苏云金芽胞杆菌SG3-7菌株的鉴定及杀虫活性研究

苏云金芽胞杆菌SG3-7菌株是一株从秦岭山区灌木丛土壤中分离得到的产不规则伴胞晶体的野生菌,本研究对该菌株的伴胞晶体形态、杀虫基因的类型以及杀虫活性等方面进行研究。分析结果表明:SG3-7菌株的内生质粒携带有3个cry基因(cry2Ab、cry4A、cry9Ea),以及1个cyt1Aa型基因。其主要产生130 kDa和60 kDa分子量大小的伴胞晶体蛋白,对鳞翅目的甜菜夜蛾和菜青虫幼虫具有显著的杀虫活性,其LC_(50)分别为29.31μg·mL~(-1)和47.11μg·mL~(-1),但对棉铃虫幼虫无杀虫活性。     

苏云金芽胞杆菌对云斑天牛杀虫活性的体外检测

模拟自然界中云斑天牛Batocera horsfieldi(Hope)成虫的生活状态,建立室内人工饲养及生测方法,对苏云金芽胞杆菌(Bt)的杀虫活性进行测定。将苏云金芽胞杆菌菌悬剂涂抹在野蔷薇枝条表面,饲喂云斑天牛成虫,20 d后统计死亡率、体质量变化及产卵数量。在室内测定了80株苏云金芽胞杆菌的活性,通过1次初筛和2次复筛,筛选到1株对云斑天牛成虫有较高致死率的菌株ZQ-51。该菌株处理云斑天牛成虫后平均死亡率为53.33%,平均体质量减少率和平均产卵减少率分别是5.67%和12.48%,与对照差异均极显著。从感染死亡的成虫肠道中重新分离了该菌株,并验证分离的菌株与ZQ-51具有相似的形态特征和杀虫活性,表明苏云金芽胞杆菌可通过云斑天牛取食进入肠道而发挥杀虫作用。     

棉铃虫对苏云金芽胞杆菌室内抗性初报

经室内10代筛选,棉铃虫对苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520和HD-73伴胞晶体产生了一定水平的抗性,F10代的抗性指数分别为1.30和2.07。从中可以看出棉铃虫对苏云金芽胞杆菌抗性发展的初步规律,即棉铃虫对多基因毒素(YBT-1520ICPs)的抗性发展比对单基因毒素(HD-73ICPs)的抗性发展速度要慢得多。     

苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11定点突变对棉铃虫杀虫活性的影响

为了寻找苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11中对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,通过序列比对,利用PCR方法对Vip3Aa11中7个氨基酸位点进行定点突变,对各突变蛋白杀棉铃虫的生物活性进行测定。结果表明,获得的Vip3Aa11突变体I358V、I362M、K553I、I663T对棉铃虫的杀虫活性明显降低,而突变体I706N对棉铃虫的杀虫活性有所提高,各突变体对胰蛋白酶敏感性基本一致。说明第358位、362位、663位异亮氨酸及553位赖氨酸对Vip3Aa11杀棉铃虫活性有重要影响。     

由苏云金芽胞杆菌胞晶混合物直接提取原毒素的方法

采用室内实验技术,研究了直接从苏云金芽胞杆菌胞晶混合物提取原毒素的方法。胞晶混合物依次用0.5mol·L-1NaCl和无菌去离子水洗涤3次,洗涤后的沉淀物用0.05mol·L-1NaOH 0.1mmol·L-1PMSF溶液溶解10min,10000r·min-1离心15min去除不溶物。上清液以25%乙酸调至pH4.4,得原毒素蛋白沉淀,冷冻干燥。SDS-PAGE电泳扫描结果表明,原毒素分子量为130kDa,在提取过程中没有发生降解。该提取方法具有操作简便、成本低、效率高等优点。     

苏云金芽胞杆菌研究进展

论述了苏云金芽胞杆菌的作用范围、ICPs基因的多样性、杀虫机理、基因工程以及产业化研究的进展情况。     

苏云金芽胞杆菌新菌株的研究

为筛选对昆虫有高力的苏云金芽胞杆菌特异性菌株,从韩国不同地区土壤中筛选出两株对鳞翅目和双翅目昆虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌菌株K9805和K9903,它们分属于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种和鲇泽亚种,形成典型的双金字塔型伴胞晶体,两菌株不但对小菜蛾、甜菜夜蛾具有较高的生命活性,而且对双翅目昆虫致倦库蚊有毒。K9805含有cry IAa,cy IAb,cry IC,cry ID和cry I基因,K9903含有cry IAa,cry IAb,cry IAc,cry IE和cry Ⅱ基因。     

苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白基因资源的研究进展

介绍了苏云金芽胞杆菌的一般特性、分类鉴定与分布以及其杀虫晶体蛋白基因的分类、在苏云金芽胞杆菌中的定位及鉴定方法,并对苏云金芽胞杆菌及其基因资源的应用前景作了展望.     

KNO3提高苏云金芽胞杆菌Bt-8发酵液杀虫活性的作用分析

为明确KNO₃对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt) Bt-8发酵液杀虫活性的增强作用,试验设计不同无机氮源和钾素的发酵配方,测定其发酵液杀虫活性并定量分析毒素蛋白含量。结果表明：添加0.1%KNO₃培养的Bt-8发酵液对小菜蛾3龄幼虫48 h的校正死亡率较对照提高16.7%(P=0.040 2)。添加0.1%不同无机氮培养的Bt-8发酵液对小菜蛾的致死中量LD₅₀与对照无显著差异,且NH⁺₄的添加显著降低Bt-8发酵液杀虫活性。而添加0.1%KCl或KH₂PO₄后,Bt-8发酵液杀虫活性显著上升,LD₅₀分别为0.756和0.732 mL·L^-1。在对照配方中添加不同比例的KH₂PO₄,其发酵液杀虫活性随钾素浓度的增加而增大,0.4%KH₂PO₄培养的Bt-8发酵稀释液...     

离心浓缩对苏云金芽胞杆菌芽胞保留率的影响

用正交试验法研究了苏云金芽胞杆菌发酵液浓缩过程中悬浮液固含量、离心转速和离心时间对苏云金芽胞杆菌芽胞保留率的影响.经方差分析,悬浮液固含量、离心转速和离心时间对芽胞保留率均有显著影响.随着离心转速和离心时间的增加,芽胞保留率呈下降趋势,而悬浮液固含量提高,则芽胞保留率升高.根据正交试验结果确定的使芽胞保留率保持较高水平的浓缩工艺条件是:离心转速3000r·min-1,离心时间5min,悬浮液固含量90g·L-1.     

苏云金芽胞杆菌cry1Aa19基因的克隆、表达及杀虫活性分析

研究根据cry1Aa类基因的全长序列设计全长引物,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株LS-R-21的基因组DNA为模板扩增出片段大小为3 600 bp的cry1Aa的全长基因,与大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pEB相连接获得含有cry1Aa全长基因的重组质粒pEB-cry1Aa,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中,诱导表达出132 ku的蛋白。该蛋白由1 175个氨基酸组成,其分子质量为132.9964 ku。该基因核苷酸序列已在GenBank中登录,登录号为HQ685121,并且被国际基因命名委员会正式命名为cry1Aa19。杀虫活性测定结果表明,cry1Aa对小菜蛾(Plutella xylostella)有很强的杀虫活性,LC50为1.18μg.mL-1。该基因的获得将为害虫抗性研究及高效工程菌的构建提供了重要的试验材料。     

苏云金芽胞杆菌油剂增效因子的筛选

以小菜蛾、棉铃虫为生物测定昆虫 ,通过测定 5种无机盐 (Na2 CO3,K2 CO3,CaCl2 ,MgSO4 ,和MgCl2 )对苏云金芽胞杆菌油剂的增效作用进行增效因子的筛选。结果表明 ,以小菜蛾为供试昆虫 ,除CaCl2 外 ,其余 4种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 10 %MgCl2 效果最好 ,增效比为 1.5 6。以棉铃虫为供试昆虫 ,5种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 12 5 %MgSO4 效果最好 ,增效比为 1.6 9,0 .0 2 5 %的Na2 CO3 次之 ,增效比为 1.5 9     

小菜蛾对苏云金芽胞杆菌的抗药性研究

采用人工饲料感染法监测了我国不同地区小菜蛾田间种群对中国标准品Ｃｓ３ａｂ－１９９１的敏感性。结果表明：广东省深圳、东莞、广州的田间小菜蛾对苏云金芽胞杆菌产生了明显的抗性,最高抗性倍数分别为８．９,６．５,２．１。深圳的抗性小菜蛾种群在无毒条件下饲养,抗性会自然减退,经５代之后抗性消失。     

苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7杀虫晶体蛋白多样性分析

分离自武夷山土壤的苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7菌株对小菜蛾和甜菜夜蛾幼虫有较好的毒杀作用.对该菌株进行了生理生化测定、cry基因的PCR-RFLP检测,以及通过SDS-PAGE检测晶体蛋白,并对蛋白点进行肽段指纹图谱鉴定.结果表明该菌株含有cry1Aa、cry1 Ba、cry1 Ia、cry2Ab、cry2Ac、cr...     

苏云金芽胞杆菌剂型研究进展

苏云金芽胞杆菌是目前世界上应用最广的微生物杀虫剂,剂型加工与药效发挥有直接关系.综述了近十年来国内外剂型的研究进展.     

苏云金芽胞杆菌CT—43的芽胞萌发及芽胞和伴胞晶体的形成

在电镜下观察了苏云金芽胞杆菌菌株ＣＴ－４３的芽胞萌发、芽胞和伴胞晶体的形成过程。芽胞萌发分活化、萌动和脱出３个阶段。芽胞形成分为轴丝形成、前芽胞隔膜形成、前芽胞形成、初生细胞壁形成．芽胞外套形成、芽胞衣片层形成和芽胞形成７个阶段。伴胞晶体形成从芽胞形成第２阶段开始，由一些小结晶聚集而成。晶体镶嵌在菌株ＣＴ－４３中很普遍。结合实验对伴胞晶体形成的调控和外膜的形成等进行了讨论。     

苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白Vip3A研究进展

营养期杀虫蛋白(Vegetative Insecticidal Proteins,VIP)Vip3A是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thurigiensis,Bt)在营养生长对数中期开始分泌的一类杀虫蛋白,其广泛存在于Bt菌中,现已发现8类37种,在遗传上比较保守。与杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs)相比,Vip3A蛋白具有热不稳定性,其杀虫机理与ICPs也不同,并且Vip3A蛋白与不同Bt杀虫晶体蛋白具有协同增效作用,这为筛选新的杀虫基因、构建特异高毒力工程菌和转基因抗虫植物以及杀虫分子机理等基础研究提供了新的思路。     

苏云金芽胞杆菌杀虫原粉对铬离子吸附热力学研究

通过静态吸附试验,研究了苏云金芽胞杆菌原粉对水溶液中铬离子(Cr6 )的吸附热力学特性。铬离子初浓度依次为50、100、150、200、250、300、400、500mg·L~(-1),菌体浓度固定为1g·L~(-1),pH值为2,分别在5℃、20℃、35℃、50℃条件下进行等温吸附,采用Freundlich方程和Langmuir方程进行拟合。结果显示,苏云金芽胞杆菌原粉对铬离子的吸附符合Langmuir(r>0.979)方程和Freundlich(r>0.977)方程。吸附焓△H为1.39￣2.33kJ·mol~(-1),吸附自由能ΔG为-3.75￣-2.84kJ·mol-1,吸附熵ΔS为15.2￣18.8J·mol~(-1)。苏云金芽胞杆菌原粉对铬离子的吸附是吸热过程,吸附能够自发进行。     

苏云金芽胞杆菌对淀粉塑料膜降解的促进作用

苏云金芽胞杆菌菌粉,玉米淀粉与线性低密度乙烯共混制得淀粉塑料,通过地理降解和摇床快速降解试验研究了淀粉塑料中淀粉的降解率。结果发现地理降解１２０ｄ后含５％菌粉和５０％淀粉的薄膜淀粉降解率达到８９．５２％,扫描电镜观察大部分淀粉颗粒破碎,出现许多小孔。不加菌粉的淀粉降解率只３５．４８％,表明添加的菌粉对淀粉降解有的促进作用。     

苏云金芽胞杆菌晶体毒素对体外培养的日本血吸虫成虫的毒力

将人工感染日本血吸虫尾蚴４５ｄ的家兔主动脉灌注冲虫获得成虫,经Ｅａｒｌｅ′ｓ液洗涤,加入细胞培养板内,用含１０％牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养液于３７℃、５％ＣＯ２培养箱中培养,苏云金杆菌Ｂ－００１、Ｅ－００２提取的伴胞晶体毒素,以不同浓度加入到各孔中。２４ｈ后成虫运动缓慢,并有部分死亡,随着伴胞晶体毒素作用时间的延长,成虫的死亡率也增加。当毒素总蛋白含量为１１７．２９μｇ／ｍｌ时,经菌株Ｂ－００１晶体毒素作用的成虫死亡率在２４ｈ时为８７．７４％,４８ｈ时为１００％,ＬＤ５０分别为２１．４２μｇ／ｍｌ、９．７７μｇ／ｍｌ;经菌株Ｅ－００２晶体毒素作用的成虫死亡率在２４ｈ时为８６．１８％,在４８ｈ时为１００％,ＬＤ５０分别为３３．１６μｇ／ｍｌ、１３．１９μｇ／ｍｌ。这表明两种苏云金杆菌晶体毒素均对血吸虫成虫有杀