皱纹盘鲍SRAP反应体系的正交优化

采用L16(45)正交试验设计方法,对影响皱纹盘鲍Haliotis discus hannai SRAP反应体系的Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA以及Taq酶活性进行了优化,建立了适用于皱纹盘鲍的SRAP反应体系。优化后的反应体系(10μL)包括Mg2+1.5 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.2μmol/L,Taq酶活性0.25 U,模板DNA 20 ng。采用不同模板和引物对体系进行验证,表明优化后的反应体系能够高效地扩增出可识别条带,为进一步应用SRAP标记对皱纹盘鲍进行遗传分析奠定了基础。     

濒危植物蒙古扁桃SRAP反应体系优化

为利用SRAP技术研究蒙古扁桃资源遗传多样性评价和种质资源鉴定,利用正交试验法L_(16)(4~5)正交设计,对影响蒙古扁桃SRAP-PCR反应体系的Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶量、引物浓度4个因素以及模板DNA浓度进行筛选。优化的蒙古扁桃SRAP-PCR最佳反应体系为Mg~(2+)浓度为2.5 mmol/L,dNTPs浓度为0.25 mmol/L,模板DNA浓度为100 ng,Taq酶浓度为2.00 U,引物浓度1.0μmol/L,2.5μL 10×PCR buffer,总体积为25μL。筛选结果表明,对蒙古扁桃SRAP-PCR扩增结果影响最大的是Taq聚合酶浓度,最小的是dNTPs浓度。运用该体系对144个随机SRAP引物组合进行筛选,筛选出12个条带清晰、多态性高的引物组合,为蒙古扁桃种质资源的研究奠定了基础。     

皱纹盘鲍与九孔鲍杂交的研究

采用皱纹盘鲍与九孔鲍进行杂交,并与两亲本自交进行育苗比较.结果表明：自交组的受精率、孵化率以及存活率显著高于杂交组（P〈0.05）;皱纹盘鲍（♀）×九孔鲍（♂）和皱纹盘鲍（♂）×九孔鲍（♀）杂交的受精率分别为0.9%和3.2%,受精率存在显著差异（P〈0.05）,而孵化率分别为12.4%和13.1%,二者差异不显著（P〉0.05）,二者之间幼体存活率的差异也不显著（P〉0.05）;自交组和杂交组之间的鲍生长速度存在明显的差异（P〈0.05）,杂交组合的生长速度明显比自交组合的要快;但杂交组中稚鲍的存活率和自交组之间差异不显著（P〉0.05）.     

皱纹盘鲍养殖技术——皱纹盘鲍网箱养殖技术

皱纹盘鲍是我国重要的水产养殖品种之一,味道鲜美、营养价值较高,素有海珍八品的美称.在过去主要依靠野生采捕的生产方式,但是近年来生物资源量不断匮乏,难以满足市场的需求.随着我国工厂化育苗和规模化增养殖技术的不断提高,产量得到了有效的保障.为了进一步提升皱纹盘鲍的养殖质量和产量,对皱纹盘鲍网箱养殖技术进行研究和分析,为我国...     

利用正交设计优化芦笋SRAP反应体系

以芦笋（Asparagus offinalis L．）为材料,对影响SRAP—PCR扩增结果的因素dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2＋、引物、模板DNA进行了正交优化设计的研究。结果表明,适合芦笋SRAP—vcR析的最佳反应体系：20μL的反应体积中包括0．2mmol／LdNTPs0．4gL;1UTaqDNA酶1．0gL;1．5mmol／LMg2 1．2μg;上下引物各30ng,每个引物O．5此;60ng模板DNA1．1.0μL;10Buffer2．0凼无菌双蒸水13．4此。为今后利用SRAP标记技术研究芦笋的遗传多样性奠定基础。     

利用正交设计优化芦笋SRAP反应体系

以芦笋(Asparagus officinalis L.)为材料,对影响SRAP-PCR扩增结果的因素dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA进行了正交优化设计的研究。结果表明,适合芦笋SRAP-PCR分析的最佳反应体系:20μL的反应体积中包括0.2mmol/LdNTPs0.4μL;1UTaqDNA酶1.0μL;1.5mmol/LMg2+1.2μL;上下引物各30ng,每个引物0.5μL;60ng模板DNA1.0μL;10×Buffer2.0μL;无菌双蒸水13.4μL。为今后利用SRAP标记技术研究芦笋的遗传多样性奠定基础。     

皱纹盘鲍外套膜的组织学研究

对皱纹盘鲍外套膜的组织学观察发现,外套膜主要由上、下表皮和其间的结缔组织组成。上、下表皮细胞可分为高柱状细胞、弱嗜碱性腺细胞和颗粒状腺细胞3种,结缔组织中富含纤维、血管和神经。聚合体细胞发育形成结缔组织中的粘液泡腺细胞。     

速冻皱纹盘鲍的肌肉营养、蛋白组成及显微结构分析

为探究贝类冻品的营养成分及质地特性,以体质量为(11.42±0.29)g的速冻皱纹盘鲍Haliotis discus hannai为研究对象,对其主要可食部位闭壳肌和足肌的基本营养成分、氨基酸组成、蛋白分布和微观组织结构进行分析。结果表明:速冻鲍鱼肌肉中水分含量很高,达80%以上,其中,闭壳肌中粗蛋白质含量显著高于足肌(P<0.05),两者间粗脂肪含量无显著性差异(P>0.05)且远低于一般水产品;氨基酸分析显示,闭壳肌和足肌均含有丰富的赖氨酸与苏氨酸,但闭壳肌中氨基酸含量显著高于足肌(P<0.05);聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,两部分肌浆蛋白及胶原蛋白分布相似,而肌原纤维蛋白分布存在差异,只有闭壳肌部分在相对分子质量75 000～180 000间有可见条带;光学显微镜分析显示,闭壳肌中肌纤维排列呈交错状、纤维细短、空隙较小,而足肌中肌纤维呈平行排列、纤维粗长、空隙较大。研究表明,速冻鲍鱼的闭壳肌部分在营养成分、氨基酸含量和肌肉嫩度方面均优于足肌部分,为良好的蛋白摄入来源。     

皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究

为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX2蛋白,并进行质谱鉴定及体外抗氧化功能检测。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,经表达条件的优化,在pH为7的培养基中用0.5%甲醇诱导表达72 h,分泌表达上清液中得到相对分子质量约为25 000的稳定表达产物,纯化后的蛋白经质谱鉴定为目的蛋白;体外活性测定发现,该蛋白清除羟自由基(·OH)能力强于维生素C,并对H_2O_2引起的细胞损伤具有一定的保护作用。研究表明,皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化物酶HdhTPX2在毕赤酵母表达系统中得到高效表达,重组表达产物具有抗氧化活性功能。     

皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究

为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX2蛋白,并进行质谱鉴定及体外抗氧化功能检测。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,经表达条件的优化,在pH为7的培养基中用0.5%甲醇诱导表达72 h,分泌表达上清液中得到相对分子质量约为25 000的稳定表达产物,纯化后的蛋白经质谱鉴定为目的蛋白;体外活性测定发现,该蛋白清除羟自由基(·OH)能力强于维生素C,并对H_2O_2引起的细胞损伤具有一定的保护作用。研究表明,皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化物酶HdhTPX2在毕赤酵母表达系统中得到高效表达,重组表达产物具有抗氧化活性功能。     

盐度渐变对杂交鲍免疫因子的影响

采用逐渐改变盐度的方法,结合相关免疫酶学测定方法,研究盐度由34渐变至16、22、28、40后,48 h内杂交鲍[皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino,♀)×日本盘鲍(H.discus discus Ino,♂)]血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)、抗菌活力(Ua)的变化规律,旨在研究盐度渐变对杂交鲍免疫相关因子的影响.结果显示,盐度28、34(对照)组5种免疫因子变化均不显著.盐度40组,AKP活力极显著低于对照组;CAT活力显著升高,而后逐渐降低,最终显著低于对照组;LZM活力下降后逐渐稳定在一个显著低于对照组的值.盐度22组,AKP活力有下降的趋势,在48 h时显著低于对照组.盐度16组SOD、AKP、LZM、Ua均有下降的趋势,并且在48 h时均显著低于对照组;整个试验过程中,CAT活力均显著低于对照组.结果表明,盐度接近或高于40及接近或低于16将显著影响杂交鲍5种免疫因子的活力,进而影响其免疫力.     

总氨、亚硝酸氮及养鲍污水对皱纹盘鲍生长的影响

单因子总氨氮(TNH3-N)、亚硝酸氮(N02^--N)试验表明,当养鲍用水中非离子氨氮(NH3-N)为0．035mg／L以下或N02^--N为0．8mg／L以下时,对皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino幼鲍的生长不产生明显影响;NH3-N对幼鲍生长产生影响的EC5(引起幼鲍生长速度减慢5％的浓度)为0．103mg／L,不产生影响的最大浓度为0．045mg／L。双因素试验结果表明,水中TNH3-N、N02^--N对幼鲍生长的影响没有交互作用,只是简单的相加作用。经回归表明,养鲍自污染水中,NH3-N是影响幼鲍生长的主要因子,它对幼鲍生长产生影响的EC5为0．022mg／L,不产生影响的最大浓度为0．0lmg／L,均比单因子试验结果显著降低。     

日本西氏鲍与皱纹盘鲍杂交试验初报

2005年在福建省平潭县对日本西氏鲍(H a liotis siebold ii)与皱纹盘鲍(H a liotis d iscus hanna i)进行了杂交试验。结果表明,皱纹盘鲍♀×西氏鲍♂和西氏鲍♀×皱纹盘鲍♂的受精率分别为14.5%和13.8%,西氏鲍和皱纹盘鲍自交的受精率分别为80.5%和75.3%。杂交鲍成活率高、生长速度和越冬成活率均略低于日本西氏鲍,而明显高于皱纹盘鲍,显示出了良好的生产性状和一定的杂种优势。     

皱纹盘鲍血细胞分类及活性氧产生机理的研究

研究了皱纹盘鲍HaliotisdiscushannaiIno血细胞的组成、数量、吞噬作用及活性氧产生机理。皱纹盘鲍血细胞分为透明细胞和颗粒细胞两大类。透明细胞无颗粒,具嗜碱性细胞质,约占循环血细胞总量的60%;颗粒细胞含嗜酸性颗粒。这两种血细胞都有吞噬作用,尤其是颗粒细胞,经酵母细胞刺激后,血细胞释放活性氧,还原氮蓝四唑(NBT)形成甲肷沉淀,有化学发光现象。长期饥饿的皱纹盘鲍,血细胞活性氧量低于正常水平。     

皱纹盘鲍血细胞分类及活性氧产生机理的研究

研究了皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino血细胞的组成、数量、吞噬作用及活性氧产生机理。皱纹盘鲍血细胞分为透明细胞和颗粒细胞两大类。透明细胞无颗粒,具嗜碱性细胞质,约占循环血细胞总量的60％;颗粒细胞含嗜酸性颗粒。这两种血细胞都有吞噬作用,尤其是颗粒细胞,经酵母细胞刺激后,血细胞释放活性氧,还原氮蓝四唑(NBT)形成甲欣沉淀,有化学发光现象。长期饥饿的皱纹盘鲍,血细胞活性氧量低于正常水平。     

红鲍人工育苗及其与皱纹盘鲍杂交试验的初步研究

对引进的美国红鲍进行人工育苗及与纹盘鲍杂交的试验研究,人工育苗及杂交都取得了成功,红鲍受精率为８５．０％,杂交受精率介于２．１－１．８％,后代稚鲍成活率较高,抗病能力强,生长良好。