禽法氏囊三肽囊素免疫生物学及其同功能单链抗体研究进展

法氏囊（BF）是禽类特有的免疫器官，为B细胞发育、成熟提供微环境，是免疫球蛋白基因转变场所；其免疫活性物质为三肽囊素（Bursin)；它不仅分布于BF，还存在于胸腺Hassall小体、哈德氏腺、脾脏、BF T细胞区及骨髓；它能诱导家禽和哺乳动物B细胞前体分化；其靶器官是BF，能够拮抗IBD疫苗对BF的损伤，提高ND弱毒疫苗及油苗产生抗体水平；人工合成Bursin作用的靶器官也是BF，可促进BF发育、抗体的产生、维持母源抗体作用。     

囊素三肽的研究进展

囊素是法氏囊提取物中的一种化学组成已被确定的活性因子,具有很强的免疫调节作用。迄今为止对囊素的研究已经取得了很大的进展,为了更好地研究和应用囊素,作者拟对囊素的化学本质、组织定位、生物学活性、制备方法、含量测定、分子生物学研究及其作用机理进行综述。明确目前囊素研究中需要进一步探索的问题和应用前景。     

三肽法氏囊素的制备技术研究进展

囊素是存在于禽腔上囊中的小分子肽类物质,其化学组成为三肽Lys-His-G1y-NH2.大量的研究证实囊素对禽类及哺乳动物具有免疫增强作用,并在疫苗佐剂、饲料添加剂、感染性疾病的辅助治疗、免疫缺陷病、抗肿瘤等方面显示了广阔的应用前景.囊素的大量制备已成为目前研究的热点并已取得很大的进展.这些技术有组织提取法、化学合成法、原核表达法、抗独特型抗体法等.本文对这些技术的原理、方法、优缺点、产物的生物活性等方面的研究进展做一综述.     

三肽囊素分子生物学研究进展

综述了三肽囊素分子生物学方面研究近况。三肽囊素作为一种重要的活性物质，其生物学活性和作用机理得到广泛研究，但有关分子生物学方面研究近几年才开始。     

三肽囊素研究进展及应用前景

三肽囊素是从法氏囊中提取的一种活性因子,其化学成分已被确定．为更好地研究和利用囊素的免疫活性,主要对三肽囊素的化学本质、生物活性、作用机理、分子生物学研究及应用前景进行了的阐述。     

噬菌体展示三肽囊素模拟肽的研究

本研究分离纯化抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2),利用噬菌体环7肽库筛选抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)结合肽,测定阳性克隆ssDNA序列,并与Bursin序列进行同源性分析,通过ELISA法检测其结合活性和竞争ELISA法检测其抗原性,以Busin为对照,验证阳性克隆(№4)在鸡体内的生物学效应.序列分析表明,"LNXT"短肽序列可能为结合抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的保守序列,但与Bursin无同源性;噬菌体(№1)在序列中含有K、H、G.ELISA和竞争ELISA检测,表明Bursin对阳性克隆1、4、5、6号和抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的结合有一定的抑制作用:生物学活性初步验证表明,阳性克隆(№4)与Bursin具有类似作用,能促进抗体产生,有望成为一种模拟Bursin新型的免疫增强剂.     

囊素三肽的基因克隆和表达

以合成的BS1、BS2为引物扩增囊素三肽（BS）8串联片段（BS8）,克隆至pBAD/Thio-TOPO载体,用pBAD/TOPO（R）Thio大肠杆菌表达系统进行表达,含BS8融合蛋白的分子量大小约为19 kD,BS8融合蛋白主要以可溶形式存在.用蛋白质纯化树脂50%Ni-NTA纯化融合蛋白,高纯度的融合蛋白经透析除咪唑、浓缩后,再经胰蛋白酶水解获得大量BS单体.高压液相色谱分析表明,经过DEAE阴离子交换层析,获得纯化的BS单体.     

合成三肽囊素阳性噬菌体模拟七肽的免疫活性初步研究

为探讨三肽囊素(Bursin)模拟七肽的免疫活性及其与Brusin的相关性,本研究根据Bursin阳性噬菌体展示七肽库中筛选得到的氨基酸序列(MTTNLQQ)人工合成该七肽.以ELISA和竞争ELISA检验合成七肽与Bursin在体外的免疫学反应的相关性;比较不同剂量的合成七肽(设定Bursin作为对照)对鸡新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗(La sota株)在鸡体诱导的特异性免疫应答的影响.结果显示合成七肽与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)能够特异性结合并且该结合作用可被Bursin阻断;动物试验的结果表明,低剂量(0.09 mg)的合成七肽对疫苗诱导的体液免疫应答的增强作用与Bursin相当,而且高剂量(0.3 mg)的合成七肽对细胞免疫应答具有一定的增强作用.因此,认为七肽序列MTTNLQQ具有与Bursin类似的免疫活性.     

抗三肽囊素单克隆抗体的制备

为研制抗三肽囊素(bursin,KHG-NH₂)的单克隆抗体,本试验采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA或OVA)定向偶联,分别制备三肽囊素免疫抗原(BSA-KHG-NH₂)和检测抗原(OVA-KHG-NH₂)。以BSA-KHG-NH₂免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选到18株能稳定分泌抗三肽囊素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这18株单克隆抗体与三肽囊素人工抗原的结合均能被三肽囊素、GKHG-NH₂四肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明18株单抗与三肽囊素分子的结合具有高度特异性。以本研究制备的单抗2D2建立间接竞争ELISA方法,检测三肽囊素含量,检测下限为4 ng/mL,线性范围为4~500 ng/mL,加标检测回收率为85.0%~92.4%。     

法氏囊活性肽的研究进展

法氏囊活性肽（囊素）是目前法氏囊组织提取物中唯一一种化学组成已被确定的活性因子，近十年来，对囊素的研究工作取得了很大进展。本文对囊素的生物学活性、组织定位、作用机制及其应用前景进行了综述。     

法氏囊活性肽对新城疫弱毒疫苗免疫效果影响的研究

本研究通过给鸡两次注射法氏囊活性肽后,接种新城疫弱毒疫苗,观察法氏囊活性肽对新城疫弱毒疫苗免疫效果的影响,结果表明：纯化的法氏囊活性肽能够提高新城疫弱毒疫苗所诱导产生的血清抗体水平,试验组比对照组平均高１～２个滴度;使血清母源新城疫抗体水平维持较高水平;促进法氏囊的生长发育,对抗传染性法氏囊弱毒疫苗（ＩＢＤ）对法氏囊的损伤,和（或）促进损伤后的法氏囊的修复,对脾脏的生长发育没有影响。     

法氏囊活性肽在大肠杆菌中的克隆与表达

法氏囊活性肽（Bursin,BS)作为一种免疫增强剂，临床应用广泛，为了大量制备BS，按大肠杆菌惯用密码子合成BS基因。并用色氨酸将5个BS基因串联，克隆于质粒pU57的SmaI位点，经测序证明序列正确后，以PCR扩增，克隆于表达载体pBV220的EcoRI,HinDⅢ位点，温敏诱导表达，其表达水平占全菌总蛋白的13.4%。     

法氏囊活性肽对兔瘟灭活疫苗免疫效果影响的研究

采用超滤浓缩技术制备纯化的鸡法氏囊活性肽（分子量1kDa以下，主要成分为法氏囊活性肽），以不同的剂量肌肉注射45日龄母兔，同时颈部皮下接种兔瘟灭活疫苗，观察法氏囊活性肽对兔瘟疫苗免疫效果的影响。结果表明：纯化的法氏囊活性肽能够加快兔瘟抗体产生的速度，缩短诱生抗体时间，提高抗体水平，延长抗体维持时间。实验期间，4mL法氏囊活性肽组的兔瘟HI抗体水平比对照组平均高2－3个滴度。淋巴细胞转化试验结果表明：禽法氏囊活性肽可以短暂地促进T－淋巴细胞的活化。因此，法氏囊活性肽主要对体液免疫具有增强作用。     

鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测方法的建立

本研究根据GenBank中鸭新城疫病毒(NDV)的F基因和鸭圆环病毒(DuCV)的V1/rep基因的保守序列,各设计一对特异性引物,并对二重PCR的扩增条件进行优化,建立了鸭NDV和DuCV的二重PCR检测方法。对混合样品进行扩增,得到2条大小为493bp(鸭NDV)和218bp(DuCV)的特异性条带,与预扩增片段相符。而对番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭源小鹅瘟病毒、鸭H9亚型流感病毒、鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌等病原检测,结果为阴性。该方法的敏感性试验表明,鸭NDV的核酸最小量为40fg,DuCV为20fg。     

添加微生物植酸酶对中国绍兴麻鸭产蛋性能的影响

试验选用 1 2 0 0只 2 6周龄的中国绍兴麻鸭 ,随机分为 5个处理组 ,每个处理组 2 4 0只鸭 ,分为 4个重复 ,试验期 70天。观测微生物植酸酶替代日粮中部分磷酸氢钙对产蛋鸭生产性能的影响。结果表明 ,添加 3 0 0FTU/Kg植酸酶替代产蛋鸭高峰饲料中 70 %磷酸氢钙时就可保持产蛋鸭的生产性能不变。随着植酸酶添加量的增加 ,产蛋鸭的生产性能越好 ,添加 4 0 0FTU/Kg植酸酶替代产蛋鸭高峰饲料中70 %磷酸氢钙时 ,产蛋率极显著优于对照组 (P <0 .0 1 )。添加 50 0FTU/Kg植酸酶替代产蛋鸭高峰饲料中70 %磷酸氢钙时 ,产蛋率极显著地优于对照组 (P <0 .0 1 )、饲料转化率显著地优于对照组 (P <0 .0 5) ,采食量各组之间差异不显著。由此可见 ,植酸酶可以用于产蛋鸭高峰饲料中 ,且以添加 4 0 0～ 50 0FTU/Kg植酸酶活性单位的饲养效果最好     

河南信阳地区肉种鸭病毒性肝炎防疫状况调查

为了解信阳地区肉种鸭病毒性肝炎防疫情况,应用ELISA方法对信阳地区33家规模化鸭场的1127份血样进行了调查分析。结果显示,鸭肝炎抗体平均合格率为67.0%,低于国家70%的群体合格标准,其中潢川县最高,为74.8%,光山县最低,为53.0%。今后,要加强对肉种鸭病毒性肝炎的免疫,以提高对整个鸭群的保护力。     

鸭副粘病毒强毒株的分离和鉴定

采用鸡胚接种法从安徽凤阳某患病肉鸭群中分离到一株病毒。该素株对鸡红细胞具有凝集性，并可被康复鸭鸭血清和NDV阳性抗血清所抑制，而不能被禽流感标准阳性血清抑制，结合血清中和鸡胚接种试验，病毒回归试验和免疫防治效果的研究结果，确认为鸭副粘病毒。参照国际上规定的新城疫病毒毒力判定的标准及其方法，测定该分离株的鸡胚最小致死量平均死亡时间（MDT），1日龄鸡及脑内接种致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉内接种致病指数（IVPI）分别为48.9h,1.80和2．45。表明该鸭副粘病天线离株具有新城疫病毒（NDV）速发型相类似的毒力，属强毒力毒株，并定名为WF00D株。     

雏鸭感染鸭肝炎病毒后血液中一氧化氮和一氧化氮合酶的变化

用不同毒力株鸭肝炎病毒人工感染雏鸭，测定雏鸭血浆一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）的含量，研究NO在鸭病毒性肝炎发病过程中的作用。结果表明：雏鸭感染不同毒力株鸭肝炎病毒后第1天血浆一氧化氮和一氧化氮合酶含量就开始上升，第3天显著或极显著高于对照组，并持续至实验结束。揭示一氧化氮同雏鸭病毒性肝炎的发生发展过程有关。     

鸭繁殖性状分子遗传研究进展

本文着眼于现代分子数量遗传新技术在鸭遗传育种中的应用前景,对鸭繁殖性状的分子遗传研究进行综述。介绍繁殖相关激素和调节因子的基因研究、与肝脏及卵巢中脂肪酸代谢相关功能基因的研究、与生长发育相关基因的研究等进展情况;同时介绍鸭分子遗传标记的开发和连锁图谱构建等方面的新进展。