生物素抗生物素酶联法检测植物病毒的研究

生物素抗生物素引入酶联免疫吸咐试验(ELISA)检测南方菜豆花叶病毒(SBMV)、烟草花叶病毒(TMV)抗原和抗体,可使灵敏度提高10倍以上,非特异反应弱,尤其是检测周期由8小时缩短为3小时,在植物检疫、单克隆抗体阳性杂交瘤细胞检测筛选中应用,是一个快速、准确的好方法。     

酶联免疫吸附技术——Ⅲ酶联免疫吸附法在检测植物病毒上的应用

一、酶联免疫吸附法(ELISA)概述1966年 Nakane 等及 Avrameas等,分别报道用酶代替荧光素标记抗体,作生物组织中抗原的鉴定及定位。随后发展用于鉴定免疫扩散及免疫电泳板上的沉淀线。Miles(1968)等描述了如何在免疫测定中用酶代替同位素。Avrameas(1969,1971)试验使抗体与酶结合,并进行了检测抗原的基础试验。继而由     

检测兰花病毒的斑点酶联法的建立

本文建立了齿兰环斑病毒（Odntoglossum ringspot virus,ORSV）和建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus,CyMV）两种兰花主要病毒的斑点酶联法检测技术（Dot-ELISA）。用Dot-ELISA对提纯病毒和田间病叶进行检测,结果表明;检测ORSV和CyMV提纯病毒的灵敏度分别为0.82μg/mL和0.244μg/mL;病叶汁液的稀释倍数分别为1280倍和2650倍。该方法具有操作简便、成本低等优点,适合于兰花生产中的病毒检测。     

植物病毒的克星──病毒A

植物病毒的克星──病毒Ａ１９９１年，我们引进齐齐哈尔市北方化工研究所研制生产的病毒Ａ，该药通过抑制核糖核酸和脂蛋白的形成达到抗病毒的作用。最初是在西瓜上试用，当西瓜出现的叶片皱缩、蔓卷曲、节间缩短等症状时，用５００倍液喷雾，每３～５天１次，２～３次后...     

植物病毒的克星──病毒A

多霉灵防治番茄灰霉病效果好多霉灵是由万霉灵与多菌灵复配的新型高效杀菌剂。１９９３年我们用江苏新沂农药厂提供的多霉灵在徐州市郊区后桃村日光温室进行防治番茄灰霉病的试验，小区面积２１平方米，３次重复。设亩用５０％多霉灵１００克、６５％硫菌霉威１５０克、５...     

检测植物病毒的几种免疫电镜法

免疫电镜一般是指用电镜检测特异抗原抗体反映的技术,可以大致分为二类:一种是用来检测固定或切片材料中的免疫反应;另一种用来检测在特殊材料特别是病毒制剂中的免疫反应。对于后者我们先简单回顾一下早期的几种方法,然后详述二种快速的改进方法。     

应用DIBA检测植物病毒的研究

 点免疫结合测试法(Dot Immunobinding Assay,DIBA)检测提纯TMV、PVY、CMV的最低检出率分别达到0.184ng/ml、1.28×10³ng/ml、0.056ng/ml。检测感病叶片粗汁液的最高稀释度依次为1:819,200、1:102,400、1:819,200。其中,检测TMV的最低检出率及最高稀释度分别比Hibi(1985)[1]的报道高544倍和100余倍。检测PVY粗汁液的最高稀释度比Banttari(1985)的报道高15倍[2]。HRP-IgG、抗血清在所使用的稀释度范围内(1:1000-8000、1:500-4000)对结果没有明显影响。但检测PVY时,随着血清稀释度的提高最低检出率明显下降。利用HRP-A代替HRP-IgG可以获得更为理想的检测效果。改进的DIBA(暂称为DSA-DIBA)检测TMV时未发现有任何假阳性反应。DIBA检测PVY、TuMV、PRSV-T揭示了它们相互间有效远缘的血清学相关性。实验表明,DIBA是检测植物病毒专化、快速、简便、灵敏、经济的新方法。     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测豆类种传病毒的研究

本文介绍使用微量板酶联免疫吸附法(ELISA)检测TMV(杆状)、SMV(线状)、CMV(球状)、AMV(杆菌状多粒体)四种不同形态、不同分类组群的病毒。此法非常灵敏,能够检测病毒提纯液的最低浓度为7.6～10亳微克/毫升,也能检出稀释1563～10240倍病叶粗澄清液中的病毒,灵敏度比琼脂双扩散法高1000倍以上。 ELISA可以直接检出单粒种子中的病毒,而且可以分别检出单粒种子不同部位如大豆的种皮、种胚、胚乳及胚根中的病毒存在。该法适用于检测大量标样,对植物检疫来说,这是一个很好的方法。     

用酶联免疫法检测香蕉花叶心腐病病毒

用纯化的黄瓜花叶病毒株ＣＭＶ－Ｂ制备小鼠腹水抗体，其效价为１：５０００，间接ＥＬＩＳＡ法可检测香蕉病叶汁液的最大稀释度为１：１２８０，健叶汁液无非特异性反应，在送检的５０份香蕉试管苗中，有１份样品被出带有ＣＭＶ病毒。     

乳胶溶液电镜法在检测植物病毒中的应用

一、介绍乳胶溶液电镜法是植物病毒制剂,特别是未经纯化的粗提液的电镜制样法,在制备电镜样品时,在铜网上加入乳胶稀释液,以提高沾取病毒的数目,提高电镜检测的灵敏度。目前广泛用于检测未纯化植物病毒的电镜制样方法主要是二类——直沾法和免疫电镜法。直沾法出现于五十年代,由于可以简便快速的检测被侵染的植物叶片和粗提液中的     

10种植物病毒的基因芯片检测技术研究

 本研究设计了10种植物病毒和各种对照的探针, 将探针固定在醛基化玻璃片基上制备基因芯片。用常规的Trizol法提取植物总RNA, 根据病毒的外壳蛋白基因或复制酶基因设计特异性引物, 经RT-PCR扩增相应区段并用Cy3-dCTP进行标记。将标记的PCR产物与芯片杂交, 扫描仪对杂交结果扫描, GenePix Pro 4.0软件对杂交图像进行分析。结果表明, 该芯片可以从病毒感染样本中检测到特异性识别信号, 检测灵敏度比RT-PCR高10~100倍, 所以, 基因芯片能对植物病毒作出快速、准确的检测。     

检测植物病毒ELISA异种动物抗体双夹心法的研究和应用

 制备南方菜豆叶花叶病毒、大豆花叶病毒、烟草花叶病毒、番茄不孕病毒、苜蓿花叶病毒的兔抗血清和鼠腹水抗体,组合成ELISA异种动物抗体双夹心试验。抗体球蛋白的适宜工作浓度为4微克/毫升;未经纯化的特异抗血清(抗体)的适宜工作浓度为10^-4(即1/10,000)稀释度。检测以上5种病毒的灵敏度:提纯抗原为10-0.64毫微克/毫升;病叶澄清液为1/10,000-1/100,000稀释度。本法灵敏度与ELISA双抗体夹心法相当或略高。一般8小时内可得出结果。适用于大量样品的检测。     

血清凝胶组织封埋法检测植物叶片内的病毒

 将感染长叶车前花叶病毒的心叶烟叶片和青菜叶片,分别经丙酮处理后封埋于含该病毒抗血清的琼脂糖凝胶内(抗血清4%),过夜后,在凝胶内均出现乳白色沉淀。健叶同样处理,无沉淀发生。该方法不必进行组织研磨、切穴和抗原的化学处理,因而检测程序简化。     

植物病毒分子检测方法概述

植物病毒粒体主要由核酸和蛋白外壳构成,蛋白外壳由许多外壳蛋白(CP)组成. CP和核酸因病毒的不同而异,是检测、鉴定植物病毒的主要依据.广义的植物病毒分子检测方法包括蛋白质检测(或血清学试验)和核酸检测方法,本文分别介绍.     

快速血凝方法检测植物病毒和植物细菌

在寻求一种灵敏度与 ELISA 方法相同,并且能在较短时间内获得结果并适用于RPH 一步法程序的检测方法已在医疗诊断中进行了研究,并将获得成功。此方法也可用于植物病毒的诊断,与 DAS-ELISA 方法相比,达到了相同的灵敏度,大约为0.8～1.5ng/25μl 样品体积。此结果是用分别属于不同组的病毒进行试验取得的。其中有烟草     

A蛋白-金颗粒复合物(pAg)诊断和检测植物病毒的研究

 以A蛋白-金颗粒复合物(Protein A-Gold complexes)标记植物病毒粒体。利用抗原抗体特异性反应和A蛋白与抗体中免疫球蛋白IgG结合的特性,在电镜下观察到同源关系中的金颗粒吸附于病毒粒体周围;而异源关系中,金颗粒则被冲洗掉或随机分布。该法专化性受抗血清稀释度和吸附时间等因素影响。对杆状、线状病毒粒体来说,抗血清最适稀释度为1×10²-10³倍,对球形病毒粒体来说,抗血清稀释度以1.2×10³倍为佳。抗血清吸附时间以3-10分钟的效果最好。     

应用免疫电镜技术检测植物病毒

免疫电镜技术是将免疫学与超微结构形态学相结合的一种新的检验技术。为了把此项新技术迅速应用到植物病毒检疫上去,我们做了一些工作,简报如下:一、抗血清和抗原制备:烟草坏死病毒(TNV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄不孕病毒(TAV)、苜蓿花叶病毒(AMV)、红三叶草坏死花叶病毒(RCNMV)和白三叶草花叶病毒(WCMV)的抗血清由农牧渔业部植检所血清室提供;马铃薯 x 病毒(PVX)和马铃薯 y 病毒(PVY)的抗血清由中国科学院微生物所提供,抗血清效价     

酶联免疫技术检测植物病原真菌

７０年代初期Ｃｌａｒｋ和Ａｄａｍｓ将酶联免疫吸附检测（Ｅｎｚｙｍｅ－ＬｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒ－ｂｅｎｔＡｓｓａｙ,简称ＥＬＩＳＡ）用于植物病毒分析［１］。随着进出口贸易发展,迫切需要一种快速检测农产品中植物有害真菌的方法,常规的形态学分类检测方...