DAS—ELISA检测香石竹环斑病毒

使用碱性磷酸酶标记的抗体进行DAS－ELISA试验，检测香石竹环斑病毒的灵敏度可达4ng/ml的提纯病毒或10^-4倍稀释的克利夫兰烟的病汁液。在检测人工接种的Dianthus spp.的5个品种时，有2个品种在接种7天后还没有表现症状，但DAS－ELISA检测为阳性反应。     

PCR—ELISA在转基因产品检测中的应用

PCR－ELISA法以共价交联在PCR管壁上的寡核苷酸作为固相引物进行PCR扩增，PCR产物通过杂交和凝胶电泳双重检测，结果通过酶标仪直接输出，无人为误差。该方法灵敏度高，可靠性强，易于操作，自动化和程度高，适于批量检测，是适合推广的1种快速转基因检测方法。     

近期发现的果树类病毒及其检测方法

近年来,美国、日本、西班牙、澳大利亚等许多国家,对一些病原不明、曾认为是由病毒引起的果树病害重新进行了研究,先后从柑桔、椰子、梨、苹果、葡萄、李、桃等多种果树上发现了类病毒(Viroid)或类似于类病毒的病原物、(表1)。我国也已报道了2种果树类病毒,即     

微波ELISA快速检测水稻条斑病菌的研究

 ELISA是植物病原细菌鉴定和检测中最常用的血清学方法之一。作为一种快速、灵敏和准确的检测和诊断手段,常规ELISA常因反应板的"边缘效应"而影响检测结果的重复性,而且还存在整个工作程序时间较长(8~12h)的缺点。     

植物病毒ELISA检测实验数据处理系统的建立

ELISA检测植物病毒时，通过酶联仪读出的OD值，借助计算机对数据进行处理和检测样品的阳／阴性判断，具有准确、快捷、方便的特点。本文介绍的ELISA实验数据处理系统（ETDMS）定置了几种最常用的酶联实验布局，达到了用计算机辅助判断的目的。     

ELISA及实时荧光PCR检测番茄细菌性溃疡病菌的方法比较

本文以番茄细菌性溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)菌悬液和田间采集的病组织为材料,比较ELISA试剂金、常规PCR方法和实时荧光PCR方法检测番茄细菌性溃疡病菌灵敏度和适用性.结果表明,ELISA试剂盒检测灵敏度为105cfu/mL,具有简便、快速、易操作特点,适用于田间病害诊断;常规PCR检测灵敏度为105cfu/mL;TaqMan探针实时荧光PCR检测灵敏度为103～4cfu/mL,比常规PCR和ELISA检测灵敏度提高10～100倍,且不需要琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色和Southem杂交,但需要昂贵的仪器和试剂,适用于室内检测及相关研究.     

用酶联免疫吸附技术（ELISA）检测水稻细菌性条斑病菌的研究

兔抗 Xanthomonas campestris pv.oryzicola 抗血清经提纯得特异性免疫球蛋白 IgG,用过典酸钠法标记获辣根过氧化物酶标兔抗 X.c.pv.oryzicola IgG 结合物。ELISA 双抗体夹心法和间接法的灵敏度分别为10~2～10~3个菌/ml 和10~4～10~5个菌/ml,这两种方法检测稻谷带菌的结果与用七叶苷选择性培养基分离及琼脂双扩散验证结果一致,双抗体夹心法的灵敏度和特异性比间接法高,从制样到完成检测约需40小时。检测结果不但可以目测定性,还可用酶联免疫检测仪所测得的 OD 值在本试验制作的曲线上查出稻谷带菌量。     

苜蓿花叶病毒ELISA检测方法的建立及其在大豆病毒调查和抗性资源鉴定中的应用

苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus, AMV)是一种世界性分布、宿主范围广、具有严重危害性的植物病毒,能引起大豆的严重病害。本研究利用原核表达的AMV CP蛋白制备的抗血清,建立了高效、准确的AMV间接ELISA检测方法,并应用于病害调查和抗性鉴定,结果表明制备的3份抗血清对重组蛋白和AMV感染的大豆植物粗提液的效价均达到256 000倍,血清特异性分析结果显示3份抗血清仅识别感染AMV的大豆叶片,不识别感染大豆花叶病毒(soybean mosaic virus, SMV)的大豆叶片。通过建立的AMV间接ELISA与常规RT-PCR同时对采集的50份疑似感染AMV的大豆样品进行检测,有46份样品检测结果一致,符合率达92%。利用建立的AMV ELISA方法和课题组已建立的SMV ELISA方法对吉林省大豆主产区的大豆样品进行病毒检测的结果表明,病毒检出率为38.30%,SMV的检出率达30.85%,AMV的检出率达17.06%,复合侵染率为9.61%。对接种AMV的40个大豆品种进行抗性鉴定,结果显示40份大豆全部感染AMV,但是病毒载量存在差异,部分品种表现出AM...     

马铃薯块茎腐烂病的检测方法

引言马铃薯块茎腐烂病 Phomaexigua varfoveata 系 EPPO 组织 A,级检疫性病害,其生物学,分布及经济重要性详见 EPPO活页资料78号(EPPO 会刊第12卷第1期)。根据EPPO专项检疫要求     

蚕豆萎蔫病毒ELISA检测系统建立及其应用

 从制备的蚕豆萎蔫病毒(BBWV)抗血清中提纯IgG,并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,建立了DAS-ELISA检测BBWV的方法。DAS-ELISA检测时包被IgG以26.9 μg/ml效果最好,HRP-IgG结合物以1800~11600效果最佳。DAS-ELISA检测BBWV病叶粗汁液的最大稀释度为1 320,检测提纯病毒的最低浓度为0.744 μg/ml。田间病样测定表明,BBWV在蚕豆、豌豆、豇豆、大豆、茄子和辣椒等作物上发生很普遍,在菜豆上也有零星发生,而在莴苣、芹菜、白菜、萝卜、花椰菜上未测到BBWV。DAS-ELISA检测结果与生物学检测结果基本相符,符合率达97.6%。     

梨火疫细菌实时荧光PCR和诱捕PCR-ELISA检测方法的建立

根据梨火疫细菌中独特而保守存在的质粒pEA29，设计了1对引物和3条探针，建立了实时荧光PCR检测方法和诱捕PCR-ELISA检测方法。实时荧光PCR采用带荧光标记的核酸杂交探针，边扩增边检测，步骤简单，不需PCR后处理，可避免假阳性和交叉污染；诱捕PCR-ELISA检测方法只需简单处理的样品就能检测，减少了核酸不纯出现的漏检，由于增加了核酸杂交探针，可不需凝胶电泳EB染色检测，不会出现假阳性问题。     

非放射性核酸探针的特点及其应用

在动植物病害检疫中,为了准确而迅速地诊断出病原物,可以采用核酸探针进行分子杂交的方法来检测动植物病原物的特殊核酸序列,但是,探针的制备通常采用放射性元素标记,如~(32)P、~(35)S等,由于放射性元素本身对人的危害性、不稳定性及难以管理等特点,都限制了放射性探针的广泛应用,囚此,用非放射性物质标记制作探针的技术应运而生,这种非放射性物质可以是半抗原,也可以是蛋白质,但最常用的是生物素(Biotin),即维生素H。     

RT—PCR检测烟草环斑病毒的研究

本文报道应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）的。根据ＴＲＳＶＲＮＡ－２序列３末端非编码区设计，合成引物－１和引物－２；用ＴＲＳＶＲＮＡ作模板，引物－２作引物，反转录合成ｃＤＮＡ，并以此作模板进行ＰＣＲ扩增，５－６小时内可得到结果，检测粗提液中ＲＮＡ灵敏度达４００ｐｇ，并且可以直接从受侵染的叶片汁液中检出ＴＲＳＶ，为口岸快速检测疫推出一个更灵敏、准确的分子生物学新方法。值得推广应用。     

ELISA检测植物病毒过程中减少非特异反应的有效方法—酶联板处理

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种快速、准确、经济、简便的免疫学检测手段,并具有作大规模检测和灵敏度高的优点。但用于植物病毒粗汁液检测,往往存在着病健样品的吸收值之比(P/N)太低,阴阳性反应难以判别的问题。酶联板的处理能消除或大大减缓此问題。在本实验中,我们用氢氧化钠/乙醇液处理酶联板,效果十分显著。在对不同组10种植物病毒粗汁液的检测中,使用处理板并设未处理板作对照,结果前者无一例外的大大提高了病毒特异性吸收值及P/N值,从而使ELISA检测植物病毒粗汁液的特异性吸收值提高0.8～5倍,灵敏度提高10～1000倍。     

转 Cp4 epsps 基因大豆快速DAS-ELISA 检测方法的建立

为了快速检测转 Cp4 epsps 基因大豆, 本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体, 辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体, 通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间, 成功建立转 Cp4 epsps 基因大豆快速双抗夹心ELISA检测方法?结果显示:最佳检测条件为捕获抗体浓度10 μg/mL, 检测抗体浓度1.25 μg/mL, 样品与检测抗体先后加入酶标板37℃共同孵育60 min?该方法的检测范围为0.312 5~80 μg/mL, 待检叶片?籽粒最佳检测范围为10~80倍稀释; 板内变异系数为1.64%~5.42%, 板间变异系数为3.05%~9.13%, 符合ELISA定性试剂盒参考标准; 对100份大豆叶片?20份大豆籽粒进行检测, 与Western blot结果和标准结果进行比较, 符合率为100%, 表明该检测方法具有良好的准确性和重复性?该检测方法75 min内即可完成检测, 适用于快速检测转 Cp4 epsps 基因大豆, 为转 Cp4 epsps 基因快速检测试剂盒的开发奠定了基础?     

一步RT-PCR检测南芥菜花叶病毒方法的建立

本研究采用Trizol快速提取植物叶片总RNA，通过GeneBank设计特异性引物，并利用一步RT—PCR技术，最终建立了一套比较实用的检测ArMV的方法。该方法对于其它病毒的检测同样具有借鉴意义。