毒害艾美耳球虫早熟株致病性与繁殖力的研究

为选育制备弱毒疫苗所需的毒害艾美耳球虫(Eimeria.necatrix)早熟株,以临床表现、平均增重、相对增重率、小肠病变记分、血便记分、死亡率、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊总产量和每个卵囊的繁殖能力为指标,研究了E.necatrix早熟株与亲本株的致病性和繁殖力。结果表明该早熟株与其亲本株相比,早熟株的致病性降低了,接种相同剂量时早熟株平均增重、相对增重率高于亲本株,病变记分、血便记分和死亡率均低于亲本株;早熟株产卵高峰提前,繁殖力下降至亲本株的55%左右,符合球虫早熟疫苗株的特性。     

鸡堆型艾美耳球虫早熟株免疫效力分析及安全性评价

选择不同首免日龄(1,2,4,6日龄)、不同免疫间隔期(间隔3,5,7,9,11 d)进行一次单剂量、单剂量重复和一次超剂量接种安全试验,计算相对增质量率、卵囊减少率、抗球虫指数(ACI)及病变记分、病变记分减少率(RLS),以确定堆型艾美耳球虫疫苗虫株最小首免日龄、免疫间隔期及安全性。结果表明,于4日龄以上首免组鸡攻毒后,十二指肠平均病变记分<1、RLS≥70%、死亡率为0、相对增质量率≥80%、卵囊减少率≥75%和ACI≥180,获得了良好的免疫效果,表明该疫苗虫株的最小首免日龄为4日龄;免疫间隔7,9,11 d的免疫攻毒鸡相对增质量率在90%以上、ACI到达185以上,表明二次免疫间隔7 d即可达到免疫效果;一次单剂量、单剂量重复和一次超剂量接种安全试验均发现,鸡肠道损伤较轻,病变记分均≤1,相对增质量率达到80%以上,表明鸡球虫病弱毒活疫苗(早熟株)符合疫苗安全性要求。     

杨凌地区柔嫩艾美耳球虫早熟株对雏鸡免疫效果的研究

用杨凌地区鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株分别免疫鸡,对免疫前后鸡体的平均增重、饲料转化率、盲肠病变记分和卵囊抑制率等指标进行了分析。结果发现,早熟株免疫组对球虫再攻击时的卵囊减少率分别为77.3%和67.6%,高于母株免疫组的41.7%和57.1%,且对同种同株球虫攻虫时的保护力优于同种不同株球虫。经2次免疫后,早熟株免疫组的鸡平均增重、饲料转化率均高于母株免疫组和对照组,而盲肠病变记分小于后者;早熟株免疫组经球虫攻击后卵囊的繁殖量明显减少,且卵囊抑制率均在91%以上。     

雏鸡免疫柔嫩艾美耳球虫早熟株和毒株的细胞免疫反应

AA肉鸡雏鸡分别经口免疫柔嫩艾美耳球虫毒株早熟株，用免疫组化ABC法染色检测小肠、盲肠扁桃体、脾脏中CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞动态变化；用淋巴细胞转化实验MTT法检测T淋巴细胞活性。结果表明：球虫免疫鸡后，CD4^ T淋巴细胞在一次免疫后迅速增殖，第6天达到第一峰，免疫柔嫩艾美耳球虫毒株的鸡盲肠与脾脏中CD4^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到38％和44％，免疫早熟株的鸡盲肠与脾脏中CD4^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到36％和43％，而二次免疫后和对照相比很少有显著差异。CD8^ T淋巴细胞在一次免疫后比CD4^ T增殖速度慢，第9天达到第一峰。免疫柔嫩艾美耳球虫毒株的鸡在此日盲肠与脾脏中CD8^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到37％和47％，免疫早熟株的鸡在此日盲肠与脾脏中CD8^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到36％和48％，二次免疫后迅速大量增殖，免疫柔嫩艾美耳球虫毒株的鸡在二免后第2天盲肠与脾脏中CD8^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到39％和50％．免疫柔嫩艾美耳球虫早熟株的鸡在二免后第2天盲肠与脾脏中CD8^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到37％和50％。且CD8^ T淋巴细胞总体水平比CD4^ T淋巴细胞多。盲肠扁桃体中T细胞的增殖速度比其他组织更快。免疫早熟株的鸡与免疫毒株的鸡肠道黏膜中的CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞变化基本一致。一次免疫鸡比未免疫对照T淋巴细胞活性显著升高；进行二免的鸡免疫后第一、二、三周T淋巴细胞活性均比未进行二免的鸡显著升高；毒株免疫鸡T淋巴细胞活性大多与早熟株免疫鸡无8显著差异。     

强效艾美耳鸡球虫苗的免疫效果

在实验条件下,研究了强效艾美耳牌鸡球虫苗对平养鸡群的免疫效果.实验Ⅰ比较了免疫鸡群和对照鸡群在接种后1,2,3,4,5,6周的肠道病变分。结果表明免疫鸡群较自然感染建立免疫的对照鸡群的免疫整齐度高,判断依据是免疫后2周盲肠细小、内容物亦少的眼观指标。实验Ⅱ比较了免疫鸡群、不免疫不用药鸡群、不免疫用药鸡群在攻虫后的三处肠道病变.结果表明免疫鸡群对大剂量卵囊攻击有很强的抵抗力,不免疫不用药组对相同剂量的卵囊攻击抵抗力表现不整齐,不免疫用药鸡群对攻虫没有抵抗力.实验Ⅲ比较了免疫鸡群、不免疫不用药鸡群、不免疫用药鸡群的生长情况,结果表明免疫鸡群生长均匀(标准差小),但在接种后第7～14d 有个生长抑制期,第15～21d 有个生长代偿期,第21d 之后生长情况优于不免疫不用药组而不免疫用药组相当.三个实验的排卵囊曲线显示,免疫鸡群有两个排卵囊高峰,第一个在免疫后第5d,第二个在第12～13d.     

鸡毒害艾美尔球虫早熟株的免疫原性研究

为制备早熟弱毒疫苗提供虫株和理论依据,对选育的毒害艾美尔球虫早熟株(P8)和亲本株(P0)的免疫原性进行了研究。试验分别用P0和P8,以每只鸡300个孢子化卵囊免疫7日龄雏鸡,免疫后14 d,分别以每只鸡1×104和10×104个P0孢子化的卵囊进行攻毒,以OPG、平均每只鸡的卵囊产量,卵囊减少率、相对增重率、病变记分减少率为指标。结果表明:(1)攻毒后每只1×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组的卵囊减少率分别为75.59%、84.66%;(2)攻毒后每只10×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组病变记分降低率分别为81.46%、76.66%。表明P8株的免疫原性与P0无明显变化,均有保护力,符合早熟株免疫原性保持不变的特点。     

鸡柔嫩艾美耳球虫免疫保护性研究

鸡的球虫病是危害现代化养鸡业的重大疫病。柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)是球虫病爆发中致病性最强的虫种之一，它由Tyzzer于1927年命名为Eimeria tenella的。它具有严格的寄生部位，主要在鸡的盲肠，通过裂殖体在盲肠上皮细胞中大量繁殖，破坏肠粘膜，引发肠管发炎和上皮细胞崩解，鸡表现为排血便，严重的导致死亡。年龄在10～40日龄左右的雏鸡最容易感染，受害严重，死亡率可达80％以     

应用RAPD技术对鸡柔嫩艾美耳球虫不同地理株的多态性研究

利用RAPD技术对鸡柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)GZ株、HB株、JL株及HB株与JL株杂交虫株FZ1进行了研究。结果表明：E．tenella不同地理株间及同一地理株亲代与子代间均存在DNA多态性。其中不同地理株间种内变异程度较大(SI=O．6225--O.6977)。而同一地理株子代与亲代间也发生遗传变异，但变异程度不大(SI=O.9813--0．991O)。同时对本室培育的HB株与儿株的杂交虫株FZl的基因组DNA进行RAPD分析。发现该杂交株与其亲本HB株、JL株的相似值为O.8215，O.7916，大于HB株与JL株间相似值(O．6977)。小于传代虫株间的相似值(O.9813--O.991O)，且其扩增务带显示出与亲本株间的相似，且又有不同，表明试杂交虫株是1株既具有两亲本株的遗传性状，又发生了变异的虫株。     

毒害艾美耳球虫致病性与抗药性研究

用毒害艾美耳球虫杨凌株(YLn)感染14日龄雏鸡,检测毒害艾美耳球虫的致病性及其对4种常用抗球虫药的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性4个等级。结果表明,该虫株对雏鸡有很强的致病性,每羽鸡经口接种1×105个孢子化卵囊时,致死率达63.3%;该虫株对地克株利有完全抗药性,对马杜拉霉素有轻度抗药性,对氯羟吡啶和氯苯胍无抗药性。     

鸡巨型艾美耳球虫早熟株选育及其生物学特性研究

为选育鸡巨型艾美耳球虫(E.maxima)早熟株,并对其生物学特性进行研究,采用早熟选育法对E.maxima亲本株进行连续鸡体传代以获得早熟株,再分别将鸡E.maxima亲本株和早熟株孢子化卵囊以不同剂量口服接种14日龄无特定病原(SPF)雏鸡,测定E.maxima亲本株和早熟株的潜隐期、卵囊形态大小,并分析比较其致病性强弱和繁殖力高低。结果表明,成功选育出潜隐期为113 h的鸡E.maxima早熟株,其卵囊长和宽均显著小于亲本株卵囊。在整个试验过程中,各组鸡接种E.maxima亲本株和早熟株孢子化卵囊后均无死亡现象;当鸡E.maxima亲本株和早熟株孢子化卵囊接种剂量为0.5×10~4～20.0×10~4个/羽时,等剂量下E.maxima早熟株组鸡的相对体质量增加率显著大于亲本株组;接种量在10.0×10~4～20.0×10~4个/羽时,等剂量下E.maxima早熟株组鸡的肠道病变记分显著低于亲本株组;随接种剂量的增加,E.maxima亲本株和早熟株组鸡的相对体质量增加率逐渐降低,临床症状逐渐加重。此外,相同接种剂量下,E.maxima早熟株组卵囊产量均显著低于亲本株组,前者卵囊产量是后者的60%～75%;但随接种剂量的增加,E.maxima亲本株和早熟株组单卵囊繁殖力均呈下降趋势。综上,选育的鸡E.maxima早熟株与亲本株相比,致病力减弱、繁殖能力降低,能够为球虫多价活疫苗提供E.maxima虫种,以进一步加强鸡球虫病的防治。     

广西鸡球虫虫株早熟系的初步选育及繁殖力的研究

应用单卵囊分离技术从广西患球虫病的鸡中成功地分离出了几个纯种球虫虫株，并对其中一株进行了鉴定和早熟系的初步选育。通过对该株球虫卵囊的形状、大小、潜在期、寄生部位、卵囊孢子化时间等特征的测定和观察研究，鉴定为早熟艾美耳球虫(Bimeria praecax)；对早熟艾美耳球虫进行了连续6代的初步选育，已获得了具有早熟倾向的早熟系，该早熟系的潜在期已比原代的缩短7h，另外对其繁殖力测定的结果表明，该早熟系的繁殖力已明显下降，其繁殖力仅为原代的47．1％。研究结果为对广西鸡球虫的进一步选育和鸡球虫病的免疫预防研究奠定了基础。     

毒害艾美耳球虫早熟株致病性与繁殖力的研究

为选育制备弱毒疫苗所需的毒害艾美耳球虫(E.necatrix)早熟株,以临床表现、平均增重、相对增重率、小肠病变记分、血便记分、死亡率、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊总产量和每个卵囊的繁殖能力为指标,研究了E.necatrix早熟株与亲本株的致病性和繁殖力。结果表明该早熟株与其亲本株相比,早熟株的致病性降低了,接种相同剂量时早熟株平均增重、相对增重率高于亲本株,病变记分、血便记分和死亡率均低于亲本株;早熟株产卵高峰提前,繁殖力下降至亲本株的55%左右,符合球虫早熟疫苗株的特性。     

E.necatrix二次感染雏鸡消化道局部体液Igs含量变化

采用间接酶联免疫吸附试验法检测了毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)二次感染雏鸡肠液和胆汁IgA、IgM、IgG含量变化。结果表明,在E.necatrix二次大剂量攻击性感染雏鸡后的初期,三种免疫球蛋白含量呈现一过性下降,随即回升,14d较对照和初次感染雏鸡明显增加,表明球虫初次感染所激发的高水平体液免疫对其二次感染有良好的免疫保护作用。     

α—甘露低聚糖对雏鸡免疫器官发育的影响

试验选用7日龄720只新罗曼褐雏鸡,以4个水平α—MOS分口服与皮下注射两种途径进行试验,并测定雏鸡免疫器官——脾、法氏囊的发育变化情况。结果表明,α—MOS具有明显的增加免疫器官重量的作用,同时具有显著的增重效果,高剂量的α—MOS对鸡的免疫器官和生长速度的作用没有明显的累加效应。     

癸氧喹酯对AA肉鸡感染Eimeria tenella疗效的研究

通过测定抗球虫指数来衡量癸氧喹酯对鸡感染柔嫩艾美耳球虫的疗效.结果表明癸氧喹酯低中高剂量组(13.6、27.2 mg/kg和54.4 mg/kg);抗球虫水平都达到了优秀,抗球虫指数分别为181.29、182.65和181.61.癸氧喹酯与马杜霉素联合用药组(13.6 mg/kg+2.5 mg/kg)和癸氧喹酯与妥曲珠利联合用药组(13.6mg/kg+12.5 mg/kg)的药效突出,抗球虫指数达到了194.37和197.89.试验说明癸氧喹酯能够有效的抑制球虫病的发生,联合用药效果尤佳.     

一氧化氮（NO）在鸡感染柔嫩艾美球虫中的作用

在感染柔嫩艾美球虫 (Eimeriatenella)的雏鸡日粮中添加NO前体物L Arg或在饮水中添加iNOS抑制剂Dex ,探讨NO在鸡感染柔嫩艾美球虫过程中的作用。结果显示 ,未感染组鸡的血浆中NO水平无明显变化 ,感染组鸡则明显升高 ,第 6天达到峰值 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;加喂L Arg组鸡与不添加的对照组NO水平基本一致 (P>0 0 5 ) ;添加Dex组鸡则明显高于不添加的对照组 (P <0 0 5 )。NO水平与卵囊感染数无相关性。加喂L Arg组鸡死亡率最低 ,增重明显 ,每克粪便卵囊数 (OPG)低 ,血粪堆数少 ,病变轻 ;而添加Dex的感染鸡 ,出现负增重和严重死亡。提示 :日粮中添加L Arg对感染球虫的鸡有明显的保护作用 ,而Dex的添加不但不能降低血浆中的NO水平 ,还使鸡对球虫的易感性增强。表明NO在球虫感染过程中可杀伤或抑制球虫 ,但NO生成过多会使宿主产生免疫病理效应而造成损伤     

茯苓多糖对鸡免疫功能的影响

为探讨茯苓多糖对海兰褐公雏鸡体内外免疫活性的影响,将120羽1日龄海兰褐公雏鸡随机分成6组,分别为空白对照组、模型组、免疫对照组(1 kg饲料添加0.2 g盐酸左旋咪唑)、茯苓多糖高剂量组(1 kg饲料添加2.0 g茯苓多糖)、茯苓多糖中剂量组(1 kg饲料添加1.0 g茯苓多糖)、茯苓多糖低剂量组(1 kg饲料添加0.5 g茯苓多糖),用MTT法检测不同浓度茯苓多糖对鸡外周血淋巴细胞、脾脏细胞增殖的影响,ELISA法测定血清中细胞因子IL-2和IFN-γ含量,屠杀、称重、计算各组鸡脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数。结果表明,茯苓多糖对鸡外周血淋巴细胞、脾脏细胞增殖具有刺激作用,浓度越高,刺激作用越强,呈现剂量依赖性;茯苓多糖高、中、低剂量组鸡血清中IL-2和IFN-γ均高于模型组,茯苓多糖各组免疫器官指数高于模型组。这表明茯苓多糖能提高海兰褐公雏鸡的免疫功能。