冷冻原肠中细菌基因组DNA提取方法的建立

为建立冷冻原肠中细菌基因组DNA的直接提取法,采用震荡洗脱、金属网过滤和梯度离心相结合的方法,对2份冷冻原肠样品进行前处理;对经前处理后的原肠样品,采用酚/氯仿法提取细菌基因组DNA,然后进行琼脂糖电泳和OD_(260)/OD_(280)比值测定;以细菌基因组DNA为模板,用PCR技术扩增细菌16S rDNA并构建克隆文库,并从2个文库中各随机挑取3个菌落进行16S rDNA的PCR鉴定和DNA测序。结果显示:样品提取的DNA浓度、纯度较高,OD_(260)/OD_(280)比值介于1.8～2.0;挑取的6个菌落中,1个为阴性,剩余5个为阳性,为肠球菌属(Enterococcus)和魏斯氏菌属(Weissella)的5种细菌。结果表明,本研究提取的原肠细菌基因组DNA质量较好,可用于非培养法研究冷冻原肠中细菌的多样性。本研究解决了因缺乏原肠细菌基因组DNA提取方法,无法进一步应用现代分子生物学方法研究冷冻原肠细菌的多样性、菌群组成结构和动态变化等难题。     

瘤胃细菌DNA提取方法的研究与优化

为优化出可获得完整瘤胃细菌总DNA的方法,以满足分子生物学研究需要,试验采用3种DNA提取方法对瘤胃细菌DNA进行提取并对提取效果进行了比较。结果表明:细菌基因组试剂盒法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在1.8以上,电泳无杂带,DNA的提取效果最佳,PCR扩增效果较好;珠磨-CTAB法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在1.8以上,电泳结果存在少量杂带;水煮法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在2.0以上,无电泳条带,DNA严重降解。推荐采用细菌基因组DNA试剂盒法和珠磨-CTAB法对瘤胃细菌进行DNA提取。     

不同前处理方法对生鲜乳中布鲁氏杆菌DNA检测结果的影响

为了研究不同前处理方法对生鲜乳中布鲁氏杆菌DNA检测结果的影响,试验采用PBS冲洗法、4℃过夜法、离心法三种方法对乳样进行前处理,用多功能酶标仪和琼脂糖凝胶电泳法对提取的DNA质量进行评估。结果表明:采用4℃过液法得到的OD_(260)/OD_(280)值最高且得到的条带最亮,采用PBS法得到的DNA浓度最高。因此,采用4℃过夜法提取乳样中布鲁氏杆菌基因组DNA的效果最好。     

鸡基因组DNA不同提取方法的比较

为选择适合鸡全血DNA提取的方法,满足鸡育种中基因检测对DNA的要求,试验研究了酚-氯仿、试剂盒和优化盐析法提取鸡全血DNA。优化盐析法提取鸡血液基因组DNA,经核酸蛋白定量仪检测,优化盐析法所得DNA的纯度OD_(260)/OD_(280)达1.855±0.036,所提DNA质量较好,利用DNA样本为模板进行PCR扩增,可以得到满意的扩增效果。与酚-氯仿、试剂盒的方法相比,优化盐析法节约了时间和成本,所需仪器简单,是一种较好的提取鸡全血DNA的方法,适合生产中大批量鸡血液基因组DNA提取。     

一种简便分离高质量家蚕基因组DNA的方法

本研究对传统的家蚕基因组提取方法进行了改进.改进方法无需研钵和液氮,将RNase与蛋白酶K同时加入剪碎的家蚕样品中消化处理,并利用旋转振荡培养箱旋转混匀和培育每步的样品.该方法减少了基因组DNA的损失,提高了工作效率,节约了成本.利用改进后的方法对不同家蚕品种的基因组DNA进行了提取和PCR扩增验证,结果表明提取的基因组DNA的质量、获得率、重复性都更好,能够满足家蚕分子生物学研究的需要.     

不同试剂盒提取DNA对猪肉中弓形虫PCR检测的影响

弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患寄生虫病。为了比较不同试剂盒提取猪肉中弓形虫DNA的效率和质量及对弓形虫PCR检测的影响,本试验采用6种商品化基因组DNA提取试剂盒,对添加了不同数量弓形虫速殖子的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板,进行PCR检测,观察不同试剂盒提取DNA的扩增效果。结果显示,EZNA Tissue DNA Kit、TIANamp Genomic DNA Kit和FastDNA Spin Kit for Soil三种方法对含有1×101个以上数量速殖子的猪膈肌样品提取的DNA,均能被检测为阳性;TIANamp Genomic DNA Kit提取的DNA作为模板进行PCR检测,其扩增特异性良好。利用TIANamp Genomic DNA Kit对126份上海屠宰场采集的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板进行PCR检测,结果阳性率为3.97%(5/126),表明TIANamp Genomic DNA Kit提取猪肉中携带的弓形虫DNA具有高效、稳定、价廉的优点,适合田间猪肉中携带弓形虫的调查研究应用。     

磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究

为确定一种稳定高效的鸡血液DNA提取方法,满足基因组检测对DNA的要求,研究应用磁珠法、酚-氯仿法和试剂盒法。分别对抗凝血和凝血状态的鸡血液样品进行基因组DNA提取,通过超分光光度计和1%琼脂糖凝胶电泳评价所获得的DNA质量,并对三种提取方法所需成本进行估算和比较。结果显示：三种方法均能从两种不同状态血液样本中提取出基因组DNA,酚-氯仿法最为经济,但耗时长且需要使用危险化学品,磁珠法与试剂盒法具有耗时短和环保的优点,且磁珠法较试剂盒法更经济。研究表明磁珠法使用的试剂量少、操作简单、耗时短、日提取样本数目远大于其他两种方法,是三种方法中最为快捷的方法,可以满足实际生产中大批量鸡血液基因组DNA提取的要求。     

胞内劳森氏菌PCR检测方法的建立与应用

为建立一种适用于临床检测胞内劳森氏茵(Lawsonia intracellularis,LI)的检测方法,本研究通过比较提取粪便样品基因组DNA的不同方法,结合PCR方法特异性扩增aspA基因检测临床样品中的LI.敏感性试验表明,阳性样本最低检出量为1.7×102 copie/μL;特异性试验表明,该方法对大肠杆菌、沙...     

鹅血液基因组DNA的简单快速提取方法研究

本研究针对家禽血液红细胞有细胞核的特点,研究适合鹅血液基因组DNA的廉价、简便、快速的DNA提取方法,并为其它禽(鸟)类相关操作提供参考。通过裂解细胞,利用简便快速的操作方法将蛋白质和核酸分离,去除杂质,沉淀核酸,获得大量基因组DNA,并通过基因扩增检测其质量和效果。该方法提取的基因组DNA电泳检测条带明量,无拖尾,含量及纯度均较高,能够用于分子生物学实验研究。与传统的酚-氯仿DNA抽提方法相比,本实验建立的血液基因组DNA提取方法具有成本低、操作步骤简便和快速的特点,特别是对大量样品的提取更为实用。     

不同部位取样对鸡基因组DNA提取的效果的影响

采用伤害性取样和非伤害性取样,采集鸡的肝脏、血液、羽髓、羽鞘、羽根、实心羽茎和羽毛上脐周围绒羽等不同部位样品,并采取对样品不同处理程序提取基因组DNA。结果表明,鸡的微量血液(50μl)和羽髓样品提取基因组DNA与肝脏(50 mg)样品提取的基因组DNA的量相当;羽鞘、羽根、实心羽茎和羽毛上脐周围绒羽可以提出一定量的基因组DNA,其提取量少于肝脏和羽髓组织,但可以满足各种涉及PCR反应的分子生物学试验,肝脏羽髓消化最适时间为2.5 h,其他样品需消化过夜。该研究结果为禽类分子生物学研究拓宽了样本来源。     

牛凝固血基因组DNA提取方法的比较及优化

为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。     

蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较

本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。     

适于蚁蚕的基因组DNA提取方法

昆虫基因组DNA提取是对昆虫在分子水平上进行研究的关键,提取的DNA的纯度、浓度及完整性是进行基因工程各项研究所必须的条件。本研究主要对应用4种方法,以柞蚕蚁蚕时期组织材料为样品提取DNA后进行比较分析。结果发现,利用BIOMIGA试剂盒,置于36℃条件,经50μL蛋白酶K 70℃消化6h后,5μLRNase A酶37℃消化10min,提取的DNA质量较好。且样品易于保存,保存时间长,提取时间短的优点,对提高柞蚕研究效率具有实用价值。     

采用改良CTAB法提取柞树(Quercus L.)基因组DNA

为了获得质量较高的柞树基因组DNA,采用经过改良的十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)提取法对几种常见柞树植物进行基因组DNA的提取,所得到的DNA样品经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,纯度较高,D260 nm/D280 nm为1.75~1.80,应用于SSR和RAPD标记分析时,可以获得较好的扩增片段。     

猪唾液中DNA的获取方法研究

为建立一套从猪口腔中采集唾液并高效地从唾液中提取DNA的方法,选取约15日龄的仔猪和180日龄成年公猪各5头,分别用不同唾液采样工具来采集唾液样品并进行DNA提取,通过NanoDrop 2000和琼脂糖凝胶电泳检测DNA的浓度和纯度;同时以猪肌肉组织样品提取的DNA为参照,对比不同方法和不同日龄猪唾液提取的DNA质量差异,PCR扩增GAPDH基因以验证唾液DNA的可用性。结果显示:针对不同日龄的猪可以利用棉签和海绵采样工具进行唾液采集;建立的裂解法可以成功地从猪唾液中提取DNA,比人唾液DNA提取的碘化钾法质量更优;DNA纯度、浓度以及GAPDH基因扩增产物与肌肉组织提取的DNA效果相比趋近一致。提示:本文建立的猪唾液DNA的获取方法成功。     

不同介质冷冻保存鸡血样基因组DNA提取效果比较

以-20℃保存10年的仙居鸡血样为试验材料,研究不同保存介质(乙醇和裂解液)对基因组DNA效果的影响,以确定更适合的保存介质长期保存血样。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示:裂解液保存10年的家禽血样中提取的DNA条带清晰,没有降解现象;75%乙醇保存10年的血样中提取的DNA条带有弥散拖尾现象,DNA降解严重。两种不同介质保存的血样提取的DNA的OD_(260)/OD_(280)值在1.8~1.9之间,纯度均较高,两者之间差异不显著。裂解液保存的血样提取的DNA浓度极显著高于75%乙醇保存的血样提取的DNA浓度(P0.01)。说明75%乙醇保存的血样可以常温保存一段时间,适合长途运输,但不太适合长期-20℃冷冻保存血样;裂解液保存的血样更适合较长时间-20℃冷冻保存。     

保存方法对牧草DNA提取效果的影响

为从野外采集的禾本科牧草样品中获得优质DNA,在有限的试验条件下找到最合适的样品保存方法。本研究在野外试验站采集了8种禾本科牧草,分别采用变色硅胶、-20℃、4℃、自然风干和45℃烘干等5种方法进行保存,保存一个月后进行DNA的提取。通过琼脂糖凝胶电泳、ISSR-PCR以及DNA的浓度和纯度对比,对几种保存方法下保存的牧草样品中所提取DNA的效果和质量进行鉴别。此外,为了解样品中多糖和多酚含量对DNA提取效果的影响,本研究还对采集样品多糖和多酚含量与DNA浓度和纯度进行了相关性分析。结果显示变色硅胶的保存效果最佳,烘干的保存效果最差,其他3种保存方法对不同植物的保存效果不能确定。多糖和多酚含量与DNA的提取效果、提取质量无明显关系,与DNA的浓度和纯度也无显著相关性,二者不是影响本研究DNA提取效果的主要因素,本研究中DNA提取效果的差异性是由于保存方法的不同造成的。在野外试验采集禾本科牧草样品时,如需要获得优质的DNA进行深入的试验,用变色硅胶保存样品,是一种便捷、效果优越的保存方法。     

4个肉牛品种微卫星多态性分析

本研究探讨了引进牛种(西门塔尔牛、利木赞牛)和山东地方黄牛(鲁西黄牛、利鲁牛)在20个微卫星位点上的多态性。试验从不同地区的种公牛站采集鲁西黄牛、利鲁牛、利木赞牛和西门塔尔牛的血液或精液样本,分别为56、27、31和30个,共计144个样本,血液样本采用Lab-Aid基因组DNA分离试剂盒提取基因组DNA,精液样本采用高盐法提取基因组DNA。利用20个微卫星标记,采用荧光标记毛细管电泳方法,对4个肉牛品种的DNA多态性进行分析,主要研究了每个群体的遗传变异指标(等位基因数、多态信息含量和杂合度)及群体间的遗传关系(F-统计量和基因流)。结果表明,肉牛基因组DNA条带整齐,无拖尾现象,质量较好,可用于本试验。20个微卫星座位中共检测到211个等位基因,平均等位基因数为10.6个。群体的平均观测杂合度在0.6147~0.7176之间,平均期望杂合度在0.6735~0.7862之间。在所有群体中各位点的多态信息含量在0.4853~0.8714之间,平均为0.7284,但在各个群体内的差异较大。近交系数及基因流分析结果表明,4个肉牛品种近交系数较低,群体间平均近交系数为0.085,每个微卫星位点的基因流均1。总体来看,所选用的20个微卫星座位多态信息含量高,可作为有效遗传标记用于肉牛品种间遗传多样性分析。     

不同提取方法对食蟹猴粪便中结肠小袋虫PCR检测的影响

比较不同抽提方法对结肠小袋虫DNA提取效率的影响,从而获得一种高效、稳定的提取粪便样品总DNA的方法,继而为后续试验提供基础材料.采用3种商品化基因组DNA提取试剂盒和经典酚-氯仿法,分别对食蟹猴粪便样品进行DNA提取,作为模板,进行PCR检测,观察不同抽提方法对DNA扩增效果的影响.4种提取方法均能扩增出目的条带,粪...     

少量动物粪便细菌总DNA提取方法的研究

本研究首先采用棉签直接插入肛门法采集仔猪粪便样品,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB法和试剂盒法等3种方法提取样品中细菌总DNA。结果表明:UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒更适宜于提取少量动物粪便细菌总DNA及后续的分子生物学试验。