miR-143在肌细胞中的表达及其影响

本试验旨在研究microRNA-143(miR-143)对小鼠肌细胞增殖和分化的影响。利用Real-time PCR方法对细胞不同分化时期进行检测,并且在小鼠肌细胞C2C12中通过转染miR-143 mimics和Inhibitor对标志基因myogenin(MyoG)进行检测,然后利用免疫荧光和Western blotting方法对组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因表达水平进行检测。结果表明,miR-143与肌细胞的增殖和分化密切相关,过表达miR-143后,肌细胞标志基因MyoG出现下调,敲低后结果相反,且在分化细胞中过表达miR-143,免疫荧光和Western blotting结果显示,标志基因MHC的表达水平下降。因此,miR-143是一个潜在的影响肌肉生长发育的microRNA,为以后肌肉发育和功能的研究提供了一个新的资料。     

miR-383在牦牛、犏牛睾丸组织中的差异表达及功能预测

本研究旨在分析miR-383成熟体在雄性牦牛和犏牛F1代睾丸组织中的差异表达,以了解其在精子形成中的重要作用.以发育成熟的牦牛和犏牛睾丸组织为材料,利用实时荧光定量PCR方法检测miR-383成熟体在牦牛及犏牛睾丸组织中的差异表达情况;利用TargetScan和miRanda数据库获得miR-383的靶基因集合,通过David和Gene Ontology在线软件分析miR-383靶基因的生物学功能.实时荧光定量PCR结果显示miR-383成熟体在牦牛和犏牛F1代睾丸组织中表达显著差异(P<0.05),在牦牛睾丸组织中表达量较高,靶基因预测共获得131个靶基因,GO分析及KEGG信号通路分析得到miR-383靶基因功能,这些靶基因参与了细胞增殖、凋亡、核酸合成调控等过程.结合miR-383成熟体的表达差异和靶基因功能预测结果,miR-383可能参与生殖细胞的分化及精子形成调控,为miR-383在犏牛生殖细胞中的功能与调控机制研究提供了理论依据.     

胰岛素受体-1在尼罗罗非鱼不同组织中的表达及其对注射葡萄糖的响应

本试验旨在研究胰岛素受体-1(IR-1)在尼罗罗非鱼不同组织中的表达及其对注射葡萄糖的响应。利用PCR扩增的方法从尼罗罗非鱼肌肉中克隆IR-1的c DNA片段,并通过半定量PCR检测,比较IR-1在肌肉、肝脏和心脏中的表达差异。选取体重约为100 g的尼罗罗非鱼160尾,随机分2组,每组4个重复,每个重复20尾。试验组腹腔注射葡萄糖(每100 g体重30 mg),对照组以相同剂量腹腔注射0.7%的无菌生理盐水。在注射前(0 h)和注射后的1、3、6和12 h分别进行采样,测定血浆葡萄糖和胰岛素含量,并通过实时荧光定量PCR检测IR-1在肌肉、心脏和肝脏中的mRNA相对表达量。结果显示:1)克隆出的IR-1 c DNA片段,其Gen Bank登陆号为JN967750,大小为1 979 bp,编码548个氨基酸。序列分析发现,尼罗罗非鱼的IR-1与其他物种比较具有很高的保守性,并具有丰富的酪氨酸激酶特征性序列。2)IR-1在尼罗罗非鱼肌肉、心脏和肝脏中均有较高的表达量,其中在肝脏和肌肉中的表达量基本一致,而在心脏中的表达量相对较低。3)试验组血浆葡萄糖含量在注射葡萄糖1 h后达到最高,并显著高于对照组(P0.05),而后开始下降,3 h后恢复到正常水平;试验组血浆胰岛素含量在葡萄糖注射3 h后达到最高,并显著高于对照组(P0.05),而后开始下降,12 h后恢复到正常水平。试验组肌肉和肝脏中IR-1 mRNA的相对表达量在注射葡萄糖后6 h时达到最高,显著高于对照组(P0.05),在12 h时恢复到正常水平;试验组心脏中IR-1 mRNA的相对表达量在注射葡萄糖后的12 h内没有发生显著变化(P0.05)。结果表明,注射葡萄糖后即刻升高了尼罗罗非鱼的血浆葡萄糖含量,相对于血浆葡萄糖含量的升高,血浆胰岛素含量的升高相对延迟,而肌肉和肝脏中IR-1 mRNA相对表达量的提高又延迟于血浆胰岛素含量的升高,从而加重了尼罗罗非鱼对葡萄糖的代谢负担。     

从江香猪miR-143-3P克隆及组织表达

为探究miR-143-3P对从江香猪的表达调控作用,本研究通过SWChen 2.3程序筛选出PRKAA1基因3'-UTR相关的miRNAs,利用生物信息学软件分析其保守性,采用茎环法设计引物克隆miR-143-3P序列,运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测该miRNA在从江香猪各组织中的表达水平.结果表明:...     

安徽白山羊不同组织miR-143表达丰度的Real-time PCR检测

MicroRNA(miRNA)是一类重要的非编码小RNA分子,其通过对靶基因的转录后调控广泛参与真核生物生殖、发育、病毒防御、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等多种生命活动。采取比较基因组学方法,在对其他7种哺乳动物直向同源基因序列分析的基础上,设计特异性引物,应用实时定量PCR技术测定安徽白山羊心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管、肌肉等9种组织中miR-143的表达情况。结果表明,依据同源基因设计的引物,可以进行山羊miR-143基因特异性检测。安徽白山羊miR-143表达丰度以肺脏最高,肝脏最低;7种组织相对表达量由高到低依次为:肺、子宫、心、脾和卵巢、输卵管和肌肉、肾、肝。研究结果为进一步研究miR-143在山羊组织分化及生长发育过程中的作用提供了借鉴。     

miR-92基因进化及在鸡不同发育时期组织表达谱和其功能预测分析

microRNA(miRNA)在不同物种间进化具有高度保守性,且在动物生长发育过程中有重要作用。为研究miR-92的进化历史、miR-92在不同组织的表达差异性和在生长发育过程中的作用,本文运用多序列比对分析序列相似性,并构建系统进化树分析miR-92基因的进化特点,运用SYBR Green System PCR技术构建了miR-92在鸡不同发育阶段11个组织中的表达谱,同时用TargetScan 7.0与PicTar两种不同生物学软件对其进行靶基因预测,两个软件靶基因的交集分别进行GO和KEGG富集分析。结果表明:(1)miR-92的进化方向与物种从低等到高等的进化趋势相一致,在不同物种中的基因位置和序列上都表现出较高的相似性,这与miRNA在物种间高度进化保守性的特点基本一致;(2)同一个时期,不同组织部位的表达有组织特异性,在1日龄的鸡中,肾脏,腿肌和心脏有较高的表达量。在成年鸡中,表达量较高的组织为肺脏,胸腺和下丘脑。在同一组织的1日龄和成年鸡中的表达呈现时序性,除脾脏的表达量差异不显著外,其他10个组织miR-92的表达量差异显著(P0.05);(3)两个软件预测到的交集靶基因有157个,GO富集结果显示靶基因主要参与转录过程,RNA代谢过程,DNA结合,转录因子活性,MAPK磷酸酶活性等。显著富集的KEGG通路为MAPK信号通路(P0.05)。这些结果为进一步研究miR-92基因在机体中所扮演的角色奠定了基础。     

miR-126-5p在沙子岭猪睾丸组织差异表达分析及功能预测

利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-126-5p在沙子岭猪睾丸组织8个不同发育时期(E90、D1、D30、D60、D90、D120、D150、D180)表达量,以了解其在动物睾丸发育及精子生成中的作用。利用miRanda、TargetScan和mirWalk 3个数据库预测miR-126-5p靶基因并取交集,利用David在线软件分析miR-126-5p靶基因的生物功能。结果表明,miR-126-5p在胚胎期(E90-D1)睾丸组织中高表达,而在生长期(D1-D90)表达量下调,但在沙子岭猪性成熟(D120)后表达量又上调,其中D1表达量最高,D90表达量最低,且二者与其他7个时期均差异极显著(P0.01);D30、E90、D180相互之间差异不显著(P0.05),且分别与其余各时期差异极显著(P0.01);D120与D30差异显著(P0.05),与其余各时期差异极显著(P0.01);D150与D60之间差异不显著(P0.05),二者分别与其余各时期差异极显著(P0.01)。miR-126-5p靶基因参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞通讯、迁移及蛋白质转运等生物学过程(P0.001);靶基因分子功能包括蛋白二聚体活性、配体依赖性核受体活性(P0.001);KEGG分析显示miR-126-5p靶基因参与TGF-β、MAPK、细胞黏附等信号通路(P0.01)。结合miR-126-5p在睾丸组织不同发育时期表达差异结果及其靶基因功能预测结果,miR-126-5p可能参与沙子岭猪生殖细胞分化及精子生成调控,本研究为miR-126-5p在动物精子生中的作用及其调控机制的研究提供依据。     

miR-378在牛不同组织中的表达规律及功能分析

为探索miR-378在牛不同组织中表达量差异及其靶基因的调控功能,通过实时荧光定量PCR验证其在牛不同组织中的表达规律,同时将实时PCR中获得的数据用Realplex软件进行基因相对表达差异分析。在牛不同组织中,miR-378表达量在大脑和小肠中的表达量约为肝脏的3倍和4.5倍,而在脾脏中的表达量约为肝脏的8倍。从miR-378的表达规律可以推测其对牛大脑、小肠、脾脏功能及代谢有一定调节作用。应用生物信息学分析miR-378候选靶基因及其功能,并应用双荧光素酶报告验证SLC26A9为miR-378靶基因,证明miR-378可能通过靶向调控其靶基因而发挥作用。     

黄芪多糖对种公鸡不同组织miR-16表达的影响及其功能预测分析

本试验研究黄芪多糖(APS)对种公鸡不同组织中miR-16表达的影响,结合miR-16预测靶基因的GO和KEGG功能富集性分析,旨在探讨APS对不同组织功能的潜在调控作用。选取1日龄科宝500父母代肉种鸡64只,随机分为对照组和APS组,每组4个重复,每个重复8只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,APS组在基础饲粮中添加10 g/kg APS,试验期40周。结果表明:1)相比于对照组,APS组可以提高种公鸡的采精量和有效精子数,降低精子畸形率,但差异不显著(P0.05)。2)miR-16具有组织差异性,APS可显著或极显著上调肝脏、脾脏、十二指肠黏膜、回肠黏膜miR-16的表达(P0.05或P0.01),显著降低睾丸miR-16的表达(P0.05)。3)对miR-16预测靶基因进行GO富集分析,表明预测靶基因在跨膜运输、泛素依赖的蛋白质降解、胞内蛋白运输、糖酵解等物质代谢相关生物过程显著或极显著富集(P0.05或P0.01)。KEGG富集分析表明,miR-16靶基因在黏着斑、胰岛素信号通路、糖酵解/糖异生等与机体物质代谢、细胞增殖分化相关通路显著富集(P0.05),在Toll样受体信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等免疫相关通路也有富集。由此可见,APS上调种公鸡脾脏、肝脏、十二指肠黏膜、回肠黏膜组织的miR-16表达,下调睾丸miR-16表达;miR-16预测靶基因与物质代谢、免疫调控密切相关。APS通过调控种公鸡不同组织miR-16表达,影响机体物质代谢和免疫调控功能。     

酵母铬对尼罗罗非鱼生长和糖代谢的影响

本试验旨在研究酵母铬对尼罗罗非鱼生长性能、血液生化指标、鱼体营养组成以及糖代谢相关基因胰岛素受体(insulin receptor,IR)和葡萄糖转运载体(glucose transporter,GLUT)表达的影响。选取平均体重为(15.80±0.02)g的尼罗罗非鱼300尾,随机分成4组,每组3个重复,每个重复25尾鱼。以酵母铬为铬源配制4种饲料,以三价铬(Cr3+)浓度计算,其添加水平分别为0(对照)、0.2、0.4和0.8 mg/kg。每组随机饲喂1种饲料。试验期为50 d。结果表明:虽然添加酵母铬对尼罗罗非鱼的生长性能、血液生化指标和鱼体营养组成的影响没有达到显著水平(P>0.05),也没有显著影响肝脏和肌肉中IR以及肌肉中GLUT4基因的表达(P>0.05),但0.8 mg/kg组肝脏中GLUT2基因表达量显著高于对照组和0.2 mg/kg组(P<0.05)。上述结果说明,添加酵母铬具有上调尼罗罗非鱼肝脏中GLUT2基因表达的潜在能力。     

miRNA在哺乳动物性腺发育中的功能

MicroRNA(miRNA)作为一种内源性的非编码RNA,以影响靶基因表达的方式来调节机体功能。miRNA能调控哺乳动物性腺(睾丸和卵巢)的发育,促进精子与卵母细胞的分化成熟,影响受精卵的发育过程,并可能作为诊断生殖疾病卵巢癌的重要指标。本文对miRNA的生物合成过程,miRNA在哺乳动物性腺发育以及卵巢癌变过程中的调控功能进行了综述,提出该领域主要发展方向是miRNA在哺乳动物性腺发育中的体内功能研究,希望以分子生物学和生物信息学手段,从分子、系统等不同角度阐明单一某种miRNA在哺乳动物性腺发育及卵巢癌变过程中的具体调节机制和信号通路情况。这为研究哺乳动物生殖疾病,选育畜牧生产中优质品种提供了新的思路和途径。     

猪睾丸组织中miR-375的表达及靶基因预测

生物信息学方法预测出miRNA-375可能的靶基因为DIAPH2和QKI,实时荧光定量法检测了靶基因在1日龄、1-7月龄军牧1号白猪睾丸组织中的表达量。结果表明,3月龄前猪睾丸组织中miRNA-375表达量极低,4-7月龄表达水平逐渐上调,差异显著。预测靶基因DIAPH2在1-7月龄呈显著下调趋势,OKI基因在1-7月龄睾丸组织中表达水平呈显著上调趋势。经SPSS13.0分析可知,不同时期睾丸组织中miRNA-375与2个预测靶基因DIAPH2和QKI的相关系数r分别是-0.396（P〈0.05）,0.411（P〈0.05）,2个预测靶基因DIAPH2和QKI之间的相关系数是0.151（P〉0.05）,靶基因DIAPH2和QKI无明显联系,初步证明DIAPH2可能是miRNA-375的靶基因,为探索猪睾丸组织发育提供了一定的研究基础。     

L-赖氨酸硫酸盐对尼罗罗非鱼生长和消化的影响

将270尾平均体重为4g的健康尼罗罗非鱼按饲养试验要求分为3组,每组3个重复,每个重复各30尾,试验1组和2组分别在基础日粮中添加0.26%L-赖氨酸盐酸盐和0.39%L-赖氨酸硫酸盐,按产品中的赖氨酸含量计算,两组赖氨酸含量均为0.2%。饲养56d结果表明,与基础日粮组相比,添加L-赖氨酸硫酸盐使罗非鱼日增重、特定生长率、蛋白质效率、干物质和粗蛋白消化率分别提高了20.93%(P<0.05)、7.14%(P<0.05)、21.43%(P<0.05)、7.51%(P<0.05)和4.78%(P<0.05);L-赖氨酸盐酸盐也有提高生长性能和饲料养分表观消化率的趋势,但差异不显著(P>0.05)。     

miR-184及miR-205在绵羊不同生长时期毛囊及其他组织中的表达研究

为了研究miR-184及miR-205在绵羊毛囊发育过程中的作用,本研究以绵羊为研究材料,检测了miR-184及miR-205在毛囊3个发育时期及不同组织中的表达情况,进行了基因组定位及前体预测,并预测了可能的靶基因及调控的基因通路.结果发现,miR-184的表达量从毛囊生长期到衰退期呈逐步上升的趋势,而miR-205则表现为先上升后下降,其在衰退期表达量最高.2个microRNA在绵羊的多个组织中均有表达.两者的候选靶基因涉及15个基因通路,可能通过Wnt通路调控毛囊的生长周期.     

miR-24基因家族进化及其在猪睾丸组织中的表达变化分析

通过miRBase数据库检索miR-24基因家族序列,利用Ensembl数据库信息确定miR-24家族在不同物种中的基因组定位,采用MEGA 5.0构建miR-24基因家族的系统进化树,并利用RT-qPCR检测miR-24-1及miR-24-2在沙子岭猪睾丸组织不同发育期(E90、D1、D30、D60、D90、D120、D150、D180)的表达变化。在miRBase数据库检索32个物种共66条序列,且各序列均具有高度保守性。基因组定位显示大部分物种的miR-24基因位于常染色体上。RT-qPCR结果显示,miR-24基因家族2个成员(miR-24-1、miR-24-2)在沙子岭猪睾丸不同发育阶段呈现出协同表达的规律。本研究对miR-24基因家族进行系统进化分析并检测其在沙子岭猪睾丸组织中表达变化规律,为进一步探明miR-24基因家族的功能及作用机制奠定基础。     

miR-23基因家族进化分析及其在猪睾丸组织中的表达变化

运用生物信息学方法在miRBase数据库检索到miR-23基因家族的序列,利用Ensembl数据库信息确定miR-23在基因组的位置,采用MEGA5.0构建miR-23系统进化树,再利用RT-q PCR技术定量检测其在沙子岭猪睾丸组织中7个不同发育时期(D1、D30、D60、D90、D120、D150、D180)的表达变化。结果表明:在37种物种中共搜索到82条序列,且各序列具有高度保守性,大部分位于基因间隔区。进化分析表明:各物种miR-23基因家族可能以不同的方式和速度进化而来。RT-q PCR检测结果显示,miR-23基因家族在猪睾丸组织中不同发育时期表现出相同趋势的表达规律,即出生后其表达水平有所降低,到性成熟期又呈现升高趋势。本研究对miR-23基因家族进行系统进化分析并检测其在沙子岭猪睾丸组织中表达变化规律,为进一步探明miR-23基因家族的功能及作用机制奠定基础。     

miR-192进化分析、靶基因预测及组织表达分析

【目的】研究miR-192的生物进化进程和潜在靶基因功能,以及miR-192在大围子猪(脂肪型猪)和大约克夏猪(瘦肉型猪)脂肪组织中的差异表达。【方法】利用miBase数据库获取miR-192成熟序列,并利用Ensembl数据库定位miR-192在不同物种基因组的分布特征;采用Mega 11.0软件程序构建miR-192系统进化树;通过实时荧光定量PCR检测miR-192在大围子猪和大约克夏猪背部脂肪组织中的表达情况,并比较表达差异;利用不同在线网站预测猪miR-192靶基因,并对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】miR-192在生物进化过程中具有高度保守性;实时荧光定量PCR结果显示,miR-192在大围子猪背部脂肪组织的表达量极显著高于大约克夏猪(P<0.01));GO功能和KEGG通路富集分析结果表明,miR-192靶基因主要起转录前调节和结合的作用,且主要在染色质和细胞核中发挥作用,多数基因富集在与脂肪代谢相关的信号通路;对3个网站不同物种预测结果取交集共获得猪miR-192保守靶基因5个。【结论】miR-192在生物进化过程中具有高度保守性,可能通过靶向...     

鸡miR-125b的组织发育性变化及其功能预测分析

为了解miR-125b的进化历史和潜在的生物学功能,下载不同物种miR-125b前体序列,运用Clustal W2软件进行多序列比对,构建系统进化树,q PCR方法检测固始鸡不同组织中miR-125b表达量的发育性变化,通过Targetscan 7.0与miRDB数据库对miR-125b靶基因进行预测、DAVID数据库对预测的靶基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果显示:不同物种之间miR-125b具有很高的保守性;在胚胎期下丘脑中,随着胚胎发育,miR-125b的表达量逐渐增加,出壳后又呈现逐渐降低的趋势,到36周龄表达量又显著升高;在成年期消化器官(肌胃、腺胃、小肠、肝脏)中也具有较高的表达量;经预测,miR-125b靶基因有920个,富集于组织发育、生物调节、基因表达的转录后调节、小RNA的生物学加工等生物过程和细胞外基质受体相互作用、调节肌动蛋白细胞骨架、MAPK信号通路、胰岛素信号通路、不饱和脂肪酸的生物合成和NOD样受体信号等通路。结果表明:鸡miR-125b为广泛性时序表达miRNA,可能参与鸡胚胎期及出壳后生长发育相关的诸多生物学过程的调控。     

外来物种尼罗罗非鱼和本地物种鲫鱼混养的初步研究

为了解外来物种与本地物种之间的空间竞争关系,探究外来物种与本地物种混养存在的利弊,试验采用实验室饲喂称重的方法研究外来物种尼罗罗非鱼和本地物种鲫鱼之间的空间竞争关系。以空间资源为竞争条件,通过其生物学和生态学特征以及环境适应性的差异研究入侵物种对生物多样性和生态环境的影响,从而得到空间关系与种间斗争对尼罗罗非鱼和鲫鱼的影响。结果表明:尼罗罗非鱼与鲫鱼在不同配比的混养情况下,体重均降低,其中鲫鱼的体重下降更多,但均有正增长的趋势。说明尼罗罗非鱼与鲫鱼之间存在空间竞争关系,而且尼罗罗非鱼表现出较强的竞争优势。     

不同水平和来源植酸酶对尼罗罗非鱼营养物质利用的影响

尼罗罗非鱼是发展中国家非常重要的食用鱼之一,广泛高密度商业养殖.高密度养殖就要求提高养殖技术,包括低成本和低污染饲喂方法.鱼粉仍然是水产饲料中重要的蛋白源,然而,许多国家鱼粉资源十分有限,成本也高,因此使用植物蛋白替代鱼粉是一个非常重要的课题.植物原料中的抗营养因子,如:植酸和消化酶抑制因子使植物蛋白效价大打折扣.植物原料中70％的磷是以植酸磷形式存在,尤其鱼类肠道中植酸酶的缺乏,导致磷不能有效利用.钙、镁、锌、锰、铜和铁也会受到植酸的影响.植酸也会与蛋白结合降低蛋白和氨基酸的利用率.植酸影响常规养殖鱼类饲料的利用率,如:草鱼、罗非鱼和虹鳟.体外研究表明:植酸蛋白复合物是不可溶的,影响水解蛋白酶的分解.