一株中度嗜盐反硝化细菌的分离鉴定及其代谢特性研究

从某海产养殖企业的水质净化单元中分离获取反硝化细菌,探明其对硝酸盐的代谢特性,旨在为高盐度养殖废水的脱氮处理提供耐盐型菌种。采用添加海水的反硝化细菌培养基,利用系列稀释法和平板划线法分离获取反硝化细菌,通过其形态特征和分子生物学特征进行鉴定,并在不同环境条件和营养条件下测定其反硝化活性。试验结果表明,分离筛选得到的反硝化菌株DN20为革兰氏阴性杆菌。该反硝化细菌为Halomonas属,其最佳代谢条件为温度30℃,盐度100,p H 7.5~8.5,C/N(质量比)4∶1。菌株DN20对NO_3~--N的半饱和常数(K_s)为94.09 mg/L,最大比反硝化速率(q_(max))为3.90 mg/(g·h)。     

渔用微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件研究

本实验以筛选出能用于养殖水体净化的菌株为目的,通过稀释涂板法和划线法,从河道污泥、花园土壤、鲈肠道内分离筛选到6株产絮凝剂的细菌,经过复筛得到1株高效絮凝剂产生菌DK—1。     

红螺菌科光合细菌的分离、培养及其作为鱼虾类饵料添加剂的初步研究

红螺菌科细菌，其细胞内含有菌叶绿素a或b和各类胡萝卜素，能进行不放氧的光合作用。其大多数种类能以有机物作为光合作用的供氢体兼碳源，故在自然界里被有机物污染的地方它们广泛存在，在净化环境中起着重要的作用。由于它们在不同的条件下能以不同的代谢方式，高效地降低污水中的BOD．     

海洋微生物溶菌酶的抑菌作用及抑菌机理初步研究

以一些革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和真菌对海洋微生物溶菌酶的敏感性进行研究。结果表明,海洋微生物溶菌酶对受试菌株均有不同程度的抑制或杀灭作用,尤其对临床分离的致病菌及养殖致病菌效果显著。海洋微生物溶菌酶对试验菌株的生长繁殖和代谢均有影响,抑制作用主要发生在指数期初期。通过透射电镜观察发现,海洋微生物溶菌酶对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的作用效果不同,推测其作用机理与二者细胞壁结构不同有关。     

鲤鱼肠道及肠内微生物谷氨酸脱氢酶同工酶及活性的初步研究

采用垂直板聚丙稀胺凝胶电泳方法 ,对鲤鱼 (LyprinusCarpio)的肠道组织、肠内微生物谷氨酸脱氢酶 (GDH)同工酶进行分析 ,并对GDH活性进行测定 ,结果显示 ,摄食添加尿素饲料的鲤鱼肠组织及肠道微生物GDH同工酶谱与对照组有明显不同。试验组多一条酶谱且酶带染色深 ,表明鲤鱼在一定程度上能利用尿素合成 -谷氨酸 ,其合成可以通过肠组织和肠内微生物两条途径进行。而对GDH酶活性测定表明 ,试验组和对照组的肠组织和肠内微生物之间的酶活性均无显著性差异     

海带表面降油细菌的分离鉴定及降油性能研究

用柴油为唯一碳源的培养基选择分离海带表面具有降解柴油性能的细菌;对分离菌株进行了形态学、生理生化特性以及16SrDNA序列分析并测定其生长特性;测定了接菌不同浓度(7×107 cfu/mL、7×108cfu/mL、7×109 cfu/mL)分离菌对柴油的降解率;另外,测定了加入不同浓度葡萄糖(0.5g/L、1g/L、2g/L、4g/L、6g/L、8g/L、10g/L)作用7d后分离菌对柴油的降解率。结果显示:从海带表面分离到2株降油细菌,编号为:HD-4和HD-6。HD-4菌株菌落形态圆形、直径1.5mm、黄色、不透明、边缘整齐,HD-6菌株菌落圆形,直径1.0mm,浅黄色、透明、边缘整齐。两株菌均为革兰氏阴性短杆菌。生理生化特征和16SrDNA序列分析确定HD-4菌株为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.),其16SrDNA同源性为99%;HD-6菌株为交替单胞菌(Alteromonas_sp.),其16SrDNA同源性为98%。2株菌最适生长温度均为15℃。HD-4和HD-6最适生长pH分别为9和8。适宜NaCl浓度分别为2%和4%;在25℃振荡培养(150r/min)7d,接菌量为7×107 cfu/mL、7×108 cfu/mL、7×109 cfu/mL时,HD-4对柴油的初始降解率分别为8.0%,22.1%和27.6%;HD-6初始降解率分别为23.7%、38.8%和43.2%。加入葡萄糖后2株菌的降油率均有所增高,加入4g/L葡萄糖时达最高值,3个接种浓度下HD-4菌株分别为85.4%、82.3%和80.4%,HD-6菌株分别为86.8%、93.7%和89.3%。当接菌量为7×107 cfu/mL,HD-4在葡萄糖含量为4g/L时作用7d,降油率可达到最大值86.72%,HD-6菌株在葡萄糖浓度6g/L达到最大值67.64%。葡萄糖浓度超过4g/L和6g/L时HD-4和HD-6菌株的降油性能有所下降。     

呋喃唑酮降解菌株的分离鉴定及降解特性研究

从污染鱼塘底泥中筛选分离出一株能有效降解低浓度呋喃唑酮的细菌F5,经16S rDNA同源性序列分析,鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudom onas aeruginosa)。30℃静置避光培养30 d后,该菌株对0.75、1.0和2.5 mg/L呋喃唑酮的降解率分别为58.8%、64.1%和38.2%。温度为20~25℃更有利于该菌株的降解作用,对1.0 mg/L呋喃唑酮降解率均能达85%。碳源和氮源浓度的提高均能促进该菌株的生长和对呋喃唑酮的降解。在0.5 mg/L低磷浓度下,该菌株生长受抑制但降解活性增加,对1.0 mg/L呋喃唑酮降解率达71.8%。     

土壤中单宁和植酸降解菌的筛选、鉴定及液态发酵研究

为从土壤中筛选能够同时降解单宁和植酸的微生物,本实验利用富集培养技术,分离、筛选、鉴定土壤中的单宁和植酸降解菌,并研究其在液态发酵下的产酶能力。结果显示,从土壤中共获得109株纯菌落,包括39株细菌、46株酵母菌以及24株霉菌。分别用单宁筛选性培养基和植酸筛选性培养基筛选上述菌株,获得27株植酸降解菌和14株单宁降解菌,其中霉菌M-6、M-3和M-1可以同时分解单宁和植酸,且霉菌M-6的水解圈直径大于M-3和M-1。在液态发酵条件下,随着发酵温度的升高(20~35°C),霉菌M-6产单宁酶和植酸酶的活力呈现先升高而后降低的趋势,在发酵温度为30°C时达到最高值(P0.05)。随着发酵p H的升高(p H 4~7),霉菌M-6产单宁酶和植酸酶的活力呈先升高后降低的趋势(P0.05);其中单宁酶活力在发酵p H值为5时达到最高值,显著高于其他处理组(P0.05);而植酸酶活力在发酵p H值为5时达到最高值,显著高于发酵p H 4和7处理组(P0.05),但与发酵p H 6处理组差异不显著(P0.05)。通过菌落和菌株形态学以及分子测序方法,鉴定M-6为黑曲霉。因此,本研究从土壤中分离筛选出3株(M-6、M-3和M-1)能够同时水解单宁和植酸的降解菌,在液态发酵条件下,黑曲霉M-6产单宁酶和植酸酶的最佳发酵温度为30°C,最佳发酵p H值为5。     

噬菌蛭弧菌的研究及应用⑧噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的研制、应用及生态效应

1 噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的研究历程 1979年,我国首次开展对噬菌蛭弧菌(以下简称蛭弧菌)的研究.     

罗非鱼循环水养殖系统中一株肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及其脱氮性能研究

实验从山东德州市一罗非鱼(Oreochromis niloticus)养殖场循环水养殖系统的脱氮池中分离到一株具有高效脱氮特性的菌株(编号DZYC02),分别以葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、丁二酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠为碳源,研究了碳源种类对菌株DZYC02脱氨氮效果的影响;同时以蔗糖为碳源、NH4Cl为氮源,研究了不同碳氮比、初始pH及盐度对该菌株脱氮效果的影响。结果显示:菌株DZYC02在以柠檬酸钠为碳源、C∶N≥15、pH 5~7、盐度0~15的条件下具有良好的脱氮效果,24 h内对浓度为20 mg/L的NH+4的去除率达100%,48 h内对浓度为20 mg/L的NO-2去除率高达100%;将该菌采用浸泡方式感染斑马鱼(Danio rerio)进行生物安全试验,结果显示菌株DZYC02对斑马鱼表现出较好的安全特性。分别用Biolog细菌鉴定方法和16S rDNA序列分析比对法对该菌进行鉴定,结果显示菌株DZYC02为一株肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)。     

海水虾蟹混养池中氨氮降解菌的分离筛选与鉴定

采集海水虾蟹养殖池底泥,在以(NH4)2SO4为唯一氮源的选择性培养基上分离得到17株细菌,利用纳氏试剂分光光度法测定其氨氮降解能力,筛选出降解率较高的菌株X14-1-1。该菌株在氨氮质量浓度50mg/L时,72h内使氨氮质量浓度降至1.65mg/L,降解率可达96.7%;在氨氮质量浓度5mg/L时,72h内降解率可达74.01%。采用盐酸萘乙二胺分光光度法测定其降解亚硝酸盐的能力,结果显示,菌株X14-1-1在72h对亚硝酸盐的降解率达到67.2%。该菌株为革兰氏阴性短杆菌,大小为1.47~2.54μm×0.37~0.53μm,平板菌落呈乳白色,圆形。通过形态观察、生理生化试验及16SrDNA鉴定,初步确定X14-1-1属食油假单胞菌,命名为Pseudomonas oleovorans X14-1-1。该菌株在海水养殖环境水质调节及养殖废水处理方面具有潜在的应用价值。     

溶藻细菌的分离及溶藻特性研究

从爆发蓝藻水华的鱼池采集水样,以铜绿微囊藻为对象进行溶藻细菌筛选,得到R1、R2、R3、R5、R6、R8和R9共7株溶藻细菌,生理生化特征初步鉴定R5为海鱼弧菌,另6株为非发酵型细菌.R1、R3、R5、R8和R9细菌含量为105～108 cfu/ml时,对微囊藻的抑制率很高,效果优于R2和R6.对R1、R3、R5和R9...     

鲍琼胶酶高产细菌的筛选和鉴定

从江蓠中分离筛选出两株琼胶酶高产菌,均为革兰氏阴性菌,呈细杆状。通过API条带分析,它们除了在对柠檬酸盐的利用上存在差别外,其它的生理生化特征基本相同,鉴定为多食鞘氨醇杆菌(Sphingobacteriummultivorum),其可信度分别是98.7%和99.5%。     

发病仿刺参细菌的分离鉴定和生长特性的研究

从发病仿刺参中分离到5株菌,分别为痢疾志贺氏菌、有毒威克斯菌、奥斯陆莫拉氏菌、缺陷短波单胞菌和动物溃疡伯杰氏菌.经革兰氏染色和胞外酶活性剂生理生化特性的研究,确定了痢疾志贺氏菌、有毒威克斯菌、奥斯陆莫拉氏菌、缺陷短波单胞菌和动物溃疡伯杰氏菌的最佳生长条件分别是:35 ℃,pH 9,盐质量分数5%;25 ℃,pH 7,盐质量分数5%;25 ℃,pH 7,盐质量分数1%;25 ℃,pH 7,盐质量分数3%;35 ℃,pH 7,盐质量分数3%.能分解淀粉和蛋白,不能分解酯类.     

养殖水体中高效氨氮降解菌的分离与鉴定

以(NH4)2SO4为惟一氮源的选择性培养基,从养鱼池水中分离筛选到1株高效氨氮降解菌X2。当NH4 -N初始质量浓度为50 mg/L时,该菌株在24 h内的氨氮降解率>95%,并具有硝酸还原和亚硝酸还原能力。初步鉴定该菌株为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。     

有毒赤潮藻共生菌的分离鉴定

利用脂肪酸鉴定法和荧光微生物法对塔玛亚历山大藻和利马原甲藻的共生菌进行了分离和纯化.从塔玛亚历山大藻和利马原甲藻中分离出2株可培养的菌株.脂肪酸鉴定为人苍白杆菌和交替假单胞菌,用荧光法鉴定的菌株分别为弗氏枸橼酸杆菌和短稳黄杆菌.     

太湖新银鱼微卫星位点的分离与序列特征分析

为了开发太湖新银鱼（Neosalanx taihuensis）的微卫星分子标记,采用生物素标记探针（AC）12、（AAC）10、（AAG）10和（GATA）8对其微卫星位点进行了筛选,并对其序列特征进行了分析。共获得490个微卫星序列,筛选的总效率为78．09％。筛选出725个微卫星位点,其中完美型592个,占81．66％;混合型82个,占11．31％;非完美型51个,占7．03％。探针（AC）12富集到的微卫星重复次数大多集中在14～26次,最高44次;探针（AAC）10和探针（AAG）10富集得到的微卫星重复次数主要集中在8～20次,最高42次;探针（GATA）8富集得到的微卫星重复次数一般在6～15次,最高32次。探针（AC）12、（AAC）10、（AAG）10和（GATA）8的杂交效率分别为85．19％、60．19％、5．16％和10．64％。筛选得到的725个微卫星位点中,二碱基重复位点390个（53．79％）,三碱基重复位点284个（39．17％）,四碱基重复位点47个（6．48％）,五碱基重复位点 1个（0．14％）和六碱基重复位点3 个（0.42％）。根据二碱基重复核心序列进行引物设计,对抚仙湖24尾太湖新银鱼样本进行 PCR 扩增,电泳结果显示部分微卫星位点有较高的多态性,同时本研究获得的三碱基、四碱基、五碱基和六碱基重复位点也可为长重复单元微卫星引物的开发提供基础。     

Isolation,Screening, and Identification of Proteolytic Lactic Acid Bacteria from Indigenous Chao Product

The aim of the study was to isolate, select, and identify proteolytic lactic acid bacteria (LAB) from chao, a traditional fermented fish from Pangkajene and Kepulauan Regency, South Sulawesi, Indonesia. LAB was isolated by poured plate method. Proteolytic LAB were selected using agar skim milk media. Protease activity of LAB was determined based on the amount of tyrosine released in unit/mL. Proteolytic LAB were identified using API 50 CHL kit and 16S rRNA gene sequence analysis. The result showed that a total of 60 isolates were obtained from chao, and 57% of them were cocci-shape. Fifteen isolates were halotolerant proteolytic LAB. Their R values and protease activity were 2.11–3.39 and 0.267–0.304 U/mL, respectively. Identification by API 50 CHL kit showed that four rod-shape isolates were Lactobacillus plantarum, and two others were Lactobacillus curvatus. Cocci-shape isolates could not be identified as cocci bacterium. Rep-PCR results showed that there were two kinds of bands, namely thick and thin. Two isolates were selected from two types of bands that had the highest R for the analysis of 16S rRNA gene sequences, namely Ags1-3 and Ags7-3. The results showed that Ags1-3 isolate was identified as Lactobacillus plantarum and Ags7-3 as Pediococcus acidilactici.     

Isolation of antifouling substances from the Palauan sponge Protophlitaspongia aga

ABSTRACT: Fouling organisms cause serious problems by settling on ships' hulls, and other marine infrastructures. Organotin compounds have been developed as effective antifoulants. However, environmental problems are associated with these compounds. It is necessary to find antifouling substances that exhibit a lower toxicity than those substances currently used. A new pyrimidine derivative, 3,4,5,6-tetrahydro-6-hydroxymethyl-3,6-dimethyl-4-pyrimidinecarboxylic acid, (compound 1) and zooanemonin (compound 2) were isolated from the marine sponge Protophlitaspongia aga as antifouling substances against the barnacle Balanus amphitrite . We also found that α-nicotinamide ribose (compound 3) inhibited germination and the attachment of Ulva spores.