淇河鲫甘露糖受体基因克隆及嗜水气单胞菌感染对其基因表达的影响

为了解淇河鲫甘露糖受体(mannose receptor,MR)的结构特点及其在抗感染免疫反应中的作用,实验通过同源克隆和RACE技术,获得了淇河鲫甘露糖受体(CaMR)全长c DNA,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究了嗜水气单胞菌感染对CaMR组织表达的影响。结果显示,CaMR c DNA全长4473 bp,5′非编码区81 bp,3′非编码区90 bp,编码一个由1433 aa组成的前体蛋白,其中前20 aa为信号肽。CaMR的氨基酸序列和分子结构与其他物种高度相似:胞外一个富含半胱氨酸的结构域(CRD)、一个纤连蛋白II型结构域(FNIID)及8个串连的C型凝集素样结构域(CTLDs),一个跨膜区和一个很短的胞内区。氨基酸同源性和进化分析显示,CaMR与草鱼、团头鲂、斑马鱼等鲤科鱼类的进化关系较近,与草鱼MR的同源性最高(82.4%)。通过qPCR检测到头肾、脾、心脏、肌肉等10种组织中均有表达,其中头肾表达量最高;嗜水气单胞菌感染后,头肾、脾和心脏MR基因的相对表达量均呈先升后降的趋势,而肠道则呈下降趋势,肌肉的表达量变化不显著。本研究为进一步揭示CaMR在免疫反应中的作用机制及其在淇河鲫疾病防治中的应用奠定了基础。     

锌和镍离子对鲫肠道黏膜重要酶活性的影响

为了解不同浓度(2×10^-5,2×10^-4,2×10^-3,2×10^-2和2×10^-1mol/L)的锌和镍离子,对鲫肠道黏膜中过氧化物酶(POX)、非特异性酯酶(NSE)、碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)和三磷酸腺苷酶(ATPase)活性的影响。采用冰冻切片、酶组织化学染色及光密度分析测定酶活性。结果表明,锌离子在低浓度下,对肠道黏膜中NSE、ATPase活性具极显著促进作用(P<0.01),对POX、ALP和ACP活性无显著作用;但在高浓度时,对这5种酶的活性均表现为极显著抑制作用(P<0.01)。镍离子在低浓度下对POX、ATPase活性具极显著促进作用(P<0.01),对NSE活性有显著促进作用(P<0.05),对ALP和ACP活性无显著作用,而在高浓度时对5种酶的活性均表现为极显著抑制作用(P<0.01)。指出,锌和镍对5种重要酶活性的影响,均具有一定的剂量-效应关系。     

稀有鮈鲫MHCⅡβ基因克隆及鲁氏耶尔森菌感染后的表达分析

为探究稀有鲫MHCⅡβ基因的分子特征及其表达特点,采用PCR扩增技术获得了稀有鲫MHCⅡβ cDNA序列810 bp,包括开放阅读框(ORF)759 bp,编码252个氨基酸。生物信息分析表明,MHCⅡβ氨基酸序列存在4个保守的半胱氨酸残基和GXXGXXXGXXXXXXG结构,与其他亲缘鱼类的一致性为51.78%～80.56%,其编码的蛋白质分子包括1个信号肽、1个MHCⅡβ (β-1)结构域、1个IGc1 (β-2)结构域和1个跨膜螺旋区域。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)结果显示,MHCⅡβ在脾脏表达量最高,头肾、鳃、皮肤表达量较高。人工感染鲁氏耶尔森菌后,6 h时在头肾表达呈显著上调,肝脏中在12 h开始出现极显著上调,皮肤中在24 h和48 h表达极显著,鳃中在6～24 h表达极显著,脾脏中则是在6 h出现极显著下调,于96 h接近对照组表达水平。初步研究表明,MHCⅡβ在鱼类抵御细菌感染的免疫反应中发挥着重要作用,为进一步揭示稀有鲫MHC家族的功能提供了参考依据。     

饲料中添加柠檬黄对鲫肝、肠组织结构、抗氧化指标及肠道菌群的影响

为研究合成食用色素柠檬黄对水生生物的影响,本研究以初始体重为（35.0±1.5）g的鲫为研究对象,探究了不同剂量（0、1.4、5.5和10 mg/kg bwt/day）柠檬黄摄入对鲫肝、肠组织结构,抗氧化性能以及肠道菌群的影响。结果显示 ,与对照组相比,1.4 mg/kg bwt/day柠檬黄的摄入即可导致肠上皮细胞空泡化,肠绒毛变短;5.5 mg/kg bwt/day的摄入量引起肠绒毛断裂,而10 mg/kg bwt/day处理组病理现象更严重;肝脏组织学显示,1.4 mg/kg bwt/day柠檬黄摄入导致肝细胞细胞核萎缩、变形;5.5 mg/kg bwt/day的摄入量引起肝细胞核溶解,细胞空泡化增多;10 mg/kg bwt/day导致细胞界限模糊不清,细胞变形,空泡化加剧,肝血窦不可见,肝小叶结构模糊;1.4 mg/kg bwt/day柠檬黄摄入即可引起血清与肝脏中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）以及谷胱甘肽（GSH-Px）活性下降,丙二醛（MDA）含量升高;肠道内容物测序结果表明,柠檬黄的摄入引起鲫肠道微生物Chao1、Shannon和Simpson等多样性指数变化,一些有益菌（芽孢杆菌和梭状芽胞杆菌）数量明显减少,而一些致病微生物（如蛭弧菌和希瓦氏菌）的数量明显增加。 以上结果表明,柠檬黄的摄入会导致鲫肝、肠组织结构造成损伤,并对其血清抗氧化指标及肠道菌群造成不同程度的影响。本研究结果有助于进一步了解柠檬黄在水生生物体内的毒性机制,为水生态环境污染及水质检测提供科学依据。     

重金属铜、镉对鲫肝脏基因表达的影响

采用半定量RT-PCR分析重金属Cu、Cd在不同剂量以及不同处理时问下对鲫(Carassius auratus)肝脏组织基因表达的影响.共检测了过氧化氢酶、热激蛋白、金属硫蛋白等17个逆境胁迫相关基因.9个Cu处理中,GSTα、GSTπ、CAT在鲫肝脏中诱导表达,其余基因的表达特性属于中间型,即在一些处理中表达上调,另一些处理中表达下调.Cd处理中,只有GS7 α属于完伞的诱导表达型基因.HSP30、GR以及GPx 4a在Cd胁迫的鲫肝脏中表达受抑制,其余基因的表达属于中间型.虽然Cu、Cd胁迫对各基因转录水平的的影响不尽相同,多数处理中Cu诱导基因表达的程度略高于Cd.实验结果还显示,本研究设置的Cu、Cd处理剂量以及处理时间与鲫肝脏基因的表达变化之间没有明显的相关性.逆境胁迫相关基因在Cu、Cd处理鲫的肝脏中表达水平变化多样.本研究旨为深入研究鱼类基因表达与重金属解毒分子机制间的关系以及重金属毒理奠定了基础.     

银鲫crh基因的克隆、组织表达谱及其对摄食的影响

为研究crh (Corticotropin-releasing hormone)基因对鱼类摄食的调控作用,首次克隆了银鲫(Carassius auratus gibelio) crh基因c DNA全长序列。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测crh基因m RNA在不同组织的表达及餐前、餐后和禁食对其表达的影响。结果显示,银鲫crh基因的c DNA序列全长为920 bp,其中,5’-UTR为53 bp,3’-UTR为378 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为489 bp。推导银鲫crh基因的ORF区编码蛋白由162个氨基酸组成,其中,含有11个氨基酸的保守区,24个氨基酸的信号肽,41个氨基酸的成熟肽。氨基酸序列的多重比较分析显示,银鲫crh基因与金鱼(Carassiusauratus)的同源性为99%,与鲤(Cyprinuscarpio)的同源性为96%。荧光定量PCR表达分析显示,银鲫crh基因在下丘脑中的表达量最高,其次是端脑和心脏。crh基因的表达量在餐前与餐后没有显著变化(P0.05),在禁食第5天、第7天出现极显著降低(P0.01),而在复投喂后第9天、第11天出现极显著升高(P0.01)。以上结果显示,crh基因在银鲫摄食调控方面可能扮演着重要角色。     

普安银鲫胚胎发育中脂质代谢酶基因的表达及葡萄糖的影响

采用荧光定量PCR技术检测了普安银鲫胚胎发育中乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶基因表达的特点及葡萄糖浸泡的影响,以探讨乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶基因在普安银鲫胚胎发育中的表达及mRNA表达水平及葡萄糖对这4种基因mRNA表达量的影响。试验结果显示,乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶基因在普安银鲫的成熟卵期均有表达,且随胚胎发育而上升。在15g/L葡萄糖处理组中,乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶从原肠期至出膜前期mRNA表达量升高。在原肠期、晶体出现期和出膜前期,葡萄糖能显著上调脂肪酸合成酶和乙酰辅酶A羧化酶αmRNA的表达(P0.05)。在原肠期,葡萄糖能稍上调脂蛋白脂酶和肝脂酶mRNA的表达,但差异不显著(P0.05)。在晶体出现期和出膜前期,葡萄糖能显著上调脂蛋白脂酶和肝脂酶mRNA的表达(P0.05)。研究表明,乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶属母源性酶类,其合子基因在原肠期已经开始表达。适宜水平的葡萄糖促进脂肪酸合成酶和乙酰辅酶A羧化酶αmRNA的表达有利于脂肪酸合成酶和乙酰辅酶A羧化酶α的积累,为仔鱼出膜做准备;促进脂蛋白脂酶和肝脂酶mRNA表达有利于脂质的分解供能。     

斑点叉尾TLR5和TLR5S基因在不同病原诱导下的表达特征

分别用迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila、链球菌Streptococcus iniae和斑点叉尾(鱼回)呼肠孤病毒(channel catfish hemorrhage reovirus,CCRV)对斑点叉尾(鱼回)Ictalurus punctatus进行感染实验,取感染后0h、12h、24h、48h、72h和7d的头肾、肠、肝脏和脾脏,采用实时定量PCR方法检测了TLR5和TLR5S基因在这4种免疫相关组织中的时空表达特征,探讨它们与斑点叉尾(鱼回)先天免疫反应的关系.结果表明,链球菌和迟钝爱德华氏菌能够引起TLR5和TLR5S强烈的上调表达,其中以感染链球菌12h后TLR5S在头肾中的表达上调量最为显著,与对照组相比提高了132倍(P＜0.01).在感染嗜水气单胞菌后的24h内TLR5和TLR5S基因的表达量上升,但随后却显示出了明显的下调趋势,而斑点叉尾(鱼回)呼肠孤病毒在TLR5和TLR5S基因表达中起到了明显的抑制作用,于大部分组织中表达下调.在感染12h的脾脏中,TLR5基因的表达量仅为对照组的0.017倍(P＜0.01),而TLR5S基因表达量达到最低,仅为对照组的0.01倍(P＜0.01).从不同的组织来看,TLR5在肠中的表达上调幅度最大,而TLR5S在头肾中的表达增幅最明显,如感染链球菌和迟钝爱德华氏菌12h后,TLR5在肠中的表达量分别增加了50.4倍(P＜0.01)和14.8倍(P＜0.01),TLR5S在头肾中的表达量分别上升了52.8倍(P＜0.01)和132倍(P＜0.01).以上结果进一步证明了TLR5和TLR5S基因在斑点叉尾(鱼回)先天免疫反应过程中发挥着非常重要的作用,同时在抗病原侵袭过程中表现出了一定的组织特异性和病原特异性.     

饲料营养对亲鱼生殖性能的影响研究进展

营养对鱼类生殖具有重要的调节作用。亲鱼阶段的营养不仅影响亲鱼的性成熟、配子产生、繁殖力、受精率、受精卵的孵化率和胚胎发育,而且还影响仔稚鱼的质量和存活率;适当的营养可促进鱼类的繁殖性能,而营养缺乏或者过量将降低其繁殖性能。本文总结了饲料中的蛋白质、脂肪、糖、维生素和钙磷等矿物元素的含量和来源等因素对亲鱼生殖活动各个环节的影响,对饲料中一些关键营养素的供应提出了建议,并结合陆生动物的研究结果,对能量、脂肪及必需脂肪酸等调节鱼类繁殖性能的作用机制进行概括和推断。     

幼鱼阶段电刺激对稀有鮈鲫性腺发育及繁殖的影响

控制水域电压为75 V,电流280 m A,持续电刺激5 500 ms左右,电刺激的作用强度是使鱼既能达到休克昏迷状态又能在几分钟内苏醒。通过对1月龄的稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)进行电刺激,观察电刺激对其性腺发育及性成熟后繁殖的影响,以期为渔政部门评价电捕鱼行为对鱼类资源的影响提供参考。结果表明,电刺激1次组、电刺激3次组和电刺激5次组可以促进雌雄鱼的生长和性腺发育,连续电刺激组对雄鱼的生长和性腺发育影响不大却会抑制雌鱼的生长和性腺发育;电刺激1次组、电刺激3次组和电刺激5次组对性成熟后雌雄鱼的繁殖没有产生显著差异,而连续电刺激组对性成熟后雄鱼的繁殖没有产生显著差异,却会造成雌鱼不产卵、或产出的卵颜色泛白,且可产卵雌鱼的产卵周期平均延长4.5 d,产卵量平均减少36粒,受精率平均降低9.2%。组织切片观察发现,电刺激1次组、电刺激3次组和电刺激5次组对性成熟后雌鱼的卵巢没有造成影响,而连续的周期性电刺激对性成熟后雌鱼卵巢中大的卵细胞的细胞膜造成了损坏,细胞膜界限变得不清晰;电刺激对性成熟后雄鱼精巢没有造成影响。     

长丰鲫c型溶菌酶基因的克隆及其在细菌感染条件下的表达分析

为了解c型溶菌酶基因与长丰鲫(Chang Feng Carassius auratus)的抗菌效应关系,本研究利用同源克隆方法获得长丰鲫c型溶菌酶基因cDNA全长序列。结果显示:c型溶菌酶基因全长698 bp,包括5'端非翻译区60 bp,3'端非翻译区200 bp,开放阅读框438 bp,编码145个氨基酸。长丰鲫c型溶菌酶基因在肾脏组织中表达量最大,在脾脏、肠道、心脏和脑中大量表达,在肝脏和鳃中表达量相对较低,在皮肤和肌肉中几乎不表达。长丰鲫在感染迟钝爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和金黄色葡萄球菌后,在肝脏、肾脏、脾脏和鳃等组织中基因表达量均发生显著变化,出现不同程度的上调。感染迟钝爱德华氏菌后,在脾脏中的上调幅度最大,其次为鳃、肝脏和肾脏;感染嗜水气单胞菌后,在脾脏中上调程度最大,其次是鳃;感染金黄色葡萄球菌后,在脾脏中上调幅度最大。在肝脏和肾脏中,经金黄色葡萄球菌刺激后c型溶菌酶基因的上调幅度最高;在脾脏和鳃中,经嗜水气单胞菌感染后c型溶菌酶基因上调幅度最高。三种刺激后,c型溶菌酶基因升高幅度的不同,说明不同刺激使鱼体组织产生的应激反应能力不同。     

缩骨鲫MSTN基因的克隆与组织表达分析

采用同源克隆、生物信息学方法及荧光定量PCR(Real-time PCR)对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果显示:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子和三个外显子;编码区长度为1 128 bp,编码375个氨基酸,包括信号肽(1aa~23aa),TGF-β前肽保守区域(34aa~256aa),TGF-β功能区(281aa~375aa),保守的RXXR蛋白酶酶切位点以及C-端活性区域9个保守的半胱氨酸残基,这与其他物种MSTN相似。此外,缩骨鲫与鲫鱼(Carassius auratus)的MSTN氨基酸序列同源性最高,达到96.1%。以β-actin为内参基因,荧光定量PCR分析表明,MSTN在肌肉中表达量最高;脑、眼、心脏中次之;在肝胰脏、卵巢、肠和肾脏中微量表达。     

Optimization by orthogonal array design and humoral immunity of the bivalent vaccine against Aeromonas hydrophila and Vibrio fluvialis infection in crucian carp (Carassius auratus L.)

Aeromonas hydrophila and Vibrio fluvialis are the causative agents of a serious haemorrhagic septicaemia that affects a wide range of freshwater fish in China. In order to develop a bivalent anti‐A. hydrophila and anti‐V. fluvialis formalin‐killed vaccine to prevent this disease, an orthogonal array design (OAD) method was used to optimize the production conditions, using three factors, each having three levels. The effects of these factors and levels on the relative per cent survival for crucian carp were quantitatively evaluated by analysis of variance. The final optimized formulation was established. The data showed that inactivation temperature had a significant effect on the potency of vaccine, but formalin concentration did not. The bivalent vaccine could elicit a strong humoral response in crucian carp (Carassius auratus L.) against both A. hydrophila and V. fluvialis simultaneously, which peaked at 3 or 5 weeks respectively. Antibody titres remained high until week 12, the end of the experiment, after a single intraperitoneal injection. The verification experiment confirmed that an optimized preparation could provide protection for fish at least against A. hydrophila infection, and did perform better than the non‐optimized vaccine judged by the antibody levels and protection rate, suggesting that OAD is of value in the development of improved vaccine formulations.     

鲫血髓过氧化物酶的表达及其与血药浓度的关联性

为了研究在吡喹酮代谢过程中,鲫血髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)m RNA表达与血药浓度的相关性,以体重为(80±10.5)g的鲫鱼(Carassius auratus)为试验动物,单剂量(10 mg/kg)口灌吡喹酮(praziquantel,PZQ)后,在鲫血液中选取β-actin为内参基因,通过设计特异性引物,利用荧光定量PCR,分析了不同时间点鲫血MPO m RNA水平的相对表达量的变化;利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定了吡喹酮在鲫鱼体内的血药浓度,分析两者之间的相关性。结果显示,吡喹酮能够迅速进入血液,并被快速消除,药时数据符合二室开放模型。在1 h时,血液中吡喹酮的浓度达到最大值,为2.85?g/m L,96 h后血液中检测不到吡喹酮;灌药后,MPO基因表达量随时间呈先升后降趋势,在1 h时髓过氧化物酶表达量最高。此外,0.25 h、0.5 h、1 h、3 h与6 h组与对照组差异性极显著(P0.01),12 h组与对照组差异显著(P0.05)。48 h与96 h组与对照组差异不显著(P0.05)。相关性分析发现,MPO m RNA相对表达量与血液中吡喹酮的浓度之间相关系数r=0.96,为高度相关,并且推测MPO可能参与吡喹酮的氧化代谢。结论认为:(1)MPO m RNA相对表达量的升高与外源性药物吡喹酮的摄入有关。(2)血液中吡喹酮的残留量与MPO m RNA相对表达量线性相关。本研究旨在提供一种从分子水平评价水产动物体内药物残留的新思路。     

Effect of dietary lysozyme on growth,immune response,intestine microbiota,intestine morphology and resistance to Aeromonas hydrophilia in gibel carp (Carassius auratus gibelio)

A 75 days experiment was conducted in a flow‐through system on juvenile gibel carp (Carassius auratus gibelio) (3.43 ± 0.01 g) to evaluate the effects of dietary lysozyme on growth performance, intestine morphology, microbiota and immune response. Four isonitrogenous (crude protein: 367 g kg^?1) isolipid (62 g kg^?1) and isocaloric (gross energy: 17.92 kJ g^?1) diets were formulated to contain 0, 100, 500 and 1000 mg kg^?1 lysozyme, respectively. The results showed that specific growth rate (SGR) and feed efficiency (FE) increased at 1000 mg kg^?1 lysozyme. Blood leucocyte phagocytic activity (PA) and serum lysozyme (LZM) decreased with dietary lysozyme on day 25, 50 and 75. There were no significant differences in alternative complement pathway (ACP), respiratory burst (ROS), serum superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSHpx) or malonaldehyde (MDA). After Aeromonas hydrophilia challenge, higher survival was obtained at 500 mg kg^?1 group. PA, ROS, SOD, LZM and ACP increased with increasing dietary lysozyme, while MDA reversed. Goblet cells in mid‐intestine and microvilli height in distal intestine increased with dietary lysozyme on day 75. Dietary lysozyme reduced the diversity of intestine microbiota. In conclusion, oral administration of 500 mg kg^?1 dietary lysozyme for 75 days is recommended for the survival of gibel carp and 1000 mg kg^?1 dietary lysozyme for fast growth.     

辛硫磷对鲫肝微粒体CYP3A酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

为探究不同剂量的有机磷农药辛硫磷在24、48、72和96 h染毒后对鲫(Carassius auratus gibebio)肝微粒体中CYP3A酶活性、mRNA及蛋白表达的影响,采用半静态染毒法,设置辛硫磷空白对照组低、中、高浓度组(0.0825、0.165、0.330 mg/L),以红霉素-N-脱甲基酶(ERND)活性反映CYP3A酶活性,最后采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别测定CYP3A-mRNA及蛋白的表达量。结果显示:辛硫磷能抑制CYP3A的酶活性并且下调CYP3A-mRNA的表达,72 h和96 h后,各浓度组中的mRNA的表达量相较对照组降低了50%以上。辛硫磷染毒后的CYP3A蛋白的表达量在各时间段中都呈现显著的剂量效应关系,在低、中浓度组间存在时间效应关系。结果表明,辛硫磷能作为一种抑制剂降低鲫肝脏中CYP3A酶活性、mRNA及蛋白表达量,其对蛋白表达抑制的剂量效应和时间效应影响更显著。     

Comparison of food selection and growth performance of koi carp, Cyprinus carpio L., and goldfish, Carassius auratus (L.) in mono- and polyculture rearing in tropical ponds

To compare the effect of polyculture against conventional monoculture on ornamental carp production, investigations on food selection and growth performance of koi carp (K), Cyprinus carpio L. and goldfish (G), Carassius auratus (L.) were conducted in a 11‐week rearing experiment in two monoculture (100% K and 100% G) and five polyculture (90% K–10% G, 70% K–30% G, 50% K–50% G, 30% K–70% G and 10% K–90% G) conditions in tropical ponds. There were three replicates for each treatment. Environmental conditions and food availability were similar in all the treatments. Ivlev's electivity index showed that both fish species avoided phytoplankton and preferred cladocerans to other zooplankton groups (copepods and rotifers) in monotypic conditions. However, in the polyculture treatments, the positive electivity of goldfish towards cladocerans reduced significantly (P<0.05), while the percentage of copepods, rotifers and phytoplankton in the gut content increased. No significant differences in weight gain, specific growth rate and deformities were recorded at harvest for koi carp between the different treatments (P>0.05). Even the survival rate of koi carp recorded above 90% in all the treatments. However, the goldfish recorded significantly better weight gain, specific growth rate and survival in monoculture (100% G), compared with the polyculture treatments (P<0.05). Goldfish deformities were lowest (P<0.05) in the monoculture treatment (2.42%). The number of marketable fish above a set size limit of 4 g total weight was significantly higher in the two monoculture treatments, compared with the five polyculture treatments (P<0.05). Keeping in view of the dietary similarities of koi carp and goldfish, and the aggressive nature of koi carp in polyculture, it is suggested to refrain from polyculture of goldfish and koi carp until further documentations relating to optimum stocking density and management of polyculture of ornamental carps are available.     

异育银鲫P450家族CYP3A136基因的克隆与表达

根据5种硬骨鱼已知CYP3A序列保守区设计兼并引物,以异育银鲫cDNA为模板扩增得到CYP3A基因片段,根据得到片段序列设计特异引物并利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得全长cDNA。得到异育银鲫CYP3A基因全长为1 769 bp,开放阅读框为1 545个核苷酸,编码514个氨基酸。其预测蛋白质分子量为58.624 ku,理论等电点为6.30。将异育银鲫CYP3A序列理论编码氨基酸序列提交细胞色素P450命名委员会(Cytochrome P450 Nomenclature Committee)并由其命名为CYP3A136。氨基酸序列分析显示,其与稀有鮈鲫、草鱼、鲦同源性较高,并且具有高度保守的血红素结合区域FXXGXXXCXG。异育银鲫CYP3A基因的半定量RT-PCR显示,在肝和肠组织中转录水平最高,在肾和鳃中次之,其余组织较低。