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提取植物和微生物DNA的SDS—CTAB改进法 总被引:7,自引:1,他引:7
该文介绍了一种简便快速地提取植物和微生物细胞总DNA的方法,该法是对提取真菌DNA的SDS-CTAB法进行改进而成,经过修改后的SDS-CTAB法可在数小时内高效地提取细胞总DNA。制备物经琼脂糖凝胶电泳检测到大于20kb的DNA主带,基本无DNA碎带;不用RNase处理,就已经无RNA的干扰。OD260/280值显示产物纯度较高,无需任何纯化处理即可以用于PCR扩增和RAPD分析。 相似文献
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利用改良CTAB法提取淮山叶片高质量DNA 总被引:3,自引:0,他引:3
[目的]为淮山的分子生物学研究奠定基础。[方法]以淮山嫩叶为试材,用改良CTAB法提取其中的DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳和ISSR—PCR扩增对所得DNA的质量和浓度进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]所提取DNA的分子量与λDNA相近,各泳道均出现1条清晰的DNA条带,且条带的完整性较好,无蛋白质和RNA污染,无DNA降解现象;以所提DNA为模板进行ISSR-PCR扩增,可获得稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法简单高效,所得DNA质量较高,RNA消化彻底,DNA无明显降解,进行ISSR分析时,务带清晰,多态性较好。 相似文献
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小麦基因组DNA改良提取方法的探讨 总被引:5,自引:0,他引:5
以标准SDS法、CTAB法、改良SDS法、CTAB法对小麦基因组DNA提取质量进行了比较研究。结果表明,标准方法所提DNA浓度和纯度都较好,但耗时、设备条件要求高;改良方法所提DNA浓度和纯度虽不如标准法,但依然符合实验要求,而且省时、经济、易操作。改良CTAB法提取DNA质量好于改良SDS法,改良方法尤其改良CTAB法是一种适合小麦基因组DNA提取的方法。此方法可用于教学实验和科研中对大量材料DNA的提取,其质量可满足对DNA质量要求较高的实验需要,如AFLP技术。 相似文献
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核果类果树基因组DNA提取方法的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
以核果类果树油桃、扁桃、杏、山桃、榆叶梅和樱桃的幼叶为试材,进行了基因组DNA的提取方法的比较研究,其中改良SDS法效果最好;采用改良SDS法提取油桃的幼叶、花蕾和韧皮部基因组DNA的效果表明,三者均可以作为基因组DNA提取的材料,且以幼叶效果最理想;采用改良的SDS法可在自然阴干的扁桃和油桃叶片中提取到完整的DNA;将改良SDS法提取的油桃不同部位和自然阴干的扁桃和油桃叶片基因组DNA,经SSR-PCR检测发现,扩增效果清晰稳定,完全可以应用于果树分子生物学研究. 相似文献
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陈山红心杉基因组DNA提取方法的比较与分析 总被引:2,自引:0,他引:2
采用尿素法、柠檬酸钠法、改良的CTAB法和SDS法4种方法提取陈山红心杉基因组DNA,并对提取效果进行比较和分析。结果表明,改良的CTAB法较适合陈山红心杉基因组DNA提取,其提取的DNA纯度高、质量好,具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,A260/A280比值在1.8左右,且凝胶检测条带整齐清晰,杂质少、无明显降解。而尿素法和柠檬酸钠法难以提取基因组DNA,SDS法因提取的DNA有蛋白质、多糖等杂质污染均不太适用陈山红心杉基因组DNA提取。酶切分析也证明,改良的CTAB法提取的DNA适用于进行后续分子生物学分析。采用改良的CTAB法能够提取得到陈山红心杉幼叶、老叶、嫩芽和幼茎的基因组DNA产率不同,分别为158.4μg/g、129.6μg/g、177.6μg/g和98.40μg/g。考虑到幼叶样品的采集要比嫩芽方便,因此,可以直接采用幼叶进行陈山红心杉基因组DNA提取。 相似文献
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一种适用于甘蔗SSR-PCR的DNA快速提取方法 总被引:1,自引:0,他引:1
以不同甘蔗品种幼苗期幼嫩叶片为材料,以改良SDS法和DNA快速提取法对甘蔗基因组DNA进行提取,并以SSR-PCR检测比较两者的扩增效果。结果表明,两种方法提取获得的基因组DNA条带基本一致,条带较为清晰,重复性好且稳定,均可满足SSR-PCR扩增的需要。但DNA快速提取法简化了SDS改良法,具有高通量、操作方便、简单、快速、成本低、DNA存放时间较长等优点,能在较短时间内完成大量样品的DNA提取。 相似文献
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对用 SDS法、尿素法、改良 SDS法、氯化苄和 CTAB法提取的大白菜基因组DNA进行了比较。结果表明 ,改良 SDS法提取的 DNA具有典型的天然 DNA分子的标准紫外吸收光谱特点 ,其 A2 6 0 /A2 80 为 1 .7~ 1 .9,A2 6 0 /A2 30 为 1 .8~ 2 .0 ,叶片的 DNA产量为 40 0μg/g。用该法提取的大白菜 DNA适于进行 RAPD分析。 相似文献
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SDS法提取石斛基因组DNA的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以密花石斛(Dendrobium densiflorum Lindley ex Wallich)为研究试材,对植物SDS方法提取基因组DNA中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析。结果表明:不同的SDS缓冲液配制方法提取效果差异较大,Wang's配方产率及纯度都较高;石斛花苞的DNA提取产率较叶片高,但纯度较叶片低;提取过程中,适宜的水浴时间当为30~40min,过短DNA产率下降,过长会引起DNA的降解,或最后产物中增加其他杂质;氯仿/异戊醇抽提次当为2~3次,对去除DNA中蛋白质、多糖及其它杂质有一定的作用,过多则DNA损失也明显;异丙醇沉淀时间10min时核酸析出量在80%以上,纯度相对较高,继续沉淀的产物中DNA含量及纯度明显变低,同时采取挑取絮状沉淀或再用无水乙醇纯化10min的方法,可减少蛋白质、多糖等其它杂质的影响。 相似文献
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一种少量提取植物组织DNA的快速方法 总被引:12,自引:0,他引:12
为了从植物组织中快速提取核酸,从多种DNA提取方法中遴选出2种基本方法。通过优化基本方法的操作步骤、试剂用量与作用时间,建立了一种改良的DNA快速提取方法。在此方法中,用氯仿代替液氮或提取液进行植物组织研磨,之后加入提取液抽提DNA,并用氯仿-异戊醇反复抽提,可显著降低蛋白质含量;通过应用RNA酶可获得纯度较高的DNA。该方法的特点是在室温下即可进行简便操作,快速(提取核酸的过程仅需30min),污染器皿少,实用性强,提取物产量高,纯度好。 相似文献
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分别采用常规CTAB法和SDS法提取甜菜基因组DNA,并将提取的DNA应用于Southern杂交分析,发现基因组DNA的质量对杂交信号有非常大的影响。常规CTAB法提取的DNA产生的Southern杂交信号,仅出现在高分子质量位置;SDS法提取的DNA产生的Southern杂交信号,在高分子质量和低分子质量位置均出现。SDS法提取的甜菜基因组DNA适于Southern杂交分析。 相似文献
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提取板栗DNA的CTAB法和SDS法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
分别采用十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法和十二烷基磺酸钠(SDS)法提取板栗(Castanea mollissima BL.)基因组DNA,取适量DNA进行琼脂糖凝胶电泳,并利用紫外可见分光光度计测定所提取的DNA在260和280 nm的吸光度及其比值,利用Eco R Ⅰ和Mse Ⅰ双酶切后进行随机扩增长度多态性(AFLP)分析.结果表明,两种方法均能从板栗中提取出一定质量的、比较完整的、纯度比较高的DNA,SDS法提取的板栗DNA的纯度更高、质量更好. 相似文献
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为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera嫩叶中获得高质量DNA,设计了5种先提核再提DNA的CTAB法Ⅰ,CTAB法Ⅱ,CTAB法Ⅲ,CTAB法Ⅳ及改进的SDS法,并以常规CTAB法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA进行了提取,采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/A280值测定、限制性内切酶处理和PCR扩增等方法对所提的DNA进行了比较分析。结果表明:实验设计的5种改进方法提取的DNA质量要比常规法的好,但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA的最佳方法;PCR扩增结果表明,不同的DNA提取方法会影响PCR带型的变化。图3表1参13 相似文献