奶粉中阪崎肠杆菌检测方法的比较研究

奶粉中的阪崎肠杆菌对人类的危害性很大,采用荧光PCR检测法、传统检验法和FDA法3种不同的检测方法对贝因美A婴儿奶粉进行了检测,将检测结果进行比较分析得出,荧光PCR检测法所用时间最短,灵敏度较高。     

两株芽孢杆菌的鉴定及淀粉酶基因的克隆

对分离得到的两个菌株(B.H和B.M)进行鉴定,并对它们在芽孢杆菌培养基和淀粉富集培养基上的形态进行观察,通过对其16S rDNA序列的分析,构建系统进化树,确定B.H为枯草芽孢杆菌,B.M为解淀粉芽孢杆菌.根据已报道的枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌淀粉酶基因保守区域设计引物,分别以两个菌株的基因组DNA为模板,采用PC...     

拮抗放线菌111A202的种类鉴定及其16S rDNA序列分析

对分离自新疆棉花地土壤的一株拮抗放线菌菌株111A202进行了形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞壁组分分析及16S rDNA序列分析。结果表明该菌基内菌丝无横隔、不断裂, 气生菌丝分枝、孢子丝波曲,孢子椭圆形,表面光滑。细胞壁化学组分Ⅰ型。以16S rDNA序列为基础构建了包括7株相关种属菌在内的系统发育树, 111A202与变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)、微白黄链霉菌(S. albidoflavus)的16S rDNA序列的相似性达到99.5%和99.6%。根据以上多相分类结果,放线菌111A202的形态培养特征及其细胞组分与链霉菌一致,且与微白黄链霉菌近似性很高,因此,可以将放线菌111A202定名为微白黄链霉菌111A202(S. albidoflavus 111A202)。     

东北虎巴氏杆菌毒力基因toxA的克隆及同源性分析

通过对吉林市江南公园送检东北虎病例的病原分离鉴定,分离出多杀性巴氏杆菌,为进一步加强对该病的流行病学调查,并为准确诊断和治疗该病提供依据,实验对该株巴氏杆菌毒力基因toxA进行了研究。根据巴氏杆菌毒力基因toxA序列设计合成1对引物,以临床分离的虎源巴氏杆菌为模板,通过PCR技术,扩增出toxA基因片段。将长约526bp的toxA目的基因克隆到pGEM-T载体上,通过核苷酸序列测定,结果表明toxA基因序列与发表序列（X51512）的同源性为100%。流行病学调查显示,东北虎巴氏杆菌病的病原可能来自其食物（牛、羊肉等）。因此,在饲养过程中应加强检疫,切断巴氏杆菌病食源性传播途径。     

6株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

对福建省一些猪场临诊疑似副猪嗜血杆菌感染的病例的病例进行细菌分离鉴定,PCR扩增分离菌株的16S rRNA并进行测序分析,对分离菌进行细菌形态和PCR鉴定及序列分析。结果显示,获得6株副猪嗜血杆菌分离株,该6株分离株之间的同源性在99%以上,而与国内外参考菌株序列之间的同源性在84.5%-99.2%。发育进化树分析结果表明,分离菌株与血清4型和5型的关系较近,与其他血清型关系较远。     

一株抗铜根瘤菌的分离鉴定及其16S rDNA序列分析

为了发挥微生物和植物在重金属矿尾区铜污染土壤的共同修复作用,本研究从陕西省凤县矿尾区天蓝苜蓿根瘤中筛选分离到一株抗重金属铜的菌株,定名为CCNWSX0020.该菌株在YMA琼脂平板上抗铜浓度为3.0mmol/L,TY液体培养基中抗铜浓度为1.4 mmo1/L,因此,它是研究根瘤菌抗铜机制的良好菌株.该菌株经生理生化分析...     

鼓槌石斛内生细菌分离、 鉴定及功能分析

为微生物农药和肥料生产提供菌种资源,用组织分离法从鼓槌石斛健康组织分离内生细菌,用对峙法和抑菌圈法筛选拮抗菌株;以平板法筛选解磷、解钾和固氮菌株;以田间试验检验固氮菌株的增产效果;用PCR扩增功能菌株的16S rDNA,结合菌株的菌体、菌落形态特征和部分生理生化特征,确定功能菌株分类地位。结果表明,从鼓槌石斛组织共分离到33株内生细菌,数量和种类为根〉茎〉叶;其中GB7属解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,GB16属链霉菌（Streptomyces sp.）,GB8、GB9、GB21属芽孢杆菌（Bacillus spp.）,均有病害生防功能;GB2属不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）,GB20属肠杆菌（Enterobacter sp.）,具解磷功能;菌株GB1属产酸克雷伯氏菌（Klebsiellaoxytoca）,具固氮功能。     

副猪嗜血杆菌不同分离株CDT基因序列测定及其遗传变异分析

CDT毒素是多种革兰氏阴性致病菌的毒力因子.为了阐明CDT毒素在副猪嗜血杆菌不同菌株中的分布及其遗传变异情况,本试验对从浙江省不同地区猪场临床发病猪中分离到的41个副猪嗜血杆菌分离株进行了CDT基因PCR扩增,并对其中21个分离株CDT 3个亚基进行了基因测序及氨基酸序列分析.结果表明:所有41个临床分离株中都可以检测...     

罗非鱼无乳链球菌鉴定及基于cfb和16S rRNA基因同源性分析

为进一步阐明不同宿主不同地区无乳链球菌之间的关系,本研究从细菌形态学、生理生化、16S rRNA和cfb基因等方面,鉴定了2009—2011年广东、海南等地区的25株罗非鱼链球菌病原。同时结合全球不同宿主来源的84株链球菌16S rRNA 基因序列,利用 Modeltest 3.7、MEGA 3.0、MrBayes 3.0 b4进行综合系统发育分析。结果表明：2009—2011年罗非鱼链球菌病原均为无乳链球菌且它们在进化上聚为一个支系,说明2009—2011年广东、海南等地区罗非鱼无乳链球菌病原具有相同的起源。此外,罗非鱼无乳链球菌与法国人源、美国人源、牛源以及日本猪源等无乳链球菌均以高支持率(100)聚在一个支系,说明全球不同宿主来源的无乳链球菌亦具有相同的进化起源,同时也证明了中国罗非鱼无乳链球菌的潜在人畜共患性,这是国内首次对不同宿主无乳链球菌进行系统发育研究。     

贵州主栽樱桃品种的植原体分子检测及鉴定

为确定贵州主栽樱桃品种玛瑙红、黑珍珠发生的花变叶、丛枝现象的病原分布、种类及其分类地位,本研究优化植原体16SrDNA基因通用引物对R16mF2/R16mR2和R16F2n/R16R2的巢氏PCR反应体系,同时对86个樱桃样品总DNA进行巢式PCR扩增,对扩增PCR产物进行克隆、测序及序列分析.结果表明,纳雍县、福泉市...     

阪崎肠杆菌多克隆抗体的制备与鉴定

为制备高效价的阪崎肠杆菌单克隆抗体,分别以福尔马林灭活的阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)菌体和菌体破碎细胞为免疫原免疫雌性清洁级大白兔,制备抗C.sakazakii多克隆抗体,获得的抗体效价分别为256000和64000,选取菌体免疫原制备抗体。采用辛酸-硫酸铵法纯化抗体,抗体纯度用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。斑点杂交法检测抗体特异性,所获抗体与S.aureus, L.monocytogenes, S.typhimurium, S.flexneri, E.coli无交叉反应,与沙门氏菌有轻微交叉反应,采用杂菌抗原反向吸附法去除了该交叉反应。选取菌体免疫原免疫动物,杂菌抗原反向吸附法纯化制备获得了对C.sakazakii特异性高的多克隆抗体,为阪崎肠杆菌免疫学检测奠定了基础。     

乳酸粪肠球菌的分离鉴定与系统进化分析

目的 分离鉴定一株疑似乳酸粪肠球菌;方法 通过对表型特性包括培养特性、形态学观察、生化试验等鉴定,同时结合16S rDNA系统进化分析;结果：该株革兰氏阳性菌能在10℃和45℃生长,接触酶阴性,发酵葡萄糖产酸不产气,可生长于6.5%NaCl和PH9.6的环境等,16S rDNA系统进化分析与粪肠球菌有最高同源性;结论 分离株为乳酸粪肠球菌。     

腌蛋盐水中致腐菌的分离鉴定

咸蛋加工企业普遍面临腌蛋腐败变质问题,夏季尤为显著,本研究为了找出导致腌蛋腐败的微生物。故采用平板稀释法对腐败腌蛋盐水进行微生物分离,共获得20株耐盐菌,经过反证法将菌株反接到腌蛋盐水中进行腌蛋,以咸蛋的腐败率为指标,筛选出对腌蛋具有较强致腐率5株菌。采用菌株形态学观察、生理生化检测,结合16S rDNA及18S rDNA序列分析,鉴定其中3株属于葡萄球菌属(Staphylococcus),1株奇异变形杆菌属(Proteus),1株织球壳菌属(Plectosphaerella)。     

兔源抗动物腹泻益生菌Tu-1的分离、鉴定及耐受性研究

本研究旨在从健康兔肠道内分离出一株对大肠杆菌有拮抗活性的菌株,并对其鉴定到属。选用平板抑菌圈法,从兔子盲肠中分离得到64株对大肠杆菌有拮抗作用的细菌,对其中14株拮抗作用较强的菌株进行了复筛,其中抑菌圈直径大于20mm的4株,抑菌圈直径在15mm~20mm的8株,另外2株拮抗作用较小,其中Tu-1对大肠杆菌的拮抗作用最强,抑菌圈直径达到21.4mm。在耐受性实验中,Tu-1对酸性环境、胆酸盐和高渗透压均表现出耐受性。对其形态及生理生化特征进行了研究分析,发现与芽孢杆菌相似,将所测得的16S rDNA序列用BLAST软件在GenBank数据库中进行比对,选取序列相似性高的菌株,用Clustal X(1.8)软件进行16S rDNA相似性分析,Neighbor-Joining法构建系统发育树。Tu-1与Bacillus velezensis的相似性水平均达到99.77%,鉴定该菌为Bacillus velezensis。     

Identification and Characteristics Analysis of Simultaneous Nitrifying-Denitrifying Bacteria and Nitrogen Removing

Based on the principle of simultaneously nitrifying-denitrifying nitrogen removing, sewage treatment plant wastewater sludge was used as inoculum, and the continuous low temperature shaker was used to enrich the simultaneously nitrifying-denitrifying nitrogen removing bacteria (SNDB-5) at 15℃. Traditional and modern molecular biology methods were adopted to determine the taxonomic status of the isolated bacteria which was named SNDB-5. Water bath shaker was used to analyze the NO2 --N removal in the nitrifying bacteria culture medium. The results show that SNDB-5 has 99.0 % homology with Pseudomonas mendocina. Morphological, gram staining and biochemical characteristics are also similar to Pseudomonas mendocina. Incubating reaction conditions in shaker shows that SNDB-5 activity is inhibited when the concentration of NO2 --N increases to 150 mg/L.     

Molecular Classification, Identification and Phylogenetic Analysis of Aerobic Denitrifier N1 in the BAF Reator

A strain of aerobic denitrifier N1 screened from the biofilm of BAF combined reactor for treating high concentration organic pharmaceutical wastewater was found capable of aerobic denitrification, which can be used nitrate of potash by as sole nitro-gen source. The results indicated that the strain N1 was most similar to Pseudomonas monteilii based on the results of morphologic characteristics, physiological and biochemical properties and phylogentic analysis of 16S rDNA sequence, and the sequence had the highest similarity of 99.2% with 16S rDAN sequence of strain Pseudomonas monteilii strain CIP 104883 obtained from GenBank using BLAST. At present, there are few reports on the degradation of nitrate nitrogen with Pseudomonas monteilii. The nucleotide sequences of strain N1 have been submitted to the GenBank databases under accession numbers HQ840771. So far there are few studies related to aerobic denitrificaton of Pseudomonas monteilii. Therefore, the study is high valuable for treating nitrogenous wastewater using microbe technology.     

葡萄炭疽病菌鉴定及同源性分析

为揭示葡萄炭疽病菌种类和遗传特征,给深入研究该病提供科学理论依据。本研究对不同地区的26株葡萄炭疽病菌通过形态学和r DNA-ITS序列分析进行鉴定及同源性研究。利用真菌通用引物ITS4、ITS5对病菌基因组进行PCR扩增,将测序结果与NCBI数据库上已知序列进行比对,同时利用Clustalx 1.83和MEGA 5.0软件进行聚类分析。结果表明:病菌菌落为白色或灰白色,菌丝呈绒状或絮状,分生孢子为圆柱形或圆筒状,单孢,无色;测得病菌ITS序列为500 bp左右,鉴定病原均为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。不同地区葡萄炭疽菌的r DNA-ITS序列同源性高,亲缘关系比较近,但是各菌株间存在着遗传差异,并且菌株之间差异与地理来源和品种无明显的相关性。