鳗弧菌膜芯片检测条件的优化

采用带正电的尼龙膜作为片基,利用手动芯片点样仪将鳗弧菌6个毒力基因的寡核苷酸探针点样于膜基底上,然后进行紫外交联,制备膜芯片.制备好的膜芯片与6个毒力基因的带有地高辛标记的PCR产物进行杂交,通过观察杂交信号来判断是否含有该基因.通过对膜芯片点样浓度、杂交时间及洗膜步骤进行优化,确定所设计膜芯片最适杂交时间为30 min、点样探针最适浓度50 μmol/L、洗膜过程只需要3步,时间缩短了45 min.     

海洋蛭弧菌LBd02-1的分离及其生物学特性的研究

利用海水双层平板法分离获得蛭弧菌LBd02-1,从基因水平上进行鉴定,并对其生物学特性进行了初步研究。研究结果表明,蛭弧菌LBd02-1对嗜水气单胞菌、鳗弧菌、大肠杆菌和霍乱弧菌等革兰氏阴性菌有较好的裂解作用;对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌的裂解能力较弱。以鳗弧菌为宿主菌,探索了不同条件(温度、盐度、Ca2+、Mg2+)下蛭弧菌LBd02-1对鳗弧菌的裂解效果。试验结果表明,蛭弧菌LBd02-1在温度为25~30℃.盐度为10~30时,对鳗弧菌的裂解效果较佳;在Ca2+浓度为5~10 mmol/L、Mg2+浓度为0.5~2 mmol/L时,蛭弧菌LBd02-1的裂解能力也较好。     

大鲵虹彩病毒β-丙内酯灭活方法的研究

为探讨β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)灭活大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的最适条件,研究了BPL对GSIV的灭活方法。采用终浓度分别为0.025%、0.05%、0.1%、0.2%的BPL灭活细胞培养的GSIV,4℃条件下分别灭活24 h、48 h、72 h、96 h,通过细菌培养、细胞培养、病毒核酸PCR扩增以及鱼体感染试验进行灭活病毒的安全性检验,确定最适灭活条件。试验结果表明,GSIV经终浓度为0.1%的BPL 4℃灭活处理72 h后可完全灭活病毒,灭活病毒无细菌污染,接种对GSIV敏感的鲤上皮瘤细胞系(EPC)细胞无细胞病变效应(CPE)出现,病毒主衣壳蛋白(MCP)基因特异性引物PCR反应未扩增出靶基因产物,灭活病毒对健康大鲵的感染试验未出现疾病症状。灭活效果检测结果表明,与未灭活GSIV相比较,最适灭活条件下的GSIV结构蛋白与抗原性未发生显著变化。结论显示BPL可用来灭活GSIV,本研究确立了BPL灭活GSIV的最适条件,为大鲵虹彩病毒细胞培养灭活疫苗研究奠定了重要基础。     

茜素络合物对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)苗种耳石的染色标记效果

采用茜素络合物(Alizarin Complexone,ALC)分别浸泡标记70 d和170 d半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)苗种耳石,设置了5个浓度组和3个时间梯度组.结果显示,ALC对半滑舌鳎70-170 d苗种的耳石染色效果明显.综合考虑存活率和标记效果,ALC浸泡标记半滑舌鳎苗种耳石的适宜浓度为100 mg/L (36 h浸泡处理)和150 mg/L(24 h浸泡处理).相同浸泡时间下,随着ALC浓度的增加,耳石上标记信号强度增加,但实验鱼死亡率升高;相同浸泡浓度下,随着时间的增加,耳石上标记信号强度增加,实验鱼死亡率也会升高.对标记的170d苗种进行养殖实验,每30 d取样矢耳石进行观察,发现4个月后实验鱼生长良好,且耳石荧光信号仍可清晰检测到,表明ALC在半滑舌鳎矢耳石上形成的荧光标记可长期存续,标记效果好.研究结果可为半滑舌鳎大规模标志放流及早期生活史研究提供群体身份识别技术支持.     

欧鳗弧菌病的诊治

弧菌为革兰氏阴性杆菌，菌体平直或弯折，通常用极毛运动，这类细菌为酵解性或呼吸性外源有机营养菌。是由鳗弧菌通过皮肤伤口和消化器官感染引起的一种常见病，又称为红色瘟疫，此菌首先于1893年自鳗鲡中分离。笔者通过走访福清、永泰等一些养鳗场并结合自身的经验，将此病的诊断和治疗方法陈述如下，以供广大养鳗者参考。病原：病原为创伤弧菌(Vibrio vulnificus)或鳗弧菌(V.anguillarum)，病原菌为革兰氏阴性，大小为(0.5～0.7)微米×(1.0～2.0)微米；极端单鞭毛，能运动；氧化酶呈现阴性；生长温度为10～35℃，最适温度为25℃左右；生…     

噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素(三)

<正>3.3细菌素的化学组分及理化性质细菌素是一种具有生物活性蛋白质类物质。大多数细菌素是含有蛋白质和脂多糖的复合物多浆体,相当于菌体O抗原。细菌素抑制菌体的生长作用与蛋白质成分有关,在蛋白酶的作用下,可破坏其抑菌活性,其活性也与糖脂质有关。弧菌在pH1.3～12.5的范围内作用30min不受影响,56℃环境经5h或煮沸1min不被灭活。但是37℃、pH8.0的环境中与0.05%的胰蛋白酶接触20min,或100℃、10min可灭活。绿脓菌素在pH6.5～9.5环境中是稳定的,经蛋白酶作用,冻融或蒸镏水透     

黄连素对海水病原菌的杀灭效果及药效稳定性

为探讨黄连素对主要海水养殖病原菌的抑菌作用,采用二倍稀释法测定黄连素对迟缓爱德华氏菌、哈维氏弧菌等10种病原菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度,并以美人鱼发光杆菌美人鱼亚种为指示菌,研究黄连素在不同温度、存储条件和金属离子影响下的药效稳定性。试验结果显示,黄连素对10种海水养殖病原菌均具有较好的抑菌及杀菌作用,最小抑菌质量浓度为64～256mg/L,最小杀菌质量浓度为256～1024mg/L。其中,黄连素对大菱鲆弧菌和溶藻弧菌抑菌作用最明显,最小抑菌质量浓度为64mg/L;对鳗弧菌、大菱鲆弧菌、迟缓爱德华氏菌、溶藻弧菌、鲨鱼弧菌和轮虫弧菌杀菌作用最强,最小杀菌质量浓度为256mg/L。质量浓度为512mg/L的黄连素溶液分别在20、40、60、80、100、121℃处理下作用30min,对美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的杀菌率均超过99%,将20、60、100℃处理的黄连素溶液于室温下避光存储35d,对指示菌的杀菌率依然大于99%,显示其良好的药物稳定性。金属离子的影响试验也证实,水环境中的Na+、Mg²⁺、Ca²⁺、K^+等离子对黄连素的杀菌效果无显著影响。因此,黄连素适宜作为防治水产动物细菌性疾病的临床药物。     

豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析试纸条的研制

采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体分泌细胞株,获取抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体,柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒,选择直径20 nm的胶体金颗粒,标记抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体并制备胶体金垫。将胶体金垫与喷涂有抗豚鼠气单胞菌兔多克隆抗体和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜及样品吸收垫等组装成免疫层析试纸条,建立豚鼠气单胞菌的快速检测方法。用灭活细菌与血清混合的模拟样本测定试纸条的特异性、灵敏度,结果显示,试纸条对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌等13种常见病原菌没有交叉反应,与豚鼠气单胞菌显示特异性反应,检测灵敏度为1×10⁶ CFU/mL,结果显示时间小于5 min。研制的豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析检测试纸条具有快速、简便、特异性高、适用于基层临床生产推广应用等优点。     

癸甲溴铵对褐牙鲆的急性毒性及抑菌试验

通过药浴方式,进行了癸甲溴铵对褐牙鲆的急性毒性试验;采用二倍稀释法,进行了癸甲溴铵对鳗弧菌、副溶血弧菌的体外抑菌试验;探讨了癸甲溴铵对鳗弧菌引起的褐牙鲆细菌性疾病的防治效果。结果表明,在19.0～21.0℃和24.5～25.5℃时,癸甲溴铵对褐牙鲆的24、48h半数致死浓度(LC50)和安全浓度(Sc)分别为6.35、4.84、0.84和2.43、2.14、0.5mg/L。通过对中毒死亡褐牙鲆的病理组织学观察表明,癸甲溴铵对褐牙鲆的鳃损害最严重,其次是肝脏,对肾脏的损害相对较轻,特别是对鳃的损害与鱼的死亡有很大的关系。在24和32℃,癸甲溴铵对鳗弧菌、副溶血弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为10、20和5、10mg/L。防治效果试验表明,癸甲溴铵0.3mg/L浓度药浴可有效防治鳗弧菌引起的褐牙鲆细菌性疾病。     

不同保存条件下菲律宾蛤仔的细菌学检测分析

对比分析了菲律宾蛤仔在15℃、4℃、-18℃三种不同保存条件下,其存活率、菌落总数、大肠埃希氏菌数和弧菌总数随时间的变化及其之间的相关性.实验结果发现,4℃保存条件下菲律宾蛤仔的存活率最高,至96 h其存活率仍为100％.细菌学检测方面,随着存放时间的延长,-18℃条件下菲律宾蛤仔的菌落总数、大肠埃希氏菌数、弧菌总数基本维持恒定,均低于初始检测值;而15℃和4℃条件下菲律宾蛤仔的菌落总数和弧菌总数均呈不同程度的上升趋势,并且两者之间的相关性显著,相关系数分别为0.884、0.927,而大肠埃希氏菌数变化幅度不大.     

荧光标记技术在增殖放流中的应用现状

正标志技术是用来区分不同个体或种群的常用方法。自Petersen等[1]利用标志方法估算封闭水体中鱼类的利用率及种群大小后,标志技术在渔业和水产养殖研究中得到广泛的发展和应用,标记技术也不断更新。荧光标记技术是渔业和水产养殖研究中常用标志技术手段之一,其通过特定技术方法在标志对象上形成荧光标记进而通过肉眼或借     

北盘江流域增殖放流鱼类的标志方法研究

用荧光标记法和T-tag锚标法标记了体长11.88-13.13cm的长臀鮠Cranoglanis bouderius、光倒刺鲃Spinibarbus hollandi、白甲鱼Onychostoma simus、花 Hemibarbus maculatus（Bleeker）,以寻找适合北盘江增殖放流鱼类的标志方法。14d的标记结果表明：荧光标志法标记的长臀鮠、光倒刺鲃、白甲鱼、花的成活率均在90.0％以上,是一种较为经济实用的标志方法,可在该流域增殖放流使用。需在短时间内回捕的放流对象也可用T-tag锚标法作辅助标志。     

Complete mitochondrial DNA sequence of Atlantic horse mackerel Trachurus trachurus and molecular identification of two commercially important species T. trachurus and T. japonicus using PCR-RFLP

ABSTRACT:   To characterize and identify mitochondrial DNA (mtDNA) nucleotide sequence variation in two commercially important Trachurus species, Trachurus trachurus and T. japonicus , the complete mtDNA sequence of T. trachurus was determined. The T. trachurus mtDNA consists of 16 559 bp, containing 22 transfer RNA (tRNA) genes, two rRNA genes, and 13 protein-coding genes. Comparing the mtDNA nucleotide sequences of the Trachurus species, a polymerase chain reaction (PCR)-based restriction fragment length polymorphism (RFLP) method was developed to differentiate these two commercially important species. The primer pair Lt1-ND5 and Ht1-ND5, corresponding to ND5 , was designed to amplify a 360-bp fragment. Following digestion with Eco  RI, the PCR product for T. japonicus resulted in 93- and 267-bp fragments, while T. trachurus lacked a restriction site for Eco  RI. In contrast, after digestion with Hin  fI, the T. trachurus PCR product yielded 44-, 84-, and 232-bp fragments, while the T. japonicus product was not digested. The PCR-RFLP analysis established in the present study was useful for identifying T. trachurus and T. japonicus .     

A Comparison of French and English Consumers’ Expectations Regarding Labeled Cod Fillet Products

Consumers in England and France are exposed to different fish products and information at the marketplace. Based on this information and cultural differences, English and French consumers create expectations about fish products. The aim of this study was to compare English and French consumers on: (a) expectations regarding labeling on cod fillet products, (b) important factors when purchasing prepacked and fresh fish, and (c) drivers and barriers to fish consumption. English consumers (n = 120) reported in a survey more positive expectations about thawed products than French consumers (n = 120) due to greater familiarity with relevant labeling information.     

Willingness to pay for shrimp attributes and evidence of stigma following the Gulf Coast oil spill

Mandatory labeling requirements in the United States require shrimp products to be labelled with certain credence attributes: production process and country of origin. To determine the effects of these requirements in the wake of the 2010 Gulf Coast oil spill, we estimate willingness to pay (WTP) for various credence characteristics (geographic origin and production process) and physical attributes using a Becker DeGroot Marschak experimental auction. Although the results are obtained from a small convenience sample, and hence cannot be generalized, we find that participants are willing to pay premiums of $0.90–$1.23 per half-pound for domestic shrimp (regardless of production method) and $0.60–$1.03 per half-pound for wild-caught shrimp. We also find evidence that Gulf Coast shrimp are stigmatized; controlling for other characteristics, participants are willing to pay $1.03–$1.34 less per half-pound for Gulf Coast shrimp. Overall, credence attributes influence WTP more than physical attributes.     

CYP1A1 immunolocalization in the olfactory organ of rainbow trout and its possible induction by β-naphthoflavone: analysis in adults and embryos around hatching

Cytochrome P4501A1 (CYP1A1) isoform, which is known as being of major toxicological significance, has been well-studied in the mammalian olfactory mucosa. Only few studies have dealt with this biotransformation system in the fish olfactory organ which is particularly vulnerable to waterborne xenobiotics since sensory neurons are in direct contact with the aquatic environment. The present immunocytochemical study describes the cellular and subcellular distributions of CYP1A1 in the olfactory organ of rainbow trout in both adults and embryos around hatching. The enzyme inducibility in response to a 4-day exposure to waterborne -naphthoflavone (0.1 mg l^–1), a model inducer of CYP1A1, was also examined. In untreated adult fish, CYP1A1 was almost exclusively expressed in the nonsensory epithelium which covers the edges and the tip of the lamellae. Both goblet and ciliated nonsensory cells appeared immunoreactive. In -naphthoflavone-treated fish, in addition to a strong labeling in the nonsensory epithelium, ciliated nonsensory cells in the olfactory epithelium appeared well-labeled. Four days before hatching, only a few cells were weakly stained in the placodal epithelium of some embryos. By 7 days post-hatching, the enzyme expression was increased in the olfactory pit and it was restricted to ciliated nonsensory cells. No evident CYP1A1 induction was detected in either embryos or alevins. Results suggest the presence of a two-line CYP1A1 biotransformation system in the adult fish olfactory organ: a basal level of enzyme expression insured by the nonsensory epithelium and an additional line in which the sensory epithelium is activated in response to CYP1A1 inducers. This system might take place during development in parallel with the onset of the nonsensory epithelium.     

水硬度对七彩神仙鱼幼鱼发育的影响

采用不同硬度的水对七彩神仙鱼幼鱼进行饲养。6周龄幼鱼在硬度为7.94°dH±0.30°dH时饲养84d后,比在硬度为14.71°dH±0.23°dH水中的幼鱼个体大,生长速度快。表明较高硬度的水有利于七彩神仙鱼幼鱼的生长发育。     

斑节对虾虾苗活力检测方法

该研究通过肉眼观察、镜检,进行干露、饥饿、盐度突降、福尔马林等抗性试验,并采用病毒检测等方法,以期建立评估斑节对虾（Penaeus monodon）虾苗活力和质量标准。结果表明,斑节对虾健康虾苗具有趋光性、集群性,体表光洁,肌肉透亮,肠胃食物充盈等特性。测试虾苗干露时间以15min为宜,健康虾苗干露后能立即恢复活力,而病弱虾苗多出现死亡、昏迷现象;虾苗的成活率随饥饿时间的延长而降低,随福尔马林浓度升高和时间延长而降低,随盐度突降幅度增加而降低。健康虾苗能忍受100～200μL·L^-1福尔马林溶液30min,成活率近100％;在盐度20～30下虾苗的成活情况较好,而其在淡水中仅能存活1h。对虾苗进行病毒检测,可以避免养殖中因虾苗携带病毒而可能导致的病毒性疾病的暴发。     

合浦珠母贝选育家系的遗传多样性分析

该研究选取具有多态性的6对微卫星引物对构建的2批合浦珠母贝(Pinctada fucata)完全双列杂交家系的遗传多样性进行了分析。6个微卫星标记在9个家系360个个体中共检测到32个等位基因,有效等位基因(Ne)为1.758 7~3.586 5,观测杂合度(Ho)为0.144 4~0.488 9,期望杂合度(He)为0.432 0~0.722 2,Shannon指数(I)为0.691 9~1.507 4。9个家系都有单态位点,平均Ho为0.129 2~0.466 7,平均He为0.155 0~0.439 6,平均I为0.248 5~0.712 2。有19个位点(占35.19%)极显著地偏离Hardy-Weinberg平衡。各家系之间的遗传距离为0.109 0~1.137 2,遗传相似性系数为0.320 7~0.896 8。家系L4B46与L4B48的遗传距离最大,与D3D313的遗传距离最小。UPGMA法聚类分析显示,9个家系分为3支,L4B48单独成一支,B4D426、B4D427与D4B445聚成一支,其余家系聚成一支。该研究结果为合浦珠母贝家系选择育种的亲本选择与交配设计提供了科学依据。     

头足类耳石微化学研究进展

耳石是位于平衡囊内起平衡作用的一对钙化组织,它是头足类的加速度感应器,记录其生命周期内的生物和生态信息。随着鱼类耳石微化学研究及应用的日趋成熟与完善,头足类耳石的相应研究也逐渐兴起。目前头足类耳石微化学的研究内容主要包括无机和有机大分子、微量元素、同位素、微化学标记等方面,其中微量元素是应用研究的重点,在头足类种群识别、生活史分析及栖息环境重建等方面发挥了重要作用。分析认为,头足类微量元素在与栖息环境尤其水温关系的研究中取得了很好的结果,被认为是测定头足类生活水温的温度计。然而,涉及种群识别、生活史分析以及与盐度和食物关系的研究还不够充分,且多集中于Sr/Ca的研究。因此,建议在今后的研究中要综合多种研究方法按时间和空间序列从日轮水平分析多种微量元素的含量与变化。