健康奶牛阴道乳酸菌的分离与鉴定

采集10份健康奶牛阴道临床样品,利用MRS琼脂培养基进行细菌分离培养与纯化,通过形态特征观察、生化试验、16S r RNA基因序列对分离菌株进行鉴定,并通过抑菌试验检测分离菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌等致病菌的抑菌能力。结果显示,分离筛选到3株乳酸菌,其菌落特征、形态特征、生化特性均符合乳酸杆菌的特性,均具有较好的生长性能和较强的产酸能力,与Gen Bank中乳酸杆菌的同源性均在99%以上,对病原菌的抑菌环直径均在11.41 mm以上。研究表明分离鉴定的3株乳酸杆菌是有潜质的有益菌株,可作为奶牛子宫内膜炎防治的候选益生菌。     

健康奶牛阴道乳酸菌分离筛选及益生特性

对产后健康奶牛阴道的乳酸菌进行分离筛选并对乳酸菌功能特性进行研究。采用传统方法对健康奶牛阴道内乳酸菌进行分离,通过抑菌试验对乳酸菌分离株进行筛选,并研究其产酸性能、抗生素敏感性,通过16SrDNA序列分析方法对分离株进行鉴定。最后获得4株乳酸菌分离株,经鉴定分别为唾液乳杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌和巴黎链球菌。4株菌株均可作为防治奶牛子宫内膜炎潜在的益生菌使用。     

一株乳酸菌GF103的分离鉴定及体外益生效果评价

本研究旨在利用分子生物学手段鉴定乳酸菌GF103的菌种属性,并通过体外法评价其作为益生菌的益生效果,筛选出具有益生作用的乳酸菌。试验从北京市大兴种猪场附近土壤中分离得到一株能抑制病原菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长的乳酸菌,编号为GF103,经16SrRNA基因序列分析鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。经体外益生效果评价得知,乳酸菌GF103在pH=3的条件下活菌数较高,能够耐受0.3%胆盐。乳酸菌GF103在人工模拟胃液中培养0.5 h活菌数不受影响(P>0.05),培养3 h活菌数降低1 log值(P<0.01);在人工模拟肠液中培养3 h活菌数不变(P>0.05)。结果表明,乳酸菌GF103具备益生菌特性,可进一步研究其作为微生物添加剂在动物上的应用效果。     

2株分离乳酸菌对奶牛阴道上皮细胞的黏附作用

益生乳酸菌对奶牛阴道上皮细胞黏附能力的强弱是其发挥益生作用的前提条件,因此黏附能力是筛选益生菌的重要标准之一。为筛选出可以制备微生态制剂的益生乳酸菌菌株,本试验采用碳氢化合物黏着法、紫外分光光度法、酶联免疫吸附法,测定了2株乳酸菌SQ0048、SQ0054及混合菌株的疏水性能、自凝集能力、生物被膜形成能力及其影响因素,并采用瑞士吉姆萨染色法研究了2株乳酸菌及其混合菌株对奶牛阴道上皮细胞的黏附作用。结果显示,菌株SQ0048以及混合菌株在不同pH值条件下对正十二烷的疏水作用极显著性高于二甲苯(P0.01);在3h时,菌株SQ0048在pH5时的自凝集能力极显著高于pH7和pH6时的自凝集能力(P0.01);菌株SQ0048在pH5时的成膜能力最强,为强被膜生物形成株,菌株SQ0054为弱被膜生物形成株,混合菌株也为弱被膜生物形成株;混合菌株对奶牛阴道上皮细胞的黏附性极显著高于2株单一乳酸菌(P0.01),2株单一乳酸菌对奶牛阴道上皮细胞的黏附具有协同作用。结果表明,2株乳酸菌及其混合菌株均具有良好的黏附能力,而混合菌株更适合用于微生态制剂的研发。     

健康奶牛肠道中乳酸菌的分离与鉴定

在奶牛饲料中添加优良的乳酸菌微生物制剂对于生产实践有着重要的意义。由于奶牛肠道中的乳酸菌本身已适应奶牛肠道中的环境,并且与奶牛肠道中的致病菌长期拮抗竞争,因而是奶牛饲料中添加益生菌株的最佳来源。本试验利用改良MRS培养基从20头健康的荷斯坦泌乳牛粪便中进行菌群的分离鉴定,采用16S rRNA基因序列对分离的乳酸菌进行鉴定。最终获得瘤胃乳杆菌、乳酸乳球菌等18株乳酸菌。该试验中分离得到的乳酸菌为多角度开发我国乳酸菌资源和微生态制剂在畜牧生产中的应用奠定基础。     

健康奶牛生殖道乳酸菌的分离鉴定及其抑菌活性研究

【目的】从健康奶牛生殖道分离筛选益生乳酸菌,为未来防治奶牛子宫内膜炎提供益生菌菌株并为开发防治此病的微生态制剂奠定基础。【方法】采集10份健康奶牛的生殖道分泌物样品,用MRS培养基进行分离培养,通过形态学观察和16S rDNA序列对分离出的菌株进行鉴定,将所得序列结果与NCBI核酸数据库参考菌株进行相似性比对,确定各分离菌株的种属。利用牛津杯法分离筛选出具有较好抑菌活性的菌株,研究这些筛选出的菌株的生长曲线、产酸能力及抗菌药敏感性,并对其主要抗菌物质进行检测。【结果】从10个样品中共分离出13株乳酸菌,经染色镜检和16S rDNA测序分析鉴定出13株乳酸菌,分别为植物乳杆菌11株、殊异肠球菌和鼠肠球菌各1株。单株抑菌试验得到5株对大肠杆菌抑菌能力较好的乳酸菌,5株乳酸菌生长特性及产酸能力均良好,对氨苄西林、四环素、红霉素、利福平、甲氧苄啶、氯霉素和青霉素7种抗菌药物敏感性较强。其中21和35号菌株的抗菌物质为过氧化氢和细菌素,而25、33和34号菌株的抗菌物质除过氧化氢和细菌素外还包括有机酸。【结论】从奶牛生殖道中分离得到的3株乳酸菌有望作为微生态制剂用于奶牛子宫内膜炎的临床防治,其具...     

不同乳酸菌分离株抗菌物质及其抗菌活性的体外检测及鉴定

为检测及鉴定乳酸菌分离株的抗菌物质,本研究采用牛津杯法测定乳酸菌的抗菌活性,通过上清液煮沸、过氧化氢排除试验、蛋白类排除试验、有机酸排除试验检测并鉴定了本实验室前期从健康奶牛阴道内分离获得的5株酸菌的抗菌物质。结果显示,这5株乳酸菌对指示菌均具有良好的抗菌活性。坚强乳杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌和巴黎链球菌的主要抗菌物质为有机酸,黏膜乳杆菌的抗菌物质为过氧化氢、蛋白和有机酸。本研究表明黏膜乳杆菌可以初步作为防治奶牛子宫内膜炎的潜在益生菌使用。     

猪阴道乳酸菌分离及益生功能评价

旨在从健康母猪阴道内分离筛选益生乳酸菌,为防治猪产后子宫内膜炎提供益生菌株。测定乳酸菌的抗菌活性、产酸、过氧化氢能力及抗生素敏感性。研究结果表明,8株菌株可抑制3种病原菌生长,并具有良好的产酸性能,LTL1和LTL2不能够产生过氧化氢,所有菌株均对庆大霉素具有抗性。LTL1和LTL10抑菌物质为有机酸类和蛋白类。8株乳酸菌可作为潜在的益生菌用于防治母猪子宫内膜炎。     

一株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

以鸡肠道和泡菜为分离源,采用常规微生物学方法分离乳酸菌,筛选到一株产酸性能良好的菌株W7。结合对菌株的形态观察、生理生化试验以及16S rRNA基因序列分析,对菌株进行鉴定,并对W7进行特性试验研究。结果表明,W7为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,在培养22h时,活菌数最高;耐酸效果好,在pH值为2.0时,存活率仍然为100%;在胆盐浓度为0.30%时,仍然可以生长;抑菌效果较好;黏附率为79.9%。     

健康家兔肠道益生菌的分离鉴定

用选择性培养基对健康家兔不同年龄段及不同部位的肠道微生物进行培养,结果表明:断奶仔兔盲肠内有氧菌种类极显著高于回肠(P<0.01),盲肠内厌氧菌种类稍高于回肠,但差异不显著(P>0.05);青年兔盲肠内有氧菌和厌氧菌种类均显著高于回肠(P<0.05)。断奶仔兔盲肠和回肠内有氧菌稍高于青年兔,但差异不显著;而盲肠和回肠内厌氧菌极显著低于青年兔(P<0.01)。     

育肥绵羊胃肠道乳酸菌的分离鉴定及部分体外益生特性评价

本研究旨在探寻益生特性优良、可作为抗生素替代品的羊源乳酸菌,为后续饲用益生菌的开发与利用提供依据。以育肥羊不同肠段和瘤胃内容物为菌株分离的来源,采用碳酸钙-MRS固体培养基分离纯化乳酸菌,通过初筛、溶血试验复筛获取安全菌株,对安全菌株进行形态学、生化鉴定和16S rRNA测序鉴定,并评价其抑菌能力、抗生素敏感性和耐受性。结果显示：共获取12株同型乳酸菌——海氏肠球菌的安全菌株,分别来源于空肠（K1、K2、K3、K4）、回肠（H1、H2、H3、H4、H5、H6）、直肠（Z1）和瘤胃（L1）。在抑菌能力方面,12株海氏肠球菌对2种典型致病菌金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有一定的抑制性,且对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径极大于大肠杆菌,对这2种指示菌的抑菌圈直径分别为7.30～12.30 mm（平均为9.90 mm）和6.90～9.47 mm（平均为8.43 mm）,尤其是来自空肠的K2菌株对这2种指示菌的抑菌圈最大;从抗生素敏感性分析,K2和H5菌株具广泛的抗生素敏感性,对6种抗生素敏感,其余菌株（L1除外）对5种抗生素敏感;从耐受性上看,这12株海氏肠球菌对胃肠液均具有一定的耐受性,L1和K2...     

一株虹鳟嗜冷益生菌Aeromonas popoffii的分离鉴定及体外抗病毒特性研究

为分离鉴定冷水鱼类的益生菌,本研究从健康的冷水鱼虹鳟幼鱼的肠道、胆囊等部位分离得到75株嗜冷耐低温生长菌株,经过耐低温温度梯度筛选及体外抗菌试验初步筛选出一株虹鳟嗜冷益生菌株,经革兰氏染色及API 50 CH生化鉴定、16S r DNA测序比对,鉴定为Aeromonas popoffii,将其命名为HL60分离株。通过耐胆酸游离酸试验、耐酸试验、体外抑菌试验和体外对鲤鱼上皮细胞(EPC)增殖影响试验及体外抗病毒(传染性造血器官坏死病病毒)试验,结果表明A.popoffii HL60分离株具有良好的益生特性及体外抗病毒活性。本研究分离获得的A.popoffii HL60分离株为冷水鱼益生菌株活载体疫苗开发及应用奠定了基础。     

奶牛阴道嗜酸乳杆菌的分离鉴定

应用选择性培养基从奶牛阴道中筛选出1株产酸革兰氏阳性杆菌,通过形态学、培养特性、生化特性、16SrDNA基因序列测定与同源性分析,确定该菌为嗜酸乳杆菌;动物试验表明,该菌无致病性.本试验为进一步研究调节奶牛阴道微生态平衡、防治奶牛子宫内膜炎的微生态制剂奠定基础.     

鸡肠道内乳酸菌的分离鉴定及体外抑菌试验

为获得鸡肠道内抑菌效果好、适应性强的乳酸菌,从健康鸡小肠内容物中分离乳酸杆菌,并对其进行生化鉴定。结果成功从鸡小肠中分离出6株细菌。通过革兰氏染色和生化鉴定,发现这6株细菌分别是微小乳酸菌(L.minor)、约氏乳杆菌(L.johnsonii)、弯曲乳杆菌(L.curvatus)、肠乳杆菌(L.intestinalis)、嗜酸乳杆菌(L.acidlophilus)、植物乳杆菌(L.plantarum)。对分离到的6株乳酸菌进行体外抑菌试验,结果表明肠乳杆菌(L.intestinalis)对大肠杆菌有一定的抑菌作用。该研究为后期开发益生菌制剂奠定了一定的基础。     

奶牛乳腺上皮细胞的体外分离培养及超微结构鉴定

通过组织贴块法取部分奶牛乳腺组织进行培养,并通过在培养基中添加适当浓度的营养因子以及控制消化时间将成纤维细胞去除,纯化出原代奶牛乳腺上皮细胞。通过免疫荧光鉴定,形态学观察,扫描电镜和透射电镜检测原代乳腺上皮细胞特性。观察结果显示,本试验分离培养的牛乳腺上皮细胞角蛋白18免疫荧光染色鉴定结果呈阳性。形态学观察及超微结构观察显示,试验所分离的上皮细胞呈鹅卵石样单层聚集,胞内有丰富的线粒体和内质网,细胞状态良好,传至15代以上细胞依然增殖旺盛,因此可以作为研究奶牛乳腺机能的重要工具。     

青贮用乳酸菌的分离鉴定及生物学特性评价

本研究旨在从构树青贮、玉米青贮及饲喂构树青贮的羔羊粪便中分离鉴定可饲用乳酸菌,为开发构树青贮用乳酸菌提供试验材料。以构树青贮、玉米青贮以及饲喂构树青贮的羔羊粪便为菌株分离来源,使用含有1%碳酸钙的MRS琼脂培养基分离纯化乳酸菌,获得菌株经16S rRNA测序鉴定后对其中可饲用菌株进行生长、产酸性能的筛选,评估在pH 3.0、3.5、4.0条件下存活率和对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑制能力,并对筛选菌株进行菌株之间拮抗性测定。结果表明：获得可饲用乳酸菌共37株,包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)4种,不同的菌株在生长和产酸性能上表现出差异,在不同pH中存活率和抑菌性能也具有菌株特异性。综合比较不同菌株之间的生物学特性,植物乳杆菌GQ-3-2、GQ-3-29及GQ-5-4具有良好的生长、产酸及抑菌性能;粪肠球菌Y-3-15在发酵2 h进入对数生长期,能够为植物乳杆菌的大量繁...     

鸡源耐镉乳酸菌株的分离与鉴定

本试验旨在从鸡肠道中分离筛选出耐镉(Cd)的乳酸菌,为将其开发应用于防控家禽饲料重金属Cd污染提供理论基础。取鸡肠道内容物的样品进行乳酸菌分离,以耐受100 mg/L的Cd为标准筛选乳酸菌,采用分子生物学方法鉴定菌株。对筛选出的乳酸菌株进行生长性能、耐Cd性能及Cd吸附性能等测定。结果表明：本试验共筛选出5株耐Cd乳酸菌,分别为1株约氏乳杆菌Cd3-1和4株卷曲乳杆菌Cd1-1、Cd5-2、Cd4-5和Cd8-2。其中Cd3-1、Cd5-2和Cd8-2菌株最高可耐受1 000 mg/L的Cd,而Cd1-1和Cd4-5菌株最高可耐受400 mg/L的Cd。各菌株对50 mg/L Cd的吸附率随溶液pH的升高而增加,在pH为6.0和7.0时Cd的吸附率均显著高于pH为2.6时Cd的吸附率(P<0.05)。5株乳酸菌均可耐受0.3%的胆盐,且可抑制金黄色葡萄球菌的生长。综合上述结果,本试验从鸡肠道中分离筛选鉴定出5株耐Cd乳酸菌,包括1株约氏乳杆菌和4株卷曲乳杆菌,在pH接近中性的条件下,对Cd的吸附率可达30%。     

一株产细菌素乳酸菌的分离和鉴定

从市售3种酸乳中分离得到4株乳酸菌,通过发酵液的抑菌试验确定S1菌株为细菌素产生菌,综合S1菌株的形态学特征、生理生化特征,将其初步鉴定为乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）。在排除过氧化氢和有机酸对指示菌的抑制作用后,确定该菌株产生的抑菌物质为细菌素。该细菌素对大肠杆菌具有较好的抑制作用。     

生态养猪发酵益生菌的分离鉴定及体外抑菌试验研究

通过实验室和野外采集(主要在高山松树下蓬松的土壤)样本,经过分离鉴定,分别获得1株地衣芽孢杆菌、3株蜡样芽孢杆菌、1株短小芽孢杆菌、1株乳酸杆菌。采用牛津杯法测定这6株菌对病原菌的抑菌试验,并对分离的6株菌进行动物安全性试验。结果表明:这6株菌对大肠杆菌、葡萄球菌均有不同程度的抑制作用,且动物试验安全,为生态养猪提供了发酵菌种。     

一株优良乳酸菌的分离鉴定与特性研究

利用乳酸菌分离专用培养基-MRS培养基从发酵40 d的酸菜汁中分离得到一株乳酸菌,利用经典分类法对所分离的乳酸菌菌株进行了系统的细菌学鉴定和生物学特性研究。结果该菌株被鉴定为乳杆菌属、植物乳杆菌。对其进行生长曲线、pH及酸度的测定,结果显示分离乳酸菌的对数生长期较长;培养以后pH下降达到稳定;酸度较高的产酸时间为前20 h。抑菌试验表明：该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有明显抑制作用。由于该菌具有生长快、产酸量高并具有抑菌活性等特点,因而适合作为微生态制剂的优良菌种开发利用。