采用全菌抗原干燥包被法ELISA检测禽霍乱血清抗体的研究

利用戊二醛的偶联作用将禽多杀性巴氏杆菌的全细胞抗原在聚苯乙烯酶标板上进行干燥包被,酶标板以2.5%的戊二醛溶液预处理.通过直接和间接ELISA方阵滴定确定其包被的全菌抗原最适浓度为108个菌/mL.特异性、重复性、稳定性检验,以及初步建立的间接ELISA用于样品检测的结果表明,所创建的禽多杀性巴氏杆菌全菌抗原干燥包被方法能够很好地应用于建立检测禽霍乱血清抗体的ELISA.     

间接ELISA检测禽霍乱血清抗体的研究

比较不同ELISA包被抗原对禽霍乱免疫血清的检测结果,选择最佳的包被抗原建立禽霍乱血清抗体的间接ELISA检测方法.分别 使用超声波裂解抗原、脂多糖蛋白抗原和全菌抗原作为包被抗原,应用间接ELISA方法检测 禽霍乱免疫血清,并对不同抗原建立的ELISA方法进行重复性试验.根据三种抗原对 免疫血清的检测结果以及重复性试验,发现全菌抗原的敏感度、特异性、稳定性均优于其他 两种抗原.全菌抗原作为ELISA包被抗原用于禽霍乱血清学检测具有敏感度高、特异性强、稳定性好的特点.     

间接ELISA法禽霍乱抗体的动态监测

将４０只５０日龄健康禽霍乱非免疫鸡随机分为四组,每组１０只。用禽霍乱蜂胶佐剂灭活疫苗对和组鸡进行不同水平的免疫,同时设非免疫对照组。各组鸡间隔５－７天采血,以间接ＥＬＩＳＡ法测定血清Ｐ／Ｎ值,并确定临界值。将Ｐ／Ｎ值在２．１－４．７的１３只试验以一个最小致死量进行攻毒试验,同时设攻毒对照,在１周内３只对照鸡均表现感染发病并死亡,而试验鸡均健活,从而初步证明所确定的临界值是合理的。     

间接ELISA法对禽霍乱抗体的动态监测

将40只50日龄健康禽霍乱非免疫鸡随机分为四组,每组10只。用禽霍乱蜂胶佐剂灭活疫苗对各组鸡进行不同水平的免疫,同时设非免疫对照组。各组鸡间隔5-7天采血,以间接ELISA法测定血清P／N值,并确定临界值。将P／N值在2.1-4.7的13只试验鸡以一个最小致死量（相当于10个菌／ml）进行攻毒试验,同时设攻毒对照,在1周内3只对照鸡均表现感染发病并死亡,而试验鸡均健活,从而初步证明所确定的临界值是合理的。     

间接ELISA检测禽霍乱抗体方法的建立

用多杀性巴氏杆菌 TJ8菌株制备ELISA抗原 ,与抗鸡 Ig单抗 1 B7酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接 ELISA方法。交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强 ,灵敏度高。确立了将鸡血清 1 0 0倍稀释监测 ELISA效价(ET)的回归方程 y=1 .4981 + 0 .391 9x(P>0 .0 5 ) ,可用于定量测定。间接凝集试验与ELISA方法的比较试验表明 ,EL ISA法比间接血凝试验敏感性高 4倍以上     

禽腺病毒1型抗体间接ELISA检测方法的建立

采用过滤法及蔗糖梯度密度离心法制备禽腺病毒1型(FAV-1),以FAV-1全病毒作为ELISA包被抗原,对ELISA的反应条件进行摸索,建立了2种检测FAV-1抗体的ELISA检测方法。2种ELISA检测方法特异性强,对禽流感病毒、新城疫病毒及禽呼肠孤病毒阳性血清的检测结果均为阴性;重复性好,重复试验变异系数均小于5%。应用建立的ELISA检测方法,对FAV-1灭活疫苗免疫后的抗体水平进行监测,2种方法均能反映抗体水平的消长。结果表明,本研究建立的ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。     

大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法的建立

旨在建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法。经琼脂糖凝胶层析纯化大豆抗原蛋白,以不同剂量皮下注射免疫小鼠,采用方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法,利用该方法检测小鼠免疫后血清抗体水平。通过方阵滴定法确定11S蛋白最佳包被浓度为5.0μg/mL,血清稀释倍数为1∶800;7S蛋白抗原最佳包被浓度为2.5μg/mL,血清稀释倍数为1∶1 600;两者的批内、批间系数均小于10%,重复性较好,通过ELISA法确定11S和7S蛋白的最佳免疫次数为2次,免疫剂量为1 000μg/kg。结果表明本试验初步建立大豆抗原蛋白抗体检测间接ELISA方法,具有很强的特异性、敏感性和重复性,可用于大豆抗原蛋白过敏反应的临床检测。     

检测禽副粘病毒2型抗原的双抗体夹心ELISA方法的研究

以禽副粘病毒2型（Yucaipa株）群特异性单抗7E5为基础建立了检测PMV－2抗原的双抗体夹心ELISA方法。该方法对Yucaipa病毒的最低检出量为1．6962μg/ml，对PMV－2不同形式病毒及各分离株也都有很好的检出率。用Yucaipa病毒尿囊液人工感染10日龄SPF鸡，于感染后不同时间采集心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、气管等病科及泄殖腔拭子，经处理后用建立的方法进行检测，结果表明PMV－2病毒在感染鸡的法氏囊组织内大量存在，感染后3天就可从法氏囊组织内检测到PMV－2病毒，粪便中仅个别有检出阳性者。     

副鸡禽杆菌外膜蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)是鸡传染性鼻炎的致病菌,可以引起急性呼吸道病,可导致蛋鸡产蛋率下降、从而造成严重的经济损失。副鸡禽杆菌引起的症状与鸡毒支原体等病原引起的其他上呼吸道传染病非常相似,本试验利用副鸡禽杆菌外膜蛋白,建立间接ELISA抗体检测方法,用于血清抗体的检测。通过分析副鸡禽杆菌外膜蛋白HMTp210中较为保守的P9片段,将其进行原核表达并纯化,纯化的P9蛋白免疫鸡制备了抗血清。结果显示,P9蛋白分子量62 Ku,纯度80%以上。以纯化的蛋白P9作为包被抗原,采用棋盘滴定法确定了抗原最佳包被浓度为1μg/mL、血清样品最佳稀释度为1∶100,作用时间为60 min;酶标二抗的最佳稀释浓度为1∶10 000,最佳作用时间为30 min;底物显色时间为15 min;阴、阳性的判定值为0.3。按上述条件建立的间接ELISA方法可以检测出P9蛋白免疫后的鸡血清及三种血清型副鸡禽杆菌的阳性鸡血清,与其他禽病病原体抗血清无交叉反应,本研究为检测副鸡禽杆菌血清抗体提供了一种新的方法。     

用完整菌体作抗原包被进行ELISA检测激光照射前后血清抗体含量的初步研究

本研究用改良ELISA法检测激光照射前后抗大肠杆菌血清抗体的含量。结果表明:利用完整菌体作抗原包被进行ELISA试验,完全符合一般可溶性抗原的ELISA规律;并与传统血清学方法凝集反应进行了比较。激光照射穴位后使血清中抗体的含量增加,提示激光照射后能增强机体的免疫功能。     

ELISA检测禽呼肠孤病毒抗体方法的建立及应用

建立了一种检测禽呼肠孤病毒(ARV)抗体的敏感方法——ELISA法。用此法对某鸡场血清样品进行检测,琼扩检出阳性率为65%,ELISA检出阳性率为100%,ELISA方法明显比琼扩敏感。另外,用ELISA方法诊断出江苏某鸡场发生的鸡病毒性关节炎,并用ELISA法筛选出8株分泌ARVMcAb的杂交瘤细胞株。ELISA方法因其特异、敏感、可靠,将成为SPF鸡群,祖代鸡群净化ARV的有效检测手段。     

间接ELISA检测抗禽白血病病毒抗体方法的建立

禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)是禽白血病的病原,可引起鸡的免疫抑制和肿瘤。净化种鸡群是控制ALV的主要方法之一。本研究将ALV的p27基因克隆到表达载体pGEX-6P-1,在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化后的p27-GST融合蛋白为抗原包被,经过条件优化,建立了检测鸡血清中抗ALV抗体的间接ELISA方法。与IFA检测结果比较,该方法比IDEXX ELISA试剂盒有更高的符合率。可用于禽白血病病毒感染根除的大规模检测,并具有低成本、易操作的特点,能同时检测到针对ALV所有亚群的抗体。     

禽霍乱鸭尸各脏器组织含菌量的测定

目前已经研制出多种禽霍乱菌苗,大致可以分为死苗(灭活菌苗)与活苗(弱毒菌苗)两大类。由于多杀性巴氏杆菌抗原结构复杂,存在众多的血清型,在死苗的应用上存在明显的型免疫问题。Rimior等(1982)的研究证实强毒菌株表现尤为明显。由强毒菌株制成的灭活菌苗只能抵抗同型菌株的攻击,对异型菌株就没有保护作用,从而限制了灭活菌苗的免疫谱。在活苗的应用上不存在明显的型免疫问题,因为活苗注入体内有一个繁殖过程.在此过程中能产生抵抗异型菌攻击的交叉保护因子,从而使免疫接种的家禽获得抵抗异型菌攻击的保护力。但是,由于选育的弱毒菌株遗传性能不够稳定,往往导致菌株毒力返强或免疫原性降低,使目前研制的禽霍乱弱毒菌苗与大面积的推广应用仍有一定差距。     

J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立

本研究分离纯化了具有反应活性的J亚群禽白血病JL-2株gp85表达蛋白,并以其为抗原,开展了相关反应条件、特异性、重复性、敏感性、现地应用以及国外试剂盒符合率等方面的研究,初步建立了J亚群禽白血病ELISA诊断方法.     

禽白血病病毒抗体间接ELISA 检测方法的建立及初步应用

以大肠杆菌表达、纯化的禽白血病病毒（ALV）重组P27蛋白为包被抗原,建立了检测ALV-P27抗体的间接ELISA方法,为禽白血病流行病学调查提供了一种简便的血清学检测方法.该方法与9种禽常见传染病病毒阳性血清及大肠杆菌阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于10％,具有良好的重复性;新建立的ELISA方法比IDEXX公司生产的ALVA、B亚群抗体检测试剂盒和J亚群抗体检测试剂盒相对于免疫荧光试验（IFA）有更高的符合率.     

J亚群禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

本研究利用J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)gp85单因子血清纯化后的抗体成功建立了检测ALV-J抗原的双抗体夹心ELISA方法(DAS-ELISA)。结果表明,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,对ALV-J抗原的最小检出量为0.165 μg/mL。用该法对48份临床血浆样品进行检测,结果与PCR方法的符合率达到85.2%。     

菌毒康对禽霍乱的防治试验

用纯中药制剂菌毒康对鸡人工感染禽多杀巴氏杆菌强毒株Ｃ４８－１进行了预防和治疗试验。结果表明,攻毒组１０羽鸡于３ｄ内全部死亡;治疗Ⅰ组１０羽鸡存活１羽,存活率１０％;治疗Ⅱ组１０羽鸡全部死亡;预防Ⅰ组１０羽鸡存活８羽,存活率８０％;预防Ⅱ组１０羽鸡存活７羽,存活率７０％;同舍感染组死亡率１００％。由此可见,菌毒康对禽霍乱强毒感染的治疗效果不明显。但对禽霍乱强毒感染有一定的预防作用。