大蒜提取物对B16F10细胞内黑色素生成的抑制作用

采用MTT法测定大蒜提取物、二胜肽和六胜肽3种物质对B16F10细胞活力的影响,且在非毒剂量下,分别评价此3种物质对B16F10细胞黑色素生成和细胞形态的影响;在单因素试验基础上,采用正交试验设计大蒜提取物、二胜肽和六胜肽组合物中各组分的用量,检测组合物对B16F10细胞黑色素生成抑制率的影响,并利用Western blot检测最佳组合物对黑色素合成相关蛋白TYR、TRP–1和TRP–2表达的影响。结果表明：0.00~2.50 μg/mL的大蒜提取物、0.00~4.00 μg/mL的二胜肽或六胜肽对B16F10细胞的细胞活力和细胞形态均没有显著影响;大蒜提取物在0.00~2.50 μg/mL、二胜肽和六胜肽在0.00~4.00 μg/mL内呈剂量依赖性的抑制黑色素的生成;当大蒜提取物、二胜肽、六胜肽质量浓度分别为2.50、1.00、0.50 μg/mL时的组合物抑制黑色素的生成作用效果最佳;该最佳组合物对黑色素合成相关蛋白TYR、TRP–1和TRP–2的表达具有明显的抑制作用,表明组合物抑制黑色素的生成与TYR、TRP–1和TRP–2蛋白水平的降低有关。     

天麻素对B16黑素瘤细胞黑色素形成的影响

[目的]探讨天麻素对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞黑素合成的影响及其作用机制。[方法]选择不同浓度的天麻素作用于体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞,测定细胞黑素生成量,通过测定天麻素对蘑菇酪氨酸酶活性的影响,初步探讨天麻素影响黑色素形成的机制。[结果]当浓度大于15 mmol/L时,天麻素能抑制B16黑素瘤细胞黑色素形成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性。天麻素对蘑菇酪氨酸酶的半抑制浓度(IC50)为(69.37±9.22)mmol/L,对酪氨酸酶的抑制作用表现为混合型可逆抑制,抑制常数Ki=(123.8±20.2)mmol/L,提示天麻素可能通过抑制酪氨酸酶活性抑制B16细胞黑色素的形成。[结论]天麻素可作为一种潜在的色素障碍性疾病治疗药物。     

甲硫基腺苷对小鼠黑色素瘤B16F10细胞系的抑制作用

应用细胞培养技术研究了甲硫基腺苷对小鼠黑色素瘤B16F10细胞系体外增殖和体内增长的抑制作用。结果表明:甲硫基腺苷抑制了小鼠黑色素瘤B16F10细胞系的体外增殖(IC50为10μmol/L,P<0.01)和体内增长(抑瘤率为30.8%,P<0.05)。     

茶叶提取物EGCG和GCG及ECG对B16细胞内黑色素生成的抑制作用

为研究茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)对体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响,分别用不同浓度的EGCG、GCG、ECG和熊果苷(Arbutin,AR)处理细胞,观察效应物对细胞形态的影响,用溴化二苯四偶氮法(MTT法)测定茶叶提取物对细胞增殖率的影响,以左旋多巴(L–DOPA)为底物,测定细胞内酪氨酸酶的活性,采用氢氧化钠裂解法测定细胞内黑色素的含量。结果显示,EGCG、ECG、GCG能显著抑制B16细胞的黑色素生成和酪氨酸酶的活性,且呈剂量依赖关系;当浓度为60μg/mL时,细胞增殖率均低于50%,酪氨酸酶活性与对照组相比分别降低了26.67%、27.27%和32.71%,黑色素生成抑制率均在30%以上。结果表明,茶叶提取物能通过多种途径抑制黑色素生成,且GCG的作用效果最优,ECG的作用效果次之,三者的作用效果均优于熊果苷的作用效果。     

Foxp3表达对黑色素瘤B16细胞增殖的影响

目的通过检测Foxp3在黑色素瘤B16细胞中的表达及其对肿瘤细胞增殖的影响,探讨Foxp3在黑色素瘤细胞中表达的可能作用.方法采用RT-PCR和免疫组化法检测B16细胞中Foxp3在mRNA和蛋白水平的表达;采用VigoFect转染试剂将pcDNA3.1-Foxp3真核表达载体瞬时转染B16细胞,RT-PCR和流式细胞术方法分别检测转染前后Foxp3基因和蛋白的表达;MTT方法检测Foxp3高表达后对肿瘤细胞增殖的影响.结果 B16细胞在mRNA和蛋白水平均表达Foxp3;瞬时转染后Foxp3转染组中Foxp3的表达显著高于空载体组和B16组（P〈0.01）;Foxp3转染组细胞A490 nm值在48 h和72 h与空载体组和B16组相比显著降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）.结论黑色素瘤B16细胞Foxp3的表达可抑制肿瘤细胞的增殖.     

正交设计优选喜树碱及10-羟基喜树碱的提取工艺

[目的]优选喜树果中喜树碱及10-羟基喜树碱的超声提取工艺。[方法]采用高效液相色谱测定喜树果中喜树碱及10-羟基喜树碱的含量,并在单因素试验的基础上采用L9(34)正交试验确定最佳提取条件。[结果]喜树碱最佳提取条件为:甲醇浓度70%,料液比1∶30(g/ml),提取温度60℃,提取时间25 min;10-羟基喜树碱的最佳提取条件为甲醇浓度60%,料液比1∶30(g/ml),提取温度60℃,提取时间20 min。验证试验表明,喜树碱及10-羟基喜树碱的平均提取率分别为0.719‰和0.238‰,RSD分别为1.99%和1.79%。[结论]该工艺稳定可行,优选出了喜树果中喜树碱及10-羟基喜树碱的超声提取工艺。     

光照对喜树愈合组织生理及喜树碱合成的影响

喜树碱是一种从木本植物喜树Camptotheca acuminata中分离得到的抗癌活性物质,通过细胞培养合成喜树碱研究是喜树碱生产的一条重要途径。光照对喜树愈合组织生理生化特性、花色苷形成及喜树碱合成影响的研究结果显示,在光照和暗培养条件下,喜树愈合组织可溶性蛋白质质量分数、可溶性糖质量分数和过氧化物酶(POD)活力均呈逐渐上升趋势,培养第3周达到峰值;光照对喜树愈合组织中花色苷的形成具有极重要的影响。与暗培养相比,光照培养可以促进喜树愈合组织的生理代谢,且对喜树碱的合成和积累有一定的促进作用。图5表1参14     

半边旗5F对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究天然药物半边旗 5 F对瘢痕成纤维细胞的作用 ,以期寻找新的治疗病理性瘢痕的有效药物。方法 :以四甲基偶氮唑盐 (MTT)方法和吸光度检测法及逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法测定半边旗 5 F对成纤维细胞增殖和培养基中的胶原含量以及 、 型前胶原 m RNA表达的影响。结果 :半边旗 5 F对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,还能显著降低培养基中可溶性胶原的含量 (P<0 .0 1 )。上述抑制作用呈现药物浓度和作用时间依赖性。采用 RT- PCR法对 、 型前胶原的 m RNA检测显示随着药物质量浓度增高前两者的表达量降低。结论 :半边旗 5 F对瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成具有显著的抑制作用 ,为寻找有效治疗病理性瘢痕的药物提供了新的思路     

Lupalbigenin抑制Ba/F3 EGFR WT野生型肺癌细胞增殖作用机制

在细胞水平上探讨Lupalbigenin(LG)抑制Ba/F3 EGFR WT肺癌细胞增殖的机制。使用电转染构建细胞系,利用MTS、Western blot、流式细胞术等方法构建稳定表达的EGFR（野生型）细胞Ba/F3 EGFR WT为材料,检测不同浓度化合物对细胞相关检测指标的影响。结果表明：以Ba/F3为模式细胞构建稳定表达EGFR的Ba/F3 EGFR WT肺癌细胞;在Ba/F3 EGFR WT细胞中,LG能够抑制Ba/F3 EGFR WT细胞增殖;下调EGFR信号通路中P-EGFR、P-Erk、P-Gsk-3β和P-S6蛋白水平;增加细胞总凋亡率;上调细胞中Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-6、Cleaved-Caspase-7、Bax、Cytochrome-C蛋白水平,下调Bcl-2蛋白水平;上调细胞中P27蛋白水平,下调CDK6、CyclinA2、CyclinD1蛋白水平。LG是一种天然小分子化合物,能够有效抑制野生型非小细胞肺癌细胞Ba/F3 EGFR WT增殖。有望为野生型EGFR肺癌提供药物开发的新思路,并为天然化合物在治疗人类疾病...     

羟基喜树碱对人白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

[目的]研究羟基喜树碱对人白血病K562细胞增殖与凋亡的影响。[方法]通过光学显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法,探讨不同浓度羟基喜树碱作用不同时间后,K562细胞凋亡的情况。[结果]羟基喜树碱能够诱导K562细胞凋亡,作用48h的最佳浓度为8.0μg/ml。羟基喜树碱可影响K562细胞增殖周期中的S期,即DNA合成期,细胞在此期停滞,诱导其发生凋亡。[结论]为将羟基喜树碱应用于临床治疗白血病提供前期试验依据。     

金边鲤皮肤黑色素合成及转运相关基因表达分析

[目的]研究影响金边鲤皮肤色素沉着的关键基因及信号通路,揭示其皮肤颜色差异形成的原因,为金边鲤良种培育提供候选基因信息.[方法]基于突变型金边鲤黄色皮肤(Y组)和黑色皮肤(B组)及野生型金边鲤黑色皮肤(W组)的转录组测序数据,筛选分析获得部分共有差异表达基因,利用实时荧光定量PCR检测差异表达基因和黑色素合成相关基因的表达情况,并分析各基因间的相关性.[结果]依据转录组数据筛选获得ACT3、MYH2、TPM1、TPM2和TPM3共5个来源于心肌肾上腺素信号通路及与细胞动力相关的基因;除ACT3基因外,其余4个基因(MYH2、TPM1、TPM2和TPM3)在Y组皮肤中的相对表达量均显著低于B组和W组(P<0.05,下同),与转录组分析的差异基因表达趋势一致.MC-1R、TYR、TYRP1和TYRP2等4个黑色素合成相关基因在金边鲤皮肤中的表达情况为:B组皮肤中MC-1R基因的相对表达量显著高于Y组和W组;TYR、TYRP1和TYRP2基因在3组皮肤中的相对表达量排序均为W组>B组>Y组,其中W组的相对表达量显著高于B组和Y组.相关性分析结果显示,MC-1R和TYR基因与ACT3、MYH2、TPM1、TPM2和TPM3基因呈显著或极显著(P<0.01)正相关,而TYRP1和TYRP2基因与这5个差异表达基因均无显著相关性(P>0.05).[结论]ACT3、MYH2、TPM1、TPM2和TPM3基因及其所在的心肌肾上腺素信号通路可能影响黑色素合成与运动,且与黑色素合成相关基因存在相关性,可作为金边鲤体色变异研究中的标记基因.     

海带多糖抑制平滑肌细胞增殖及抗氧化活性研究

【目的】研究海带多糖对H_2O_2诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)增殖及胞内脂质过氧化物生成量的影响,为阐明海带多糖对VSMC的作用机制奠定基础。【方法】以H_2O_2为诱导剂建立体外VSMC增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐法和细胞形态观察评价海带多糖对H_2O_2诱导VSMC生长和增殖的影响,同时以丙二醛为指标考察海带多糖对H_2O_2诱导VSMC胞内脂质过氧化物生成量的影响。【结果】以50μmol·L~(-1) H_2O_2为诱导剂建立VSMC体外增殖模型。四甲基偶氮唑盐法测定结果表明海带多糖对H_2O_2诱导VSMC增殖具有显著抑制活性,最大增殖抑制率达到73.56%。细胞形态学观察结果表明海带多糖作用下H_2O_2诱导的VSMC生长状态发生改变且细胞数量显著减少。丙二醛检测结果表明海带多糖作用下VSMC胞内脂质过氧化物量显著减少。【结论】海带多糖能够抑制H_2O_2诱导的VSMC增殖,且显著降低VSMC胞内脂质过氧化物生成量。     

不同水解程度丝素肽对黑色素生成抑制能力的研究

探讨了脱胶丝素经盐溶解后进行碱水解时 ,不同条件对丝素水解程度及不同水解程度丝素肽对蚕血黑色素生成的抑制能力的影响 .结果发现 ,温度对丝素的水解程度影响最大 ,时间其次 ,浓度的影响最小 ;丝素蛋白液未水解时 ,其对黑色素抑制率很低 ,只有 2 8.34% ,而丝素水解后 ,抑制率迅速提高到 4 8.95 % ,并且随着水解程度的加深不断提高 ,当氨基氮浓度达 0 .4 76 5g·L-1时 ,其对黑色素生成抑制率达最高值 6 7.14 % ;之后 ,随着水解程度的增加 ,其黑色素生成抑制率反而下降 .     

退火对Ni74Si10B16非晶合金电阻温度特性的影响

采用DC四端电阻测试法，测试了不同退火条件下Ni74Sil0B16非晶合金223～423K温区的电阻温度特性曲线，发现：淬态与退火态非晶合金试样的电阻均随温度近线性变化，并且，随着退火时间的延长或退火温度的升高，非晶合金电阻温度系数α上升，而室温电阻率ρ0下降，基于Nagel推广的液态金属Ziman理论，本文对此结果进行了分析和讨论。     

三环唑抑制稻瘟病菌MIC的测定及菌株产黑色素能力比较

测定了三环唑抑制黑龙江省116个稻瘟病菌菌株黑色素化的MIC值、黑色素合成量及三环唑抑制菌丝黑色素生物合成的有效中浓度(EC50-H),测定结果表明,黑龙江省稻瘟病菌菌株产黑色素的能力差异较大,产黑色素能力最强的菌株与产黑色素能力最弱的菌株的黑色素产值相差7.26倍。从三环唑抑制稻瘟病菌黑色素合成来看,绝大多数供试菌株对三环唑表现为较敏感。     

杂交棉苏杂16增产机理及栽培技术

苏杂１６两年在安徽省制种、试验示范证明；该杂交棉制种技术易掌握，杂交纯度为９９．６９％和９９．９２％，Ｆ１代增产１８．８～２９．８％，Ｆ２代增产１５．９％～１６．６％。该组合１９９２年参加全国杂交棉联合试验，在长江流域为最好组合，比中棉１２增产１６％；１９９３年列入安徽省棉花品种试验和国家黄河流域棉花品种区域试验，是国内第一个进入国家级棉花品种区域试验的杂交种。江苏、安徽、湖南、山东等９省１９９３年试种示范３２万亩，适应性广泛，有继续扩大示范的趋势和广阔的开发利用前景。     

L-色氨酸对喜树愈伤组织中喜树碱合成的影响

喜树碱是一种从天然植物喜树中分离的抗癌活性物质,通过细胞培养合成喜树碱是喜树碱生产的一条重要途径。本试验利用喜树的顶芽、叶片、茎段为外植体,在B5培养基上(附加1.0 mg/l的NAA,0.5 mg/l的2,4-D和0.5 mg/l的KT)诱导喜树愈伤组织。同时考察L-色氨酸对喜树愈伤细胞培养中喜树碱积累的影响,结果表明,在B5培养基中添加0.001-0.002 mg/ml的L-色氨酸,对喜树愈伤细胞的生长没有明显影响,但是对喜树愈伤细胞合成喜树碱的促进作用明显,喜树碱含量比未添加L-色氨酸培养的愈伤增加了3倍。     

高温对植物叶片光合作用的抑制机理

综述了高温对植物叶片光合作用的抑制机理,包括对PSⅡ捕光天线系统的影响、对PSⅡ供体侧放氧复合体的影响、对PSⅡ反应中心及PSⅡ受体侧电子传递的影响、对类囊体薄膜的影响、对碳同化过程的影响、对植物光合速率及其他气体换参数的影响、对植物叶片光合色素含量的影响等。     

苋菜乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的抑制及机理研究

通过测定苋菜乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的抑菌活性、菌液的OD600nm值、电导率、蛋白质含量、保护酶和呼吸代谢途径酶活性,探索苋菜乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的抑菌机理。结果表明:苋菜乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的室内平板抑菌圈直径在15 mm以上,最低抑菌质量浓度MIC为3.68 mg/m L;苋菜乙酸乙酯提取物不仅延迟了病原菌进入对数生长期的时间,而且使其电导率增加了15%;苋菜乙酸乙酯提取物对过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)的酶活力的抑制率分别为78.43%、68.63%、63.14%、68.00%。扫描电镜观察发现,苋菜乙酸乙酯提取物使柑橘溃疡病菌的菌体细胞膜遭受损伤,菌体发生裂解;透射电镜观察发现,苋菜乙酸乙酯提取物使柑橘溃疡病菌的细胞壁和细胞膜结构受损,胞内空白面积增大,细胞质外泄,菌体裂解。     

沼液对植物病害的防治效果及机理研究I:对植物病原真菌的抑制效果及抑菌机理初探

采用菌丝生长抑制和分生孢子萌发抑制的试验方法,以草莓枯萎病菌为靶标病原菌,研究了江苏省内运行稳定的21个大型沼气工程的沼液及其无菌滤液对草莓枯萎病菌的生长抑制特性.结果表明,所有沼气工程的沼液对草莓枯萎病菌的菌丝生长都有不同程度的抑制作用,不同运行年限的沼气池沼液以及不同发酵原料的沼液对草莓枯萎病菌的抑制效果均无显著差异,但不同贮液阶段的沼液对其抑菌效果影响显著.沼液的无菌滤液对草莓枯萎病菌菌丝的生长没有抑制作用;沼液及其无菌滤液对草莓枯萎病菌分生孢子的萌发均有不同程度的抑制作用,猪粪沼液及其无菌滤液对草莓枯萎病菌分生孢子萌发的抑制作用好于牛粪沼液.沼液对生产上常见的5种植物病原真菌的抑制效果有显著差别.沼液中的拈抗微生物是沼液抑菌防病的主要因子.