牛IL-2重组质粒对口蹄疫病毒G-H环多肽免疫小鼠的佐剂效应

本试验目的是研究牛IL-2重组质粒对口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)G-H环多肽免疫小鼠的佐剂效应.作者构建了含有信号肽序列的牛IL-2真核表达质粒pcDNA3.1-pBoIL-2,并体外鉴定其表达,同时原核表达并纯化了Asial型FMDV G-H环多肽.采用不同组合的pcDNA3.1-pBoIL-2、FMDV G-H环多肽分组免疫小鼠,并设阴、阳性对照,通过间接ELISA试验、微量血清中和试验、淋巴细胞增殖试验和实时定量PCR试验对各免疫组小鼠体液和细胞免疫水平进行综合评价.结果表明,与G-H+pcDNA3.1免疫组比较,G-H+pcD-NA3.1-pBoIL-2免疫组特异性抗体水平、中和抗体滴度、淋巴细胞增殖水平和细胞因子相对表达水平显著提高(P<0.05).结果提示,牛IL-2真核表达质粒可以显著提高G-H环多肽的免疫效果.     

不同佐剂对口蹄疫病毒样颗粒疫苗免疫效果的评价

口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是一种高度传染性疾病,严重影响着畜牧业的发展。近年来,病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)疫苗因具有安全、高效等优点,成为当前FMD疫苗研究热点。为解决FMDV VLPs疫苗免疫原性弱的问题,本研究选取CpG、GM-CSF和FliB佐剂,与ISA206联合后分别与FMDV VLPs配伍,免疫豚鼠后通过检测豚鼠特异性抗体、中和抗体、脾淋巴细胞增殖能力及FMDV的攻毒保护率,探究其对FMDV VLPs疫苗的免疫增强效果。结果表明,CpG与ISA206联合作为佐剂可有效地刺激机体产生更高水平的特异性抗体和中和抗体,同时能够提高动物的攻毒保护率,从而增强了FMDV VLPs疫苗的免疫效力,研究结果为FMDV VLPs疫苗及其他蛋白质类疫苗最优佐剂的选择提供了依据。     

猪IFN-γ和CpG基序双因子重组质粒增强亚洲Ⅰ型口蹄疫灭活病毒抗原免疫水平的研究

分析CpG基序与猪IFN-γ基因组合的重组表达质粒对口蹄疫灭活抗原的免疫佐剂效应.以亚洲I型口蹄疫灭活病毒为抗原,与含有猪IFN-γ基因和CpG基序的重组质粒配伍,采用肌肉注射法免疫小鼠,加强免疫后检测口蹄疫特异性抗体和中和性抗体水平、T淋巴细胞增殖反应、体内细胞毒性T细胞杀伤反应以及细胞因子IL-4、IL-6和IFN-γ的分泌水平.发现猪IFN-γ和CpG基序双因子重组质粒相对单一的因子能诱导更强的体液免疫和细胞免疫反应水平,尤其在中和性抗体和抗原特异性CTL反应方面更为明显.猪IFN-γ和CpG基序在诱导小鼠抵抗亚洲I型口蹄疫火活病毒免疫方面具有良好的佐剂效应,其重组质粒可望成为一种有前途的新型免疫佐剂.     

猪IFN-γ和IL-4重组质粒对口蹄疫疫苗的免疫佐剂效应研究

为了研究猪IFN-γ和IL-4对疫苗的免疫佐剂效应,用pcDNA3.1/IFN-γ和pcDNA3.1/IL-4的重组质粒与口蹄疫双价疫苗配伍免疫小鼠,检测小鼠抗口蹄疫抗体水平和CD4＋/CD8＋T细胞比值的动态变化,观察其免疫佐剂效应。结果表明pcDNA3.1/IFN-γ和pcDNA3.1/IL-4重组质粒都能显著提高小鼠抗口蹄疫抗体水平（P〈0.01）,其中pcDNA3.1/IFN-γ提高亚洲Ⅰ型FMD抗体水平的佐剂效应较pcDNA3.1/IL-4的显著（P〈0.01）,而pcDNA3.1/IL-4提高O型FMD抗体水平的佐剂效应显著高于pcDNA3.1/IFN-γ（P〈0.01）,pcDNA3.1也显示出了一定的佐剂效应;免疫后不同时间pcDNA3.1/IFN-γ和pcDNA3.1/IL-4组CD4＋/CD8＋T细胞比值显著高于其他组（P〈0.01）,且第21天与第7、45天的差异极显著（P〈0.01）。     

口蹄疫病毒3D蛋白对表位多肽免疫效果调节作用的研究

为了研究口蹄疫病毒(FMDV)重组蛋白3D对病毒表位抗原的免疫调节功能,笔者克隆了Asia 1型FM-DV的3D蛋白基因,并实现了重组蛋白在E.coli的表达及纯化.将纯化的重组蛋白3D与重组抗原按1∶2混合,并与等体积的ISA 206佐剂混合,制备免疫原(每毫升含50 μg3D重组蛋白和100 μg重组抗原).按每只豚鼠1 mL剂量经后腿肌肉多点接种250～300 g健康豚鼠5只,免疫后28 d用相同剂量的免疫原进行加强免疫;分别于免疫后0、21、28和42 d采血检测血清中和抗体效价,并进行淋巴细胞增殖试验.于加强免疫后14 d用103的50％豚鼠感染量(GPID50)的Asia1型FMDV进行攻击,评价免疫原效力.同时,设立重组抗原/ISA 2061(每毫升含100 μg重组抗原)、Asia 1型灭活疫苗(1mL)和PBS/ISA 206(1 mL)作为对照.结果表明,3D重组蛋白能显著提高表位重组抗原的中和抗体水平和淋巴细胞的增殖水平(P＜0.05),但与灭活疫苗组没有差别(P＞0.05);PBS对照组未检测到中和抗体和淋巴细胞增殖.结果提示,重组蛋白3D可显著提高重组表位抗原的免疫潜能,是一种十分重要的免疫调节蛋白,对开发新型疫苗具有重要的意义.     

不同佐剂对猪附红细胞体亚单位疫苗免疫效果的影响

为比较不同佐剂的猪附红细胞体亚单位疫苗的免疫效果,笔者通过试验提取猪附红细胞体抗原,并将其分别与白油佐剂、弗氏佐剂、明矾佐剂及铝胶佐剂混合,免疫小鼠。应用间接ELISA方法比较不同佐剂的猪附红细胞体亚单位疫苗的免疫效果。结果表明：白油佐剂组免疫效果最好,抗体水平在一周后有明显上升,其次为与弗氏佐剂组、铝胶佐剂组和明矾佐剂组。该试验为猪附红细胞体亚单位疫苗的研究提供了可靠的理论依据,为该病的防治奠定了一定的基础。     

口蹄疫病毒VP1基因疫苗制备及其对小鼠免疫效果的评定

利用已构建的插有口蹄疫病毒VP1基因的真核表达载体重组质粒,转化到大肠埃希菌中,进行扩大培养后,提取含有VP1基因的重组质粒pcD-VP1,用pcD-VP1 DNA通过肌肉注射途径多次接种实验鼠,待其产生抗体后,制备血清,检验血清中抗体对口蹄疫病毒攻击的保护率,进行免疫效果的评定。结果表明,用含有VP1基因的质粒pcD-VP1免疫接种小鼠后产生的抗体对口蹄疫病毒的攻击有一定的保护作用,从而为VP1基因疫苗的研制应用提供了一定的依据。     

口蹄疫病毒3D蛋白对表位多肽免疫效果调节作用的研究

为了研究口蹄疫病毒(FMDV)重组蛋白3D对病毒表位抗原的免疫调节功能,笔者克隆了Asia1型FMDV的3D蛋白基因,并实现了重组蛋白在E.coli的表达及纯化。将纯化的重组蛋白3D与重组抗原按     

共表达猪IFN-γ基因对PPV VP 2-PCV ORF2真核质粒的分子免疫佐剂效应研究

将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2.用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况.将重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2、pCI-ORF2.VP2、对照质粒pCI-neo、PBS、猪细小病毒火活苗和猪圆环病毒亚单位疫苗通过肌肉注射免疫小鼠,检测小鼠不同时期的淋巴细胞转化功能、T淋巴细胞亚群动态变化情况以及PPV、PCV2抗体水平.试验结果显示,在转染重组质粒的MDBK细胞中能扩增到ORF2-VP2和IFN-γ基因;转染后48 h用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达.pCI-IFN-γ.ORF2.VP2免疫组从第7天开始脾淋巴细胞对ConA有明显反应,显著高于对照组和PCI-ORF2.VP2免疫组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组和pCI-ORF2.VP2免疫组;在免疫后第14天检测到PPV PCV抗体.结果表明,pCI-IFN-γ.ORF2.VP2能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫.     

白细胞介素-10对口蹄疫病毒感染小鼠T细胞增殖及其表达TNF-α、IFN-γ和IL-2的影响

白细胞介素-10(IL-10)增高是口蹄疫病毒(FMDV)感染过程中显著特征之一。本研究旨在探讨IL-10对FMDV感染小鼠外周血T细胞增殖及其表达效应功能相关细胞因子的影响。采用CCK-8和流式细胞术分别检测小鼠外周血T细胞增殖和T细胞表达效应功能相关细胞因子(TNF-α、IFN-γ和IL-2)。结果显示,与对照小鼠相比,FMDV感染小鼠(感染12、24、36和48 h)外周血T细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖均显著下降(P<0.05或P<0.01);FMDV感染小鼠的外周血CD4⁺T细胞表达TNF-α和IL-2均显著下降(均P<0.01),CD8⁺T细胞表达TNF-α、IFN-γ和IL-2也显著下降(P<0.01或P<0.000 1)。体内阻断IL-10/IL-10R信号或者敲除IL-10均能显著恢复FMDV感染小鼠外周血T细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),但不影响CD4⁺和CD8⁺T细胞表达TNF-α、IFN-γ和IL-2。本研究首次揭示FMDV能抑...     

共表达牛病毒性腹泻病毒E0基因和牛传染性鼻气管炎病毒gD基因的重组质粒DNA构建及其对小鼠的免疫效应

本研究计划构建能同时表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)优势抗原基因的重组质粒并研究其免疫效果,旨在为BVD-IBR二联核酸疫苗的研制提供参考.采用PCR扩增目的基因E0及gD并将其依次连接至真核表达载体pVAX1-1RES中,构建pVAXl-E0-IRES-gD重组真核表达载体;将pVA...