马立克氏病病毒编码的vIL8与鸡IL8(cIL8)的抗原相关性初步研究

vIL8是马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)编码的一种病毒源性趋化因子;cIL8(鸡IL8)是鸡重要的抗病毒趋化因子。为研究vIL8与cIL8的相互关系,进而深入探索vIL8在MDV致病中的作用,本研究首先用生物信息学方法对vIL8与cIL8的氨基酸序列进行对比和分析;然后原核表达cIL8,利用SDS电泳分离原核表达的cIL8融合蛋白,并切取目的条带免疫小鼠制备抗cIL8血清,将昆虫细胞表达的vIL8与该抗血清进行免疫荧光反应。结果显示,vIL8与cIL8在结构上均为典型的CXC趋化因子,有类似的受体结合关键氨基酸;荧光试验初步证明,vIL8与cIL8有交叉反应性,两者有共同的抗原表位。结果提示,vIL8与cIL8有相似的抗原性,可能有相同的受体。vIL8的这一特点对于病毒的免疫逃避意义重大。     

马立克氏病病毒类白细胞介素8(vIL-8)基因的克隆和表达

用马立克氏病痛毒(MDV)感染鸡胚成纤维细(CEF)，提取总RNA，经RT—PCR扩增出由MDV编码的病毒类白细胞介素-8(vIL-8)基因，并将其克隆进pGEM—Teasy载体中，测序进行分析。将vIL-8基因片段插入表达性载体pGEX-5x-3中，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导。结果获得了重组vIL-8-GST融合蛋白的表达。表达产物活性分析表明，vIL-8基因重组产物具有趋化鸡外周血淋巴细胞的活性。提示，MDV在致瘤过程中，vIL-8能吸引易感细胞促进病毒感染，并可能参与肿瘤的扩散和发展。     

不同毒力马立克氏病病毒毒株的vlL8表达水平分析

为研究马立克氏病毒(MDV)编码的vlL8与病毒毒力的相关性,本研究用等剂量的3个不同毒力的MDV毒株(CVI988/Rispens株、GA株和RBIB株)对1日龄SPF雏鸡进行接种,接种后第4 d、7 d和10 d分别采集雏鸡的脾脏组织,提取总RNA.以鸡β-actin作为内参基因,用半定量RT-PCR法测定MDV vIL8和MDV gB 基因在接种后不同时间的表达情况,进而分析vIL8的表达量与病毒毒力的关系.结果显示:不同病毒株感染后检测的不同时间均有vIL8和gB的表达,vIL8的相对表达量大于0.25,gB大于0.17;vIL8表达量与病毒毒力呈正相关,毒力越强,vlL8表达量越高,这种现象在病毒接种后的4 d和10 d较为明显;在各个不同时期,vIL8的mRNA表达量均要比gB表达量高.结果表明,vIL8与MDV毒力有一定相关性,参与MDV-1的致病过程.     

马立克氏病病毒的蛋白和疫苗研究进展

马立克氏病是严重危害养鸡业的重要传染病之一,对该病的研究可为肿瘤病的研究提供理想模型,本文从病毒编码的蛋白出发,重点介绍了病毒的酶类、抗原的研究进行及其在预防马立克氏病上的应用,提出利用载体构建重组疫苗对今后防制马立克氏病具有广阔的应用前景。     

马立克氏病病毒的分子生物学研究进展

马立克氏病病毒（MarekDiseaseVirus，MDV）主要侵害鸡性腺、神经、肌肉、虹膜及各内脏器官，引起单个或多个组织器官的淋巴细胞增生和单核细胞浸润。MDV所引起的疾病──马立克氏病是危害世界养禽业最严重的传染病之一，也是世界上第一个用疫苗预防的病毒性肿瘤获得成功的范例。MDV属于疮疹病毒科（Herpesviridae），又称鸡疮疹病毒2型（AvianherPesvirus2）、神经淋巴瘤病毒（Neurolymphomatosisvirus）、鸡麻痹病毒（Fowlparal－ysisvirus）。根据血清学反应不同，可将MDV相关的疤疹病毒划分为3个不同的血清型：血清1型包括引起…     

马立克氏病病毒体内复制动力学研究进展

马立克氏病病毒(MDV)在体内的复制情况与其毒力有密切关系.一般情况下,MDV毒株的毒力越强,其在宿主体内的病毒载量就越高.MDV在宿主体内的复制动力学涉及多方面的因素,其中主要包括有:MDV的组织嗜性及毒力、宿主的免疫情况及马立克氏病(MD)遗传抗性、MDV的基因组特点等多方面因素,这些因素都会影响到MDV在宿主体内的复制情况.本文就MDV在鸡体内各个组织器官复制动力学及其相关影响因素的最新研究进展进行综述.     

马立克氏病的研究进展

鸡马立克氏病（Marek’sDisease,MD）是由马立克病毒引起鸡的一种淋巴组织增生性疾病。以病鸡的外周神经、性腺、虹膜、各种内脏器官、肌肉和皮肤发生单核细胞浸润、形成淋巴肿瘤为特征。本病传播速度快,传播面积广,潜伏期长（1～6个月不等）。患急性内脏型鸡马立克氏病的鸡群淘汰及死亡率高达8％～30％,严重发病的鸡群可造成全群覆灭,OIE将其列为B类疫病。     

Pathogenesis of a Marek's disease virus mutant lacking vIL-8 in resistant and susceptible chickens

A homologue of interleukin-8, viral interleukin-8 (vIL-8) has been identified in the genome of Marek's disease virus (MDV). This protein attracts peripheral blood mononuclear cells in vitro although its role in the pathogenesis of Marek's disease (MD) is not known. P chickens, genetically susceptible to MD, and N chickens, genetically resistant to the disease, were inoculated with either RB1B MDVor RB1BvIL-8smGFP, a vIL8 knockout RB1B MDV, to assess the role of vIL8 in the pathogenesis of MD. The tumor incidence was highest in the P birds given the RBIB virus, where the incidence was 100%. Tumor incidence in N birds given RB1B was 41.5%. Thirty-one percent of the P birds given RB1BvIL-8smGFP developed tumors, and no N bird given RB1BvIL-8smGFP developed tumors. Histologically, the tumors from RB1B-inoculated birds were larger and more invasive and had a more homogeneous cellular composition than those from RB1BvIL-8smGFP-inoculated birds, which were best described as microtumors. These microtumors did not obliterate the normal architecture of the tissues, and in contrast to the RBIB tumors, moderate numbers of heterophils were admixed with the proliferating lymphocytes. Susceptible birds receiving RB1B had the highest viral titers throughout the study, followed by the resistant birds inoculated with RB1B. P and N birds receiving RB1BvIL-8smGFP virus had consistently lower levels of viremia than their RB1B-inoculated counterparts although virus could be recovered from the birds during all stages of MD. In addition, the RB1BvIL-8smGFP virus was detected in birds held in contact with the inoculated group, although no tumors developed in contact control birds. This result indicates that RB1BvIL-8smGFP replicates in vivo but not as well as RB1B and that vIL8 is not essential for the completion of the pathogenesis of MD.     

胸腺外CD4和CD8双阳性T细胞的研究概述

胸腺依赖性细胞即 T细胞具有多种重要的免疫功能 ,不同的免疫功能与其细胞膜上的分化抗原 (CD)的种类相关联。其中 CD4和 CD8是关键的分化抗原。 CD4分子是单链糖蛋白 ,是自身主要组织相容性复合体 (MHC) 类抗原的受体。研究表明 ,其功能性分子可能是低聚体 [1 ] 。CD8分子也是糖蛋白 ,包含α链和β链 ,是 MHC 类抗原的受体。 CD4和 CD8与相应 MHC抗原结合是 T细胞在胸腺外发挥免疫功能的生化基础 ,也与 T细胞在胸腺微环境中的分化有关。来自骨髓的前 T细胞表面无任何 CD标志 ,在胸腺微环境中先后表达CD2、CD7、CD3抗原和 T…     

布鲁氏菌病VirB8-PCR诊断试剂盒的特异性评价

使用VirB8-PCR诊断试剂盒对布鲁氏菌标准株、疫苗株及新疆分离株共7株布鲁氏菌的VirB8基因序列扩增、克隆并与Genbank中发表的VirB8基因序列(AF226278)进行比较和分析,发现:该基因非常保守,7株布鲁氏菌的同源性在99.2%以上,其中A菌与Rev1基因序列100%同源,B菌与Genbank发表的基因序列100%同源;牛种(544A、A19)和羊种(M5、Rev1)分别各自在相同部位发生了相同的碱基突变,因此VirB8基因有可能做为布鲁氏菌疫苗菌的鉴定分类基因。VirB8基因在布鲁氏菌中高度保守,可作为布鲁氏菌检测模板,VirB8-PCR诊断试剂盒特异、敏感,检测结果可靠。     

H10N8亚型禽流感病毒的研究进展

中国于2013年底首次发现H10N8亚型禽流感病毒（AIV）能感染人并致死的病例,而在此之前从未有过关于H10N8亚型病毒能感染人的报道,目前也未在其他国家监测到H10N8亚型AIV感染人的病例。与H7N9亚型AIV相似,H10N8亚型AIV在家禽中致病性很弱,可一旦感染人能表现出很强的致病性。感染了H10N8亚型AIV的患者病情恶化快、死亡率高、对人的健康危害很大,但至今尚无有效的防制手段。目前还不太清楚H10N8亚型AIV是通过何种途径传播给人的,今后H10N8亚型AIV是否会在人群中引发新的疫情暴发是人们普遍关心的问题。文章简要介绍了H10N8亚型AIV的特点及研究现状。     

肉用绵羊2号染色体GDF8区域4种微卫星标记多态性研究

选择了2号染色体GDF8区域可能与生产性能相关性较大的4个高度多态微卫星基因座 （BM81124，TEXAN2，FCB128，BMS1591），分析这些位点在 Dorset、Suffolk和Texel 3个肉羊品种的多态分布情况。结果表明，这4个微卫星标记在3个绵羊品种中的等位基因数分别为:10、12、7、11，其多态信息含量/杂合度分别为:0.7778/0.8045、0.712/0.7520、0.7551/0.7852、0.8057/0.8289，可见这些微卫星位点在3个绵羊品种中具有比较丰富的多态性。因此它们可以作为进行生产性状与标记间连锁分析的遗传标记，用于进一步的QTL定位研究。     

三种中药复方制剂对鸡MD的影响及其机制的研究

文章应用筛选的三种中药复方制剂,通过拌料给药,采集MDV感染鸡不同时期的血液及组织样本,进行了血液生化指标、免疫指标、机体抗氧化能力等检测分析。结果表明:三种复方制剂能通过在一定程度上提高机体的抗氧化能力、提高机体免疫力和降低端粒酶活性,抗MDV感染的作用效果,其中复方制剂1作用效果更为显著,本研究结果为开发在畜牧生产中具有应用前景的无药物残留的中药抗病毒制剂,提供参考依据。     

鸡白介素8的克隆表达及其生物趋化性研究

鸡白介素8(cIL8)是9E3/CEF4基因编码的一种诱导型趋化因子。用RT-PCR方法,从鸡胚胚体总RNA模板中扩增cIL8的cDNA序列,测序后,将cIL8基因分别克隆入pGEX-6p-1载体和pFastBacI载体进行表达。利用SDS电泳分离原核表达的cIL8融合蛋白,制备鼠抗cIL8血清,并与昆虫细胞表达的cIL8进行免疫荧光(IFA)反应,同时对雏鸡外周血单个核细胞(PBMC)进行生物趋化试验。结果成功扩增了cIL8基因的cDNA序列,在大肠杆菌和昆虫细胞中均能表达,制备的鼠抗cIL8血清能与昆虫细胞表达的cIL8反应。重组cIL8在一定浓度范围内,可使PBMC发生趋化作用,最高趋化指数为4.38±0.49,且是典型剂量依赖的钟形趋化性反应曲线。本研究结果为cIL8的功能研究和探讨马立克氏病病毒类白介素8(vIL8)的生物学作用奠定了基础。     

A Marek's disease virus vIL-8 deletion mutant has attenuated virulence and confers protection against challenge with a very virulent plus strain

Marek's disease virus (MDV) is an alpha-herpesvirus that causes rapid development of T-cell lymphomas in chickens. MDV-encoded vIL-8 is homologous to the cellular IL-8 gene, and its function in MDV pathogenesis has yet to be determined. Using overlapping cosmid clone-based technology, we have generated an MDV vIL-8 deletion mutant virus, rMd5/delta vIL-8. In vivo experiments with this mutant virus demonstrated that deletion of vIL-8 results in attenuation of the virus and induction of significantly less gross tumor, both in viscera and nerves, when compared to the parental virus. Reintroduction of the vIL-8 gene in the genome of the mutant virus restored the virulence of the virus to the wild-type levels, indicating that vIL-8 plays a role in MDV-induced pathogenesis. In this study, we show that there is a significant difference in the reduction of B cells and activation of T cells in the spleen cells of chickens inoculated with parental rMd5 and vIL-8 deletion mutant virus. These results indicate that vIL-8 is involved in the early phase of pathogenesis, presumably by attracting target cells to the initial site of infection. In addition, protection studies with the vIL-8 mutant virus showed that this mildly virulent virus protects susceptible maternal antibody-positive viruses at a higher level than the commonly used serotype 1 CVI988 vaccine. These results confirm the potential of partially attenuated viruses as vaccines against very virulent plus strains and the usefulness of recombinant DNA technology to generate the next generation of MDV vaccines.     

鸡β-防御素Gallinacin-8基因片段的克隆与序列分析

本试验从鸡的肝脏中提取总RNA,根据GenBank公布的鸡β-防御素Gallinacin-8(简称gal-8)基因序列设计2对引物,运用RT-PCR技术扩增出大小为20lbp的鸡β-防御素gal-8的基因片段.通过序列分析得知其由66个氨基酸组成,包括20个氨基酸残基的信号肽、5个氨基酸的原片肽及41个氨基酸的成熟肽.BLAST分析表明与GenBank中已公布的序列相比较缺失2个碱基,其同源性达到98%.将该基因克隆进pGEM-T Easy载体中,并转化大肠杆茵感受态DH5α,经筛选和测序鉴定获得了阳性重组质粒.从重组质粒中扩增出的成熟肽,大小约123 bp.试验为进一步构建重组核蛋白及表达具有广谱抗微生物活性的防御素提供了实验基础.