鱼腥草愈伤组织诱导及褐化抑制的研究

以鱼腥草叶片为外植体,比较不同植物生长调节剂、抗褐化剂和光照条件对愈伤诱导率及褐化率的影响.结果表明,MS+6-BA 0.5 mg·L-1+2,4-D 1.0 mg·L-1有利于鱼腥草愈伤组织的诱导;抗坏血酸(Vc)、聚乙烯吡哆烷酮(PVP)对抑制外植体褐变均有作用,其中,PVP效果最佳,最适浓度为2 g·L-1.光照条件对鱼腥草褐变的影响较大,培养初期暗培养,能显著地抑制外植体的褐变.     

库拉索芦荟组织培养褐化现象的抑制研究

褐化是芦荟组织培养中的普遍现象,严重影响组织培养的效果。以库拉索芦荟的茎段和叶片为外植体,研究了5种防褐剂活性炭、硝酸银、维生素C、L-谷氨酰胺和聚乙烯吡咯烷酮对愈伤组织诱导中褐化现象的抑制作用。结果表明,5种防褐剂都具有抑制外植体褐化的作用,其中15mg/L的AgNO3是最合适的防褐剂,其外植体褐化程度最轻,愈伤组织诱导率较高且愈伤组织生长良好。     

香港四照花外植体的抗褐化处理与诱导培养

以香港四照花Dendrobenthamia hongkongensis嫩叶、茎段和带芽茎段为外植体,研究外植体类型、消毒时间、基本培养基、预处理方法、抗褐化剂种类及质量浓度对香港四照花褐化的影响以及6-苄基腺膘呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）和2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）对3种外植体诱导培养的影响。结果表明:香港四照花外植体的最佳消毒时间为1.0 g·L-1氯化汞消毒5 min;最适基本培养基为木本植物用培养基（woody plant medium,WPM）;用1.0 g·L-1聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浸泡3.0 h,3种外植体褐化率明显下降;1.0 g·L-1柠檬酸（CA）是嫩叶的最佳抗褐化剂,褐化率为27.4%;2.0 g·L-1 PVP为茎段和带芽茎段的最佳抗褐化剂,其褐化率分别为13.3%和16.7%;嫩芽的最佳愈伤组织诱导培养基为WPM+1.0 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-12,4-D;茎段和带芽茎段最佳诱导培养基均为WPM+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1 2,4-D。     

兔眼蓝莓组织培养过程中褐化与生根问题的探讨

以兔眼蓝莓茎尖和茎段形成的愈伤组织和长期继代培养的试管苗为材料,接种于改良的WPM和1/2WPM的培养基中,研究活性炭与Vc液对兔眼蓝莓外植体和愈伤组织形成中褐化的影响以及外源体、活性炭对无根苗瓶内生根的影响。结果表明,当培养基中加入Vc液并含100～200 mg·L-1的活性炭时,能有效防止外植体褐化的发生;当培养基中加入Vc液并含200～500 mg·L-1活性碳时,可有效防止愈伤组织褐化发生。蓝莓继代培养试管苗在1/2 WPM的培养基中添加0.2 mg·L-1IBA,并含100～200 mg·L-1活性炭时生根情况最为理想,经过7 d暗培养,30 d后生根率高达87.8%。     

福建柏愈伤组织诱导与抗褐化研究

【目的】比较不同抗褐化剂减轻福建柏组织培养过程中褐化现象的效果,以提高福建柏愈伤组织培养的增殖分化能力。【方法】以福建柏鳞叶和茎段为外植体,通过单因素试验,研究0.0～2.5 mg/L NAA和2,4 D及0.0～3.0 mg/L IBA对愈伤组织诱导率与生长状态的影响;以福建柏茎段为外植体,采用单因素和多因素组合试验,研究100～2 000 mg/L聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）、100～1 000 mg/L活性炭（AC）和V_C以及不同质量浓度VC与AC组合,对愈伤组织污染率、死亡或褐化率及诱导率的影响;以诱导的愈伤组织为材料,采用单因素试验,研究100～1 000 mg/L PVPP、100～300 mg/L V_C、200～1 000 mg/L AC、30～100 mg/L V_B对愈伤组织增殖生长量、增殖率、褐化率及PPO、POD活性的影响。【结果】① 不同质量浓度NAA、2,4-D和IBA对福建柏鳞叶愈伤组织的诱导率总体高于茎段,各生长素对福建柏鳞叶和茎段愈伤组织的诱导率均表现为NAA＞IBA＞2,4-D,所有处理中以1.0 mg/L NAA对福建柏鳞叶愈伤组织的诱导率最高,为83.33%;以0.5 mg/L NAA对茎段愈伤组织的诱导率最高,为61.11%;愈伤组织生长状态和抗褐化效果优劣依次为NAA、2,4-D、IBA。②仅100 mg/L V_C+200 mg/L AC处理的愈伤组织污染率低于不添加抗褐化剂的对照;死亡或褐化率仅500 mg/L PVPP处理与对照相同,均为0.00%,其余处理均高于对照;诱导率则以不同质量浓度PVPP、1 000 mg/L VC、100 mg/L V_C＋200 mg/L AC处理与对照相当或高于对照,其余处理均低于对照;愈伤组织生长状态总体以PVPP处理表现最优。③仅300 mg/L PVPP、200和400 mg/L AC处理的愈伤组织增殖率高于对照,增殖生长量仅100和200 mg/L PVPP、100 mg/L V_C、200 mg/L AC处理高于对照;所有处理中以200 mg/L AC处理的愈伤组织增殖率和增殖生长量最高,分别为70.00%和10.07 g;各抗褐化剂对福建柏愈伤组织增殖效果的优劣依次为PVPP、AC、V_C、V_B。④不同抗褐化剂处理的愈伤组织褐变率均呈先增加后趋于稳定的变化趋势,但变化幅度存在显著差异;各抗褐化剂的抗褐化效果优劣依次为AC、PVPP、V_C、V_B。⑤不同质量浓度PVPP、V_C、AC处理对福建柏愈伤组织PPO和POD活性的影响具有显著差异,但各处理PPO活性均与对照无显著差异,POD活性以500 mg/L AC处理显著高于其他处理。【结论】在福建柏愈伤组织诱导阶段,愈伤组织的褐化与生长素种类有关,生长素NAA、2,4-D适用于福建柏愈伤组织的诱导,IBA诱导的愈伤组织容易褐化,添加适量抗褐化剂能减少愈伤组织的褐化情况。在愈伤组织增殖培养阶段,适宜质量浓度的PVPP、AC作为抗褐化剂能有效减缓福建柏愈伤组织的褐化进程,保持愈伤组织的正常增殖生长,但高质量浓度的抗褐化剂会抑制愈伤组织的生长。     

培养基添加物对马铃薯花药褐化及愈伤诱导的影响

试验以Vangal、波C、讷16、春薯4号和内薯7号5个马铃薯品种(系)为材料,研究不同培养基添加物硝酸银、活性炭、马铃薯提取液对马铃薯花药培养的褐化率和愈伤诱导率的影响。结果表明,培养基中加入20mg·L-1硝酸银、0.5g·L-1活性炭和50g·L-1马铃薯提取液能够提高马铃薯花药愈伤诱导率,同时褐化率明显降低。     

乌头愈伤组织诱导中抗褐化剂的筛选

以乌头的叶片为外植体,在愈伤组织的诱导阶段,以低无机盐浓度1/2MS为基本培养基,加入KT 1mg/L、2,4-D 1mg/L、NAA0.1mg/L,考察了不同浓度配比的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、AC(活性碳)、Vc(维生素C)对乌头愈伤组织诱导的作用效果及褐化率。结果表明,0.04%的PVP在乌头愈伤组织诱导阶段为最佳抗褐化剂。     

降低皂质芦荟诱导愈伤组织褐化的初步研究

对降低皂质芦荟诱导愈伤组织褐化情况的研究表明,外植体接种前进行预处理对控制诱导愈伤组织的褐化有一定的帮助。其中,以在PVP(2 g/L)溶液中浸泡15 m in的效果最为显著;暗培养能显著减轻褐化的发生,有利于愈伤组织的生长;培养基中附加抗氧化剂和吸附剂对愈伤组织的褐化有不同的作用效果,抗氧化剂要优于吸附剂。以收获愈伤鲜重为基础,考察其抗褐化能力为:L-谷氨酰胺(5 mg/L)>AgNO3(15 mg/L)>Vc(2 mg/L)>PVP(0.5 mg/L)>柠檬酸(5 mg/L)>Na2S2O3(10 mg/L)>空白>活性炭(10 mg/L)。     

不同外源激素对胀果甘草愈伤组织诱导及褐化的影响

以胀果甘草下胚轴、子叶为外植体,以MS为基本培养基,研究了不同激素浓度配比对胀果甘草愈伤组织诱导率和褐化率的影响.结果表明:不同浓度的6-BA、2,4-D以及6-BA、NAA组合下的子叶、下胚轴愈伤组织诱导率及褐化率均具有极显著差异;NAA对子叶愈伤组织的诱导效果好于2,4-D,较高浓度的6-BA、NAA及较低浓度的6-BA、2,4-D更易导致下胚轴、子叶愈伤组织的褐化;供试范围内胀果甘草下胚轴和子叶愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+1.5mg·L-1NAA+0.5mg·L-16-BA和MS+2.5mg·L-1NAA+0.5mg·L-16-BA.     

不同防褐剂对烟草愈伤组织培养褐化现象的抑制效应

为了解决烟草愈伤组织继代培养中的褐化现象,研究了不同浓度的PVP和柠檬酸对烟草愈伤组织褐化的抑制效果。结果表明:在愈伤组织的继代培养中,PVP对愈伤组织褐化抑制效果最好的浓度是2g/L,褐化率为35%;柠檬酸对愈伤组织褐化抑制效果最好的浓度是8mg/L,褐化率为25%;在愈伤组织继代培养中可以用8mg/L柠檬酸抑制外植体的褐化。     

金钱树愈伤组织的诱导及其褐化的防止

试验结果表明,采用培养基MS+NAA1mg/L+6-BA2mg/L,对金钱树的老熟叶片进行培养,35天后其愈伤组织的诱导率高达80%。在继代培养中,采用液体培养对防止愈伤组织的褐化效果最佳,在培养基中添加1g/L的活性炭,采用N6培养基而不用MS培养基,对防止愈伤组织的褐化也有较好的效果。     

马尾树愈伤组织的诱导与褐化控制研究

[目的]为保护和开发利用马尾树资源提供科学的理论依据。[方法]以MS为基本培养基,用IBA和6-BA以及不同浓度配比的抗褐化剂AC、VC和Na2S2O3诱导马尾树愈伤组织。[结果]在诱导过程中马尾树愈伤组织的褐化现象很突出,接种几小时后外植体周围即出现褐化物质。以冬芽和春芽为外植体时,这些抗褐化剂均不起作用。以嫩叶为外植体时,抗褐化剂AC起显著作用。3种抗褐化剂组合使用时,仅AC的作用显著,而VC和Na2S2O3的作用不显著。仅在以嫩叶为外植体的培养中诱导出了愈伤组织。MS+IBA 1.5mg/L+6-BA2.5 mg/L+AC3.0 g/L最适于马尾树嫩叶愈伤组织的诱导。[结论]马尾树的嫩叶可用于诱导愈伤组织,这为马尾树的细胞培养奠定了基础。     

降低沙棘组培过程中外植体褐化的研究

为了解沙棘组培过程中影响外植体褐变的相关因子,本试验通过对沙棘组织培养中外植体取材时间、品种、不同的激素及浓度、以及活性炭加入的量等影响外植体褐化因子进行研究.结果表明,以春季休眠芽为外植体获得的沙棘组培苗防褐化效果较好,品种比较结果均显示橙色褐化较重,阿列伊,向阳,优胜褐化较轻,用1/2MS+BA3.0 mg·L-1+IAA0.5 mg·L-1+活性炭1.5 g·L-1的培养基培养可以降低褐化率,使沙棘组培获得成功.     

3种抗氧化剂对青钱柳愈伤组织褐化的影响

褐变是导致青钱柳组织培养失败的主要原因之一。研究维生素C(VC)、植酸(PA)和柠檬酸(CA)3种抗氧化剂对青钱柳愈伤组织生长、褐化及其生理生化特性的影响。结果表明,适当浓度的抗氧化剂处理能有效抑制愈伤组织褐化率,促进愈伤组织生长,抑制培养过程中细胞质膜透性的增加。其中VC的处理效果较为明显,PA其次;最适浓度分别为VC 100 mg·L-1、PA 250 mg·L-1和CA 50~100 mg·L-1。VC 100 mg·L-1处理的愈伤组织鲜重增长率比对照增加73.88%,褐化率和细胞膜透性分别比对照低56.52%和45.75%,均达到显著或极显著水平。适当浓度的抗氧化剂使苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性在一定程度上受到抑制,但对多酚氧化酶(PPO)活性的抑制作用总体上不明显。总之,适当浓度的3种抗氧化剂处理能有效降低青钱柳愈伤组织褐化及其产生的伤害,促进生长,对PPO活性的调控可能不是其控制褐化的主要方式,有关机制尚待进一步探讨。     

茶条槭组织培养防止外植体褐化的方法研究

为探索克服茶条槭在组培过程中外植体褐化的最佳方法,以茶条槭当年生萌条为试材,进行了不同外植体类型、不同消毒方式、不同取材时间和不同抗褐化剂对茶条槭初代培养过程中外植体褐化的影响试验。结果表明,采用当年生萌条进行组织培养,其茎段较茎尖褐化严重;先将外植体用1 000 mg/L VC溶液处理30 min,再用0.1%升汞溶液消毒为最佳消毒方法;外植体取材时间在5月,其组培污染率、褐变率、死亡率相对较低;在一定浓度范围内,聚乙烯吡咯烷酮(PVP)200 mg/L与活性炭(AC)2 g/L配合使用防褐化效果较好;初代培养时,先弱光培养7 d再转入光照培养,有利于抑制褐变的发生。由此说明,选用幼嫩的顶芽为外植体、浓度0.1%升汞溶液为消毒剂、MS为基本培养基、添加聚乙烯吡咯烷酮200 mg/L和活性炭2 g/L进行初代培养,防止其褐化的效果最佳。     

君子兰花丝离体培养影响因素研究

以君子兰(Clivia miniata Regel.)品种油匠的花丝为外植体进行离体培养,结果表明:君子兰花丝离体培养能通过愈伤组织和直接再生不定芽两条途径成苗.适宜花丝愈伤组织诱导与分化的花蕾长度为0.6～1.0 cm;培养基中加入活性炭加速了外植体的褐化,对花丝诱导和分化不利;暗培养和接种前4℃低温预处理明显降低了外植体的诱导率和分化率,在花丝离体培养中不宜采用;花丝诱导和分化的最佳培养基为MS+BA2.0mg·L-1+NAA3.0mg·L-1+IBA1.0mg·L-1,诱导率与分化率分别为16.3%和50.0%.     

几种防褐剂对马铃薯愈伤组织培养褐化现象的抑制效应

[目的]在马铃薯的组织培养过程中存在着严重的外植体褐化现象。外植体表面的酚类物质容易氧化而生成褐色醌类,严重影响愈伤组织的诱导过程,适当控制培养条件可抑制褐化。[方法]选取硫代硫酸钠（Na2S2O3）、活性炭、维生素c、柠檬酸、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）5种抗褐剂进行防褐化效果的研究。每种抗褐剂都取不同的浓度进行平行试验。培养基为1／2MS＋0．3％琼脂＋1．5％蔗糖＋1．0mg／LNAA＋2．0mg／L2,4-D,于15℃下暗培养,每周转瓶1次。最后,统计褐化率,比较不同抗褐剂的作用效果。[结果]各种抗褐剂对马铃薯的生长均有一定的抗褐效果,其中,2．0g／L的硫代硫酸钠和8．0mg／L柠檬酸的防褐效果最好,可以将褐化率降低到15％以下。[结论]对生长的外植体添加一定的防褐剂有助于抑制组织培养中外植体的褐化现象。     

南方红豆杉愈伤组织诱导和继代培养体系的建立

以南方红豆杉为材料,建立了其愈伤组织诱导与保持的技术体系,主要为:(1)南方红豆杉侧芽是诱导愈伤组织的最佳外植体;(2)南方红豆杉愈伤组织诱导的最佳培养基为:B5+2.0 mg.L-12,4-D+1.0 mg.L-1NAA+0.2 mg.L-1IAA;(3)南方红豆杉愈伤组织增殖的培养基为:B5+4.0 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-12,4-D+0.2 mg.L-1GA+500 mg.L-1AC+2000 mg.L-1LH.并在培养基中同时添加AC、LH和GA33种抗褐物质,取得较好的抗褐化效果.     

喜树愈伤组织诱导与抑制褐化的研究

[目的]筛选喜树外植体的最佳诱导培养基,研究抑制外植体及继代愈伤组织褐化的方法。[方法]以喜树的幼叶和种胚作为外植体,通过测定过氧化物酶和多酚氧化酶的活性,从外植体选择、培养基种类、激素配比、添加物的处理等方面进行愈伤组织的诱导和抑制外植体及继代愈伤组织褐化的研究。[结果]幼叶外植体的最佳诱导培养基为:SH+NAA2.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA0.25mg/L;种胚外植体的最佳诱导培养基为:MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L。抑制幼叶外植体褐化的方法为:增加外植体大小,吹干培养基表面水分。抑制愈伤组织继代培养褐化的方法为:最佳诱导培养基附加30mg/L抗坏血酸和5g/L活性碳;1次继代后,将质地致密的愈伤组织转移到MS培养基上培养。[结论]该研究为喜树的遗传转化和植株再生提供理论基础。     

三叶木通愈伤诱导及分化研究

三叶木通（Akebia trifoliate (Thunb.) Koidz.）具有很高的开发应用价值,其优良品系组织培养快繁体系的建立尤为重要。以三叶木通幼嫩枝条及叶片作为外植体,研究了三叶木通无菌外植体获得、愈伤诱导以及胚状体诱导等过程,同时分析了抑制愈伤组织褐化的影响因素。结果表明：外植体经75%乙醇处理1 min,0.1%升汞灭菌12 min,再经无菌水浸泡处理3 min后,接种至MS+NAA 0.4 mg·L-1+2,4 D 4.0 mg·L-1+活性炭1.0 g·L-1+蔗糖30.0 g·L-1 +琼脂6.0 g·L-1培养基中,避光培养可得到愈伤组织,并能有效抑制愈伤组织褐化。愈伤组织接种至MS+NAA 0.4 mg·L-1+6 BA 2.0 mg·L-1+蔗糖30.0 g·L-1 +琼脂6.0 g·L-1的培养基中可得到胚状体,然后接种至无激素的MS培养基中,可以得到种苗。