨成螨和卵存活的影响.结果表明:正己烷、乙醇、乙酸乙酯提取物对朱砂叶螨成螨的致死中浓度(LC<,50>)分别是6.746、17.007 1、190.424 6 mg/mL.正己烷提取物20 mg/mL对成螨48 h校正死亡率达100%,高于乙醇(51.7%)和乙酸乙酯(3.6%)提取物.正己烷、乙酸乙酯对朱砂叶螨卵的致死中量(LC<,50>)分别是4.838 5、11.745 3 mg/mL,乙醇提取物对朱砂叶螨卵的死亡率和对照组没有显著差异.表明正己烷是能有效提取出葎草中杀螨活性成分的有机溶剂.     

8种杀虫剂对朱砂叶螨毒力及家蚕的急性毒性比较

采用叶碟喷雾法测定鱼藤酮、印栋素、苦参碱、苦皮藤素、藜芦碱、乙基多杀菌素、四氯虫酰胺、吡丙醚等8种常用杀虫剂对桑园朱砂叶螨成螨和螨卵的室内毒力,并以食下毒叶法检测对家蚕3龄起蚕的急性毒性。结果表明:印栋素、苦参碱、鱼藤酮、苦皮藤素、藜芦碱对朱砂叶螨成螨毒杀活性较高,半致死浓度(LC₅₀)分别为0.213、0.659、1.621、13.014、16.548 mg·L^-1;苦皮藤素、印栋素、藜芦碱、鱼藤酮和苦参碱对朱砂叶螨螨卵毒杀活性较高,LC₅₀值分别为0.254、3.497、13.564、21.936、35.030 mg·L^-1。3龄起蚕取食添加8种杀虫剂的桑叶48 h后,均出现吐液、拒食、体缩等中毒症状,除吡丙醚属于中等毒性外,其余杀虫剂对家蚕为高毒或剧毒。印栋素、苦参碱、鱼藤酮、苦皮藤素、藜芦碱等杀虫剂可以有效防控桑园朱砂叶螨成螨及螨卵,但在使用中应注意其对家蚕的安全性。     

天然辣椒碱类物质对朱砂叶螨杀螨活性的影响

[目的]明确天然辣椒碱类物质对敏感朱砂叶螨各发育阶段的杀螨活性、对谷胱甘肽S-转移酶活性(GSTs)及基因表达量的影响.[方法]采用叶碟喷雾法处理样品,用酶标仪及荧光定量PCR仪测定酶活性及基因表达量.[结果]辣椒碱类物质对朱砂叶螨的杀螨活性随药剂浓度升高而增强,杀螨效率从高至低为幼螨＞若螨＞成螨＞卵,故选用低浓度的辣...     

华北地区31种植物粗提物对朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus的触杀活性

通过华北地区31种植物粗提物对朱砂叶螨（Wetranychus cinnabarinus）成螨触杀活性的测定,发现粗提物浓度为1mg／mL时,柠檬薄荷（Monarda didyma）、胡椒薄荷（Mentha piperita）、木本香薷（Elsholtzia stauntoni）、猪牙皂（Gleditsia sinensis）、乌头（Aconitum carmichaeli）、鸦胆子（Brucea javanica）、龙葵（Solanum nigrum）的石油醚粗提物,紫穗槐（Amorpha fruticosa）、艾蒿（Artemesia annua）、银杏叶（Ginkgo biloba）、老鹳草（Geranium pseudosibiricum）的氯仿粗提物,百部（Radix Stemonae）的甲醇粗提物均有明显的杀螨活性,成螨校正死亡率均在80％以上。其中致死率最高的为木本香薷的石油醚粗提物,达到100％;鬼针草（Bidens parviflora）的氯仿粗提物对螨的致死率最低,为2．01％。对成螨触杀死亡率进行Duncan’s检验,发现所试植物中部分植物的杀螨活性在5％水平上差异显著,唇形科（Labiatae）植物的石油醚粗提物触杀效果明显。大部分供试植物的甲醇粗提物对害螨的触杀作用相对较差。用唇形科3种薄荷石油醚粗提物对若螨进行进一步的毒力测定,结果表明毒性最强的为柠檬薄荷粗提物,其LC50值为0．4294mg／mL。     

桑树东莨菪素体外抗假丝酵母菌活性初步研究

试验运用生长速率法,初步测定了桑树活性物质东莨菪素体外抗假丝酵母菌活性。结果表明,东莨菪素对假丝酵母菌具有明显的抑制作用,其MIC=7．81,作用时间和作用浓度分别在48—72h、500—1000ug／ml间为宜。这为东莨菪素抗菌活性的进一步研究奠定了基础。     

阿维菌素·苦参碱复配剂对朱砂叶螨的毒力及防效

室内毒力测定结果显示,阿维菌素与苦参碱以有效含量的质量比1:24复配,对朱砂叶螨的毒力指数为苦参碱的47.45倍,共毒系数达155.84,具有明显的增效作用.田间小区试验表明,使用5%阿·苦水乳剂1000、2 000、3 000倍液防治朱砂叶螨,药后2～5 d的防效均在93%以上,药后7 d的防效在83%以上,持效期为7 d.     

BtR05对朱砂叶螨的致病性及其制剂的毒力测定

[目的]为研究开发苏云金芽孢杆菌杀螨剂提供借鉴。[方法]使用BtR05菌株对朱砂叶螨进行致病性研究,确定其杀螨活性后,制备了BtR05悬浮剂,并使用该悬浮剂对朱砂叶螨的幼螨、若螨和成螨进行了室内毒力测定。[结果]稀释500倍以下的浓度对朱砂叶螨的毒杀效果较好,在药后96h幼螨的校正死亡率均达到80％以上,若螨的校正死亡率均达到75％以上,成螨的校正死亡率均达到60％以上,表明BtR05悬浮剂对朱砂叶螨的幼螨、若螨和成螨均具有毒杀作用。BtR05悬浮剂与对照药剂金维达相比,悬浮荆稀释300倍以上对幼螨和若螨的毒杀作用在药后96h差异显著,说明BtR05悬浮剂的持效性高于对照药剂。[结论]苏云金芽孢杆菌BtR05悬浮剂对朱砂叶螨的幼螨、若螨和成螨均具有毒杀作用,并且其持效性明显高于对照药剂金维达。     

8种中药提取物对朱砂叶螨触杀活性的研究

采用玻片浸渍法测定了24种植物粗提物对朱砂叶螨的杀螨活性。结果表明：当提取物质量浓度为2mg/mL时,木鳖子和石楠叶的甲醇粗提物,木鳖子、鹤虱、石楠叶和蛇莓的氯仿粗提物,急性子和木鳖子的石油醚粗提物对朱砂叶螨成虫有较好的触杀活性。其中致死率最高的为木鳖子的石油醚粗提物,致死率为77.52%;瓦松的甲醇粗提物对螨的致死率最低,为9.52%。根据初步筛选结果,选取急性子的石油醚粗提物和木鳖子的石油醚、氯仿粗提物做进一步的毒力测定,结果表明毒性最强的为木鳖子的石油醚粗提物,其LC50值为0.539 5 mg/mL。     

5种植物提取物对朱砂叶螨的触杀活性测定

为筛选高效的植物源杀螨活性物质,采用玻片浸渍法测定了泽漆、牛至、车前草、龙葵和铁苋5种植物乙醇提取物对朱砂叶螨的触杀活性。结果表明:当提取物质量浓度为2 mg/mL时,铁苋乙醇提取物对朱砂叶螨的触杀效果在24 h和48 h均极显著于其他4种植物(P0.01),校正死亡率分别为33.63%和85.21%。根据初筛结果对铁苋进行不同极性溶剂的生物活性测定,得到氯仿提取物杀螨活性(48 h)极显著高于石油醚和乙醇提取物(P0.01),校正死亡率为90.28%。进一步采用喷雾法对铁苋氯仿提取物进行毒力测定,结果表明随着触杀时间的延长,LC50逐渐降低,在处理48 h时LC50最小,为2.81 mg/mL。由此可知:铁苋氯仿提取物有较高的杀螨活性。研究为开发高效的植物源杀螨剂提供理论依据。     

瑞香狼毒根中狼毒色原酮对朱砂叶螨的触杀毒性

[目的]为了研究瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.)根的杀螨活性物质基础.[方法]采用多种色谱技术从瑞香狼毒根部萃取物中的乙酸乙酯部分分离到1个黄酮类化合物,利用核磁共振技术和质谱对其进行结构鉴定,并采用玻片浸渍法测定其对朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus B.)的触杀毒性.[结果]确定了其化学结构为狼毒色原酮(1).其对朱砂叶螨的半致死浓度(LC50)为3.53 mg/mL.[结论]与阳性对照药克螨特LC50的0.86 mg/mL相比,其杀螨活性中等偏弱,作为主成分之一的狼毒色原酮具有杀螨活性,这一结果对于瑞香狼毒杀螨剂的进一步开发具有积极意义.     

核桃青皮中胡桃醌对朱砂叶螨触杀毒性的研究

为了解核桃青皮提取物对朱砂叶螨触杀毒性的物质基础,采用系统溶剂萃取法分别获得石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取物;利用色谱技术从二氯甲烷萃取物中分离得到1个化合物,经核磁共振(1 H、13 C NMR)技术鉴定为胡桃醌(1);采用玻片法测定了化合物1对朱砂叶螨的触杀活性。结果显示:在处理24、48、72h后,化合物1处理朱砂叶螨的半数致死浓度(LC50)分别为6.96、3.73、1.90 mg/mL;当浓度为1mg/mL时,24、48和72h的校正死亡率分别为24.32%、35.14%和48.65%,触杀毒性研究表明,胡桃醌对朱砂叶螨具有触杀毒性,作用强度中等偏弱。这是首次发现蒽醌类化合物胡桃醌对朱砂叶螨一定的触杀毒性,其作用机理有待进一步研究。     

棉花红蜘蛛的抗药性测定

采用玻片浸渍法测定了周口地区棉花红蜘蛛的抗药性。结果表明:2005年周口地区棉花红蜘蛛对Avermectin极为敏感,其LC50为0.0019864 mg/L;专用杀螨剂、拟除虫菊酯类药剂也都表现出了较高的毒力;而有机磷类药剂的毒力较低,说明该地区棉花红蜘蛛对有机磷类药剂已产生明显的抗药性。建议当地暂停使用有机磷类农药防治棉花红蜘蛛,可采用Avermectin与专用杀螨剂及拟除虫菊酯类药剂轮用或混用,以提高防治效果并延缓抗药性的发展。     

BtR05的诱变育种及其对朱砂叶螨的毒力测定

以BtR05为原始菌株,通过紫外诱变,获得一株对朱砂叶螨成螨有较高毒力的突变株63号.63号菌株的生长速度快,繁殖力强,LB摇瓶培养48 h后显微计数为4.88×109cfu.mL-1.63号发酵液的杀螨活性是原始菌株的1.33倍.通过斜面传代培养,该菌株能稳定遗传10代.     

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐与阿维菌素杀螨活性比较

运用浸渍法和叶片残毒法测定了甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(emamectin benzoate)和阿维菌素(avermectin)对朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus与二斑叶螨Tetranychus urticae种群不同发育阶段的致死作用。结果表明,在相同的温湿度条件下,2种花卉叶螨不同发育阶段对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和阿维菌素的敏感性不同,2种药剂对雌成螨的毒力高于卵,而不同种群对同一药剂的活性差异不明显;甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对2种叶螨雌成螨和卵的活性比阿维菌素低。     

高温对两种叶螨致死作用的研究

于2008年6~7月,在本院进行了高温对二斑叶螨(Tetranychus urticaeKoch)和朱砂叶螨(T.cinnabarinus Boisduval)致死作用的研究。研究结果表明,在32℃、35℃、38℃、42℃4种温度处理4h后,两种叶螨的卵、若螨和雌成螨3个不同发育阶段均表现出不同程度的死亡,其死亡率随着温度的升高而提高;在相同温度下其死亡率高低顺序依次为卵>若螨>雌成螨。高温条件下,二斑叶螨的死亡率要明显高于朱砂叶螨。     

胡瓜钝绥螨对桑园朱砂叶螨捕食作用研究初报

应用胡瓜钝绥螨对桑园朱砂叶螨的卵、若螨、雌成螨进行捕食作用研究.结果表明,试验条件下,胡瓜钝绥螨对朱砂叶螨各螨态捕食功能反应符合Holling圆盘方程,其对朱砂叶螨卵的控制作用强于幼若螨及雌成螨,a/Th分别为16.2909,3.1051,1.8718;在相同猎物密度下,胡瓜钝绥螨对朱砂叶螨雌成螨捕食率随着自身密度增大而下降,捕食者自身密度干扰反应方程为E=0.4238X-0.6144;胡瓜钝绥螨对朱砂叶螨卵、幼若螨、雌成螨选择系数Q分别为1.71,0.85,0.44,表明其对猎物卵的嗜食性大于幼若螨及雌成螨.     

朱砂叶螨抗甲氰菊酯品系选育及遗传分析

 从保留的室内相对敏感品系分出一个亚品系开始培育朱砂叶螨的甲氰菊酯抗药性品系。连续用药40代，抗性增长68.5倍。以此抗性品系（R）和相对敏感品系（S）杂交、回交，研究朱砂叶螨对甲氰菊酯的抗性遗传形式。正交（SR）和反交（RS）F1代的LC-P线介于S与R之间且偏向S方，显性度DSR和DRS分别为-0.83和-0.29，表明抗性由不完全隐性基因控制；两D值（DRS和DSR）95%置信限没有重叠，表明两个 D值（DSR和DRS）存在显著差异，也表明朱砂叶螨对甲氰菊酯的抗性遗传可能存在母体影响或核外效应；对F1杂合子与亲本的回交（SR♀×S♂和RS♀×R♂）F2代测定表明抗性由单基因控制。