云南地区牛源无乳链球菌分离鉴定及毒力基因和耐药性的检测

试验旨在研究无乳链球菌的生物学特性,为防治无乳链球菌引起的奶牛乳房炎提供理论依据。根据细菌分子生物学分离鉴定无乳链球菌,参考GenBank登录的牛源无乳链球菌16S rRNA、菌属特异性cfb （CAMP因子）、毒力基因和耐药基因序列,运用Oligo 6.0和Primer Premier 5.0软件设计14对引物,建立PCR快速检测方法,并进行20种常见抗生药物的耐药试验。结果显示,试验成功鉴定出17株牛源无乳链球菌,毒力基因与NCBI上已报道的无乳链球菌相应序列具有高度同源性,均≥99%;共检测到6种耐药基因;分离菌株对青霉素、红霉素、林可霉素、克林霉素、万古霉素、氨苄西林、新生霉素、磺胺异噁唑的耐药率均较高,耐药率依次为100.0%、94.1%、94.1%、94.1%、94.1%、82.3%、82.3%和47.1%,对青霉素严重耐药;而对氨基糖苷类、四环素类、头孢菌素类、喹诺酮类耐药率均较低,耐药率分别为15.7%、14.7%、7.7%和3.9%。本研究结果表明,建立的PCR快速检测方法灵敏可靠,云南地区无乳链球菌已对部分β-内酰胺类、大环内酯类、磺胺类等抗生素出现多重耐药性。     

福建省漳州市罗非鱼无乳链球菌分离鉴定及毒力基因和耐药性研究

【目的】 明确福建漳州地区罗非鱼无乳链球菌临床分离株的血清型、毒力基因携带情况与耐药特性,为鱼源无乳链球菌研究提供新的数据。【方法】 于福建省漳州市部分罗非鱼养殖场采集疑似无乳链球菌感染的病鱼样品,通过分离培养、形态观察及生化试验初步分离鉴定病原菌。经由16S rDNA特异性片段引物、16S rDNA通用引物进行PCR鉴定及测序比对鉴定分离株。用PCR方法检测分离株血清型及4个主要毒力基因（cylE、sodA、gapC和scpB基因）分布情况。通过纸片扩散法对分离菌株进行11大类共29种抗菌药物的药敏试验,并进行多重耐药分析。【结果】 分离株菌落呈白色圆形、边缘整齐、表面光滑湿润,呈β溶血;革兰染色阳性,菌体排列为长短不一的链状,单个或成对存在;VP试验、CAMP均为阳性,触酶试验阴性,能发酵海藻糖,均符合无乳链球菌的典型特征,经鉴定共分离获得14株鱼源无乳链球菌。14株分离菌株的血清型均为Ⅰa型。分离株毒力基因cylE、sodA、gapC的检出率均为100%,而毒力基因scpB均未检出。分离菌株对磺胺异噁唑、庆大霉素、卡那霉素耐药率均为100%,对链霉素、新霉素、甲氧胺嘧啶耐药率均>70%。分离株均为多重耐药菌株,6重及以上耐药的菌株占总分离菌株数的78.57%。【结论】 本研究明确了当前福建漳州地区罗非鱼源无乳链球菌的血清型、毒力基因和耐药特性,为进一步研究鱼源无乳链球菌的致病机理和临床有效防控措施提供参考。     

宁夏地区牛源肠球菌分离鉴定及耐药性与毒力基因检测

为了了解宁夏地区牛源肠球菌的耐药性及耐药基因和毒力基因的携带情况,本试验使用显色培养基及PCR法对肠球菌进行分类鉴定;采用药敏纸片琼脂扩散法(K-B法)测定肠球菌对16种抗菌药物的敏感性;最后采用PCR方法对9种相关耐药基因与7种肠球菌毒力基因进行检测并测序。结果显示,在分离鉴定出的255株肠球菌中,屎肠球菌有78株(30.59%),粪肠球菌有53株(21.96%)。药敏试验结果显示,分离菌对磺胺异恶唑和杆菌肽耐药率达到了100%;其次是苯唑西林(92.16%)、红霉素(65.88%)、四环素(65.49%)和青霉素(56.86%)。分离菌对万古霉素和利奈唑胺高度敏感,敏感率分别为92.54%与95.29%。耐药基因检测结果显示,氨基糖苷类耐药基因aph(3)′-Ⅲ的检出率最高,为100%;其次是红霉素类耐药基因ermB,为46.27%;未检出耐万古霉素耐药基因VanA、VanB、VanC。已检测的毒力基因明胶酶gelE的携带率最高,为37.60%;其次为心内膜炎抗原efaA,为36.10%。结果表明,宁夏地区牛源肠球菌的多重耐药现象比较严重,应当加以重视。     

广西罗非鱼无乳链球菌的分离鉴定、毒力基因及耐药性研究

本研究旨在明确中国罗非鱼主养区广西各地罗非鱼无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）分离株的血清型分布、毒力基因携带情况和耐药情况,为罗非鱼无乳链球菌病的防控奠定基础。2018-2019年从广西柳州、钦州、南宁、北海等地患无乳链球菌病罗非鱼体内分离了47株无乳链球菌,并对各分离株的血清型、毒力基因分布和耐药情况进行检测和分析。血清型检测结果表明,47株无乳链球菌血清型高度一致,均为Ⅰa血清型。对4种毒力基因检测结果表明,47株无乳链球菌临床分离株cylE、sodA、gapC毒力基因的检出率均为100%,而scpB基因仅在人源参考菌株2603V/R中检出,在所有鱼源分离株中未检出。对11类（31种）常见抗生素的药敏试验结果表明,临床分离株对磺胺异噁唑、新霉素、庆大霉素、卡那霉素的耐药率达到90%以上,对氧氟沙星、左氧氟沙星、氨苄青霉素、阿莫西林、头孢克洛、头孢曲松、头孢哌酮、头孢拉定、土霉素、强力霉素的敏感性均为100%。多重耐药检测结果表明,5重以上耐药菌株占93.62%,其中9重以上耐药菌株为19.15%,且均分离自柳州地区。结果表明,广西地区罗非鱼源无乳链球菌血清型单一,均为Ⅰa血清型,且均携带多种毒力基因,多重耐药现象严重。     

无乳链球菌耐药性及耐药基因检测

为了解昆明地区奶牛隐性乳房炎无乳链球菌分离株对常用抗生素的耐药性及耐药基因携带情况,采集昆明某地区隐性乳房炎患牛乳样71份检测。结果显示,分离到的15株无乳链球菌,对青霉素类、红霉素、林可胺类等抗生素存在不同程度的耐药现象,多重耐药现象也比较严重,分离菌共出现10种耐药谱,其中7耐和8耐的占有60%。对青霉素严重耐药,其耐药率达到了100%。其中,PCR扩增β-内酰胺类和大环内酯类耐药基因,结果显示,15株无乳链球菌均含有pbp1a、pbp2b、erm B基因,表明,本地区不能继续使用青霉素等药物来治疗奶牛乳房炎,应选择敏感性的药物,如头孢类抗生素等。同时应合理交叉用药,以防细菌产生耐药性。本试验为昆明地区无乳链球菌引起的隐性奶牛乳房炎的防治提供了一定的依据。     

河南牛无乳链球菌耐药性分析和毒力基因检测

为了解河南牛乳房炎无乳链球菌的耐药性和毒力基因分布状况,本研究对分离鉴定的155株无乳链球菌进行抗生素敏感性试验,并且利用PCR技术检测相关耐药性基因和毒力基因。结果显示：分离株对喹诺酮类敏感度最高,对四环素、氨基糖苷类和大环内酯类表现为极强的耐药性,而对青霉素G的耐药性达到100%;155株分离株检测到突变的青霉素耐药基因pbp2b,此外,aphA-3和aad-6两种氨基糖苷类耐药基因均存在于分离株中,而发现四环素耐药性则主要由tetL,tetM和tetK三种基因介导,检出率分别为25.16%、31.61%和19.35%,同时检测到大环内酯类耐药基因erm(A/T)和ermB基因,检出率为13.55%和50.97%;分离菌中检测到bca、ScpB、hly和rib四种毒力基因,检出率为48.39%、56.77%、20.65%和23.87%。河南地区无乳链球菌携带4种毒力基因以及8种耐药基因,且绝大多数菌株表现出多重耐药性。     

无乳链球菌毒力基因与耐药性的相关性研究进展

乳房炎是奶牛养殖业中最常见的一种疾病,会造成奶牛乳腺发炎肿胀,使产奶量大幅下降。作为一种多因素性疾病,奶牛乳房炎发病原因复杂,饲料污染、病原菌感染以及环境因素均可以导致乳房炎的发生。无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）作为奶牛乳房炎的主要致病菌,常会造成乳腺组织的局部炎症,随着无乳链球菌分离率的增加以及抗菌药物的滥用,其对抗菌药物的耐药性逐步攀升,给临床治疗带来了一定的困难。此外,无乳链球菌能够定植于宿主体内,破坏宿主的免疫系统,而其自身毒力因子会引起宿主机体疾病的产生。随着相关研究的深入,发现毒力与耐药性本身互为关联,耐药性的增强以不同的方式影响毒力,表明了耐药性与毒力因子之间存在着一定的相关性。笔者主要回顾了国内外链球菌以及其他细菌毒力基因与耐药性之间相关性的研究进展,从无乳链球菌毒力因子及耐药性等多种角度入手,分析了无乳链球菌的毒力机制以及毒力基因,并对近5年国内不同地区无乳链球菌耐药性进行统计,从细菌种类、环境和相关机制对链球菌的毒力和耐药性之间的关系展开综述,以期为无乳链球菌所引起的临床症状筛选出合理的抗菌药物并对毒力基因与耐药性的相关性研究提供理论参考。     

宝石鲈无乳链球菌的分离鉴定及耐药性分析

2013年高温季节在广东广州2个养殖场患病宝石鲈(Scortum barcoo)病灶处共分离到2株细菌Py1和Py2。宝石鲈攻毒试验结果显示2株分离菌均具有较强毒力(半致死量分别为7.42×10⁶和1.72×10⁶ CFU/mL),且都对罗非鱼具有高度感染性(半致死量分别为3.39×10⁶和8.66×10⁵ CFU/mL)。经ATB生化鉴定及cfb基因序列分析,确定分离株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),并对其进行了相关药敏试验检测,以期为该病的预防提供参考。     

奶牛乳腺炎无乳链球菌的分离鉴定及耐药性分析

通过对甘肃省部分地区奶牛场的323份乳腺炎乳样进行无乳链球菌的分离鉴定及耐药性分析,旨在为临床合理用药提供科学依据。采用6%~8%绵羊鲜血琼脂平板培养基、选择性培养基(B族链球菌显色培养基)、普通营养琼脂培养基,结合革兰染色、镜检,对可疑菌落分离纯化后进行生化试验,确定分离出无乳链球菌;选用临床常用的10种抗生素对分离株进行药敏试验。结果表明,55株无乳链球菌分离株对青霉素、头孢曲松钠、四环素表现出一定程度耐药,耐药率分别为63.64%,36.36%,34.55%,而对左氧氟沙星、庆大霉素、环丙沙星、甲砜霉素高度敏感,敏感率分别为100%、92.73%、85.45%、69.09%。     

牛源肠球菌的分离鉴定及毒力因子基因的检测

为探究牛源性肠球菌中6种毒力因子基因(ccf、asa1、ace、esp、cylA、gelE)的分布情况,采集了不同地区382份疑似隐形乳腺炎的奶样,常规分离纯化细菌,采用16SrRNA和16S~23SrRNA方法相结合的方法,共鉴定出了68株肠球菌并检测了其溶血特性和上述6种毒力基因的存在情况。结果显示,40株(58.82%)表现为α-溶血,10株(14.71%)为β-溶血,18株(26.47%)为γ-不溶血。68株(100%)携带asa1基因,49株(72.06%)携带gelE基因,43株(63.24%)携带ccf基因,12株(17.65%)携带ace基因,10株(14.71%)携带esp基因,6株(8.82%)携带cylA基因。54.41%的分离菌株同时携带gelE、ccf、asa1毒力基因,而青海民和分离株的esp与ace,gelE与ccf同时出现,有一定规律性;但溶血性基因cylA与14株溶血性肠球菌没有相关性。研究牛源肠球菌的溶血特性与毒力基因携带情况,对肠球菌性奶牛乳腺炎的防控具有指导意义,同时也为动物与人之间病原互相传播的研究提供试验依据。     

牛源性无乳链球菌血清型分布及抗生素耐药性研究

本研究旨在查明牛源性无乳链球菌血清型分布及对常见抗生素的耐药情况,指导临床合理用药。对从中国部分地区奶牛场采集的临床型乳房炎病牛乳中分离鉴定出78株无乳链球菌地方菌株,制备沉淀反应抗原及6株标准血清型无乳链球菌单因子血清抗体,采用环状沉淀试验,对78株无乳链球菌地方菌株进行了血清学分型鉴定;同时采用K-B纸片法测定了这些菌株对抗生素的耐药情况。结果表明,引起奶牛乳房炎的无乳链球菌血清型主要为X型(60.26%),其次为Ⅲ型(10.26%)、R型(7.69%)、Ⅱ型(7.69%)和Ⅰb型(5.13%),Ⅰa型尚未发现。无乳链球菌对目前临床上使用的大部分抗生素,如头孢唑啉、头孢噻肟、丁胺卡那霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素、强力霉素、氟苯尼考、多黏菌素B、环丙沙星、氟哌酸和头孢他啶/棒酸均较敏感;但对氨苄青霉素、链霉素、恩诺沙星、阿莫西林/棒酸和复方新诺明,有一定的耐药性,其耐药率达50%~100%。本研究对进一步研制有效的药物及疫苗,指导临床合理用药具有重要的意义。     

5株牛源肺炎链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了确定导致吉林省某肉牛场肉牛发病的致病菌,对分离菌进行形态特征、生化特性、分子生物学等鉴定,并对分离菌进行致病性和耐药性检测。结果表明:细菌分离培养共分离到5株病原菌,经分子生物学鉴定,5株病原菌均为牛肺炎链球菌,且均具有致病性;5株牛肺炎链球菌对阿米卡星、氟苯尼考、头孢噻肟敏感,对复方新诺明、泰乐菌素、青霉素钠、红霉素和头孢吡肟具有较强的耐药性,对环丙沙星、氯霉素、强力霉素和庆大霉素呈现不同程度的耐药现象。说明头孢噻肟、氟苯尼考、阿米卡星可作为治疗牛链球菌病的首选药物。     

奶牛乳腺炎无乳链球菌的分离鉴定与耐药性分析

奶牛乳腺炎是奶牛养殖业的常见疾病,而无乳链球菌是乳腺炎的重要病原体之一。本试验从江苏和河北地区的规模化奶牛场中共收集67份乳腺炎奶样,经分离培养和鉴定,共分离出33株无乳链球菌。药敏试验表明:河北地区和江苏地区奶牛场的分离株对阿莫西林、头孢氨苄等β-内酰胺类药物以及恩诺沙星等喹诺酮类药物高度敏感,而对链霉素、庆大霉素、卡那霉素以及丁胺卡那等氨基糖苷类药物均表现出较高的耐药性。此外,河北地区分离株对四环素、多西环素这两种药物比较敏感,但在江苏地区无乳链球菌对这两种药物表现出了较强的耐药性,耐药率均高达74.1%。说明不同地区的无乳链球菌耐药情况有一定的差异。本研究结果可为临床上用抗生素预防和治疗乳腺炎提供参考。     

罗非鱼无乳链球菌的分离鉴定

从南宁市某淡水罗非鱼养殖场的濒死罗非鱼分离获得7株优势菌株,经人工腹腔注射感染罗非鱼,仅发现菌株LFY-5注射后的罗非鱼出现与自然发病罗非鱼相似的症状,死亡率高达60％。经检测,LFY-5菌株为链状或成对排列的革兰氏阳性球菌,单个球形菌体直径为1．0～1．2jxm,在血琼脂培养基上呈13一溶血;对阳性克隆进行DNA检测得到长度为1510bp的16SrRNA基因片段,即分离菌株为无乳链球菌（S．agalactiae）。药敏试验结果显示,菌株LFY-5对头孢氨苄、万古霉素、头孢唑啉、头孢哌酮、新生霉素等18种药物高度敏感,但对菌必治、复达欣、替卡西林、头孢噻肟等8种药物不敏感。     

榆林部分地区湖羊乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性和毒力基因检测

【目的】明确规模化湖羊场乳房炎的主要病原菌种类及其耐药性和毒力基因分布情况,指导临床治疗湖羊乳房炎合理用药。【方法】在6个规模化羊场采集临床型乳房炎乳样43份,采用细菌形态学鉴定、生化鉴定及16S rDNA序列分析的方法确定引起湖羊乳房炎的主要病原菌,采用纸片扩散法检测其耐药性,并通过PCR方法检测相关毒力基因。【结果】革兰染色镜检显示获得了革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌。革兰阳性球菌在Baird-Parker琼脂平板上呈现出边缘圆润,中间呈黑色的菌落;生化试验鉴定结果显示,分离株对甘露醇、过氧化氢和兔血浆凝固试验为阳性;经16S rDNA测序比对,与金黄色葡萄球菌高度相似的分离株共31株。革兰阴性杆菌在伊红-美蓝琼脂平板上呈现出黑紫色泛有金属光泽的菌落,在麦康凯琼脂平板上呈现出粉红色的菌落;生化试验鉴定显示,分离株对吲哚试验和甲基红试验为阳性,对VP试验和枸橼酸盐利用试验呈阴性;经16S rDNA测序比对,与大肠杆菌高度相似的分离株共12株。药敏试验结果显示,分离的金黄色葡萄球菌对环丙沙星、左氧氟沙星和头孢噻肟具有较高的敏感性,对青霉素、红霉素和链霉素耐药;分离的大肠杆菌对环丙沙星和左氧...     

黑龙江地区牛源大肠杆菌毒力和耐药基因检测分析

为了了解黑龙江地区牛源大肠杆菌毒力基因及主要治疗药物耐药基因的分布,试验采用KB(Kirby-Bauer)法和PCR方法检测了2011—2013年从黑龙江地区各规模化养牛场分离的66株大肠杆菌的毒力和耐药基因。结果表明:66株大肠杆菌中有33株带有毒力基因,检出率达到50.0%,携带1种及其以上的毒力基因分别为30株和3株,占阳性菌株总数的91.0%和9.1%;耐药基因检出率分别为磺胺类耐药基因Sul1/Sul2(32.1%)、Sul3(9.4%),氯霉素类耐药基因Cat1(15.1%)、Cml A(13.2%)、Flor(15.1%),氨基糖苷类耐药基因aph A3(1.9%)、aad A(22.6%)、aac C2(22.6%)、aac C4(20.8%)。     

奶牛乳房炎性无乳链球菌药敏试验及毒力基因检测

旨在调查山东某奶牛养殖场无乳链球菌的感染状况、药敏性及毒力基因携带情况.采集该牛场临床型乳房炎奶样200份,分别用5％绵羊血琼脂平板、MHA药敏琼脂培养基、16S rRNA基因引物、12种药敏片和多重PCR进行无乳链球菌的药敏性及毒力基因的检测.从中分离出42株无乳链球菌,分离率为21％.所分离出的无乳链球菌培养菌落特...     

内蒙古呼和浩特地区牛源致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因检测及耐药性分析

为鉴定内蒙古呼和浩特地区奶牛肠道致病性大肠杆菌(E.coli)分离株的血清型、毒力基因和耐药性,本研究分别采用接种小鼠试验、玻片凝集试验、PCR方法及药敏纸片法测定E.coli分离株的致病性、血清型分布、8种毒力基因及对20种抗生素的敏感性。结果表明,从内蒙古奶牛场采集的100份粪便样品中鉴定出50株致病性E.coli(50%)。定型的24株致病性E.coli的血清型共10种,以O18、O146和O152为优势血清型,共14株,占定型菌株的58.3%。50株致病性E.coli中,毒力基因irp2、eae A、stx1、stx2和hly A的检出率分别为100%、50%、14%、10%和8%。另外,所有血清型菌株对受试的抗菌药物呈多重耐药性,并且均耐受青霉素、四环素、多西环素、利福平、复方新诺明和阿莫西林6种抗生素,而且全部含有毒力基因irp2。本研究结果为牛源致病性E.coli病的防控和临床用药提供了实验依据。     

奶牛乳腺炎无乳链球菌的分离鉴定

无乳链球菌是比较常见的导致奶牛乳腺炎的病原菌,该菌也是山羊、绵羊慢性乳房炎的病原菌之一,也能引起婴儿败血症、脑膜炎和肺炎等。人医临床上对该菌以B群链球菌相称。试验从内蒙古呼和浩特市周边5个牛场中患有乳房炎的病牛中采集120份乳样,通过分菌培养、形态学观察、生化试验,鉴定出14株无乳链球菌,同时对这14株菌进行了药物敏感试验、动物致病性试验等。试验结果发现,所分离到的无乳链球菌对青霉素类、氨基糖苷类药物高度敏感,对磺胺类、氟哌酸、喹诺酮类药物中度敏感。动物致病性试验对小鼠的致死率达到80%以上。