鸟氨酸脱羧酶抗酶基因功能的研究进展

鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)具有调控细胞多胺代谢、诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖的功能。近年来研究发现,鸟氨酸脱羧酶抗酶在动物繁殖过程中也具有重要调控作用。就鸟氨酸脱羧酶抗酶基因功能的研究现状做一综述,为进一步深入研究OAZ功能提供帮助。     

国庆1号温州蜜柑和沙田柚叶片的多胺代谢酶活性

为调控柑橘内源多胺提供参考依据,以国庆1号温州蜜柑(Citrus unshiu cv.Guoqing No.1)和沙田柚(C.grandis var.Shatinyu Hort.)的叶片为试材,研究其多胺合成酶精氨酸脱羧酶(ADC)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)以及多胺分解酶二胺氧化酶(DAO)、多胺氧化酶(PAO)的活性....     

石竹试管苗成花与多胺代谢的研究

以无根石竹试管苗为试材 ,通过外源多胺及多胺生物合成抑制剂调控石竹试管成花 ,研究其内源多胺代谢与成花的关系 .研究表明 ,外源多胺及多胺生物合成抑制剂影响石竹内源腐胺 (Put)、亚精胺 (Spd)、精胺 (Spm)及二丙胺(Dap)的代谢水平 .5× 10 - 2 mmol L的外源Spd、Spm有利于石竹试管苗成花 ,可将成花率由 36 7%分别提高到 6 0 %和4 8 3% .5mmol L的二氟甲基鸟氨酸 (DFMO)、环己胺硫酸盐 (CHAS)完全抑制成花 ,相同浓度的二氟甲基精氨酸 (DF MA)对成花影响不大 ,说明鸟氨酸脱羧酶 (ODC)比精氨酸脱羧酶 (ADC)作用更大 ,Spd的代谢水平与石竹试管成花密切相关     

多胺代谢相关基因在小鼠子宫内膜细胞中的调节

利用鸟氨酸脱羧酶(ODC)siRNA干涉、ODC过表达、添加特异性ODC抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)处理小鼠子宫内膜上皮细胞和基质细胞,采用实时定量PCR对多胺代谢相关酶类mRNA水平进行检测。结果显示:在子宫内膜上皮和基质细胞中,ODC siRNA转染后可导致SSAT mRNA水平下降为对照组的71.78%和54.36%(P<0.01),SAMDC mRNA水平上升为对照组的1.666 6倍和3.036 6倍(P<0.01);ODC过表达造成SSAT水平为对照组的1.921 4和2.852 7倍(P<0.01),AZⅠmRNA水平为对照组的1.962 1和3.073 8倍(P<0.01);利用DFMO处理体外分离的上皮细胞和基质细胞,SSAT mRNA水平为对照组的1.626 7和1.773 3倍(P<0.01),SAMDC mRNA水平为对照组的1.630 0和1.730 0倍(P<0.01),AZⅠmRNA水平为对照组的71.00%和76.67%(P<0.01);DFMO处理后上皮细胞和基质细胞数目(31.00±3.00和43.67±7.51)和活力(0.26±0.03和0.36±0.05)都显著下...     

多胺处理对小鼠子宫内膜上皮细胞的影响

[目的]检测多胺处理对小鼠子宫内膜上皮的影响。[方法]低浓度的腐胺、亚精胺、精胺处理小鼠子宫内膜上皮细胞,利用实时定量PCR检测多胺处理后多胺代谢相关酶类mRNA水平的变化,利用细胞计数、MTT法、流式细胞分析检测细胞增殖能力。[结果]腐胺处理上皮细胞可造成SAMDC、SMO、SMS、ODC、PAO mRNA水平显著下降;亚精胺处理上皮细胞可造成SAMDC、SRM、ODC mRNA水平显著下降,SSAT mRNA水平显著上升;精胺处理上皮细胞可造成SAMDC、SRM、ODC mRNA水平显著下降,SMO、PAO、SSAT mRNA水平显著上升。腐胺和亚精胺可促进子宫内膜上皮细胞的生长和活力增加,但精胺可显著降低细胞生长和活力。[结论]多胺处理可引起子宫内膜上皮细胞内多胺相关酶类mRNA水平的变化,对细胞增殖能力有重要的调节作用。     

加味丹参饮预处理调节ODC活性抗大鼠心肌缺血再灌注损伤研究

目的 探讨加味丹参饮通过调节鸟氨酸脱羧酶（ODC）活性在抗SD大鼠心肌缺血再灌注损伤（IRI）中的保护机制。方法 建立SD大鼠心肌IRI模型,设对照组、假手术组、缺血再灌注损伤（IRI）组、加味丹参饮（JWDSY）+IRI组共4组。酶联免疫（ELISA）法测定ODC含量,实时荧光定量PCR（RT-PCR）方法检测ODC mRNA表达水平,免疫印迹（Western blot）法检测ODC蛋白表达水平,高效液相色谱检测心肌组织中多胺的含量。结果 与对照组比较,假手术组的ODC含量、ODC mRNA及蛋白表达水平均无统计学意义（P>0.05）;与假手术组比较,IRI组的ODC含量显著增加、ODC mRNA及蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与IRI组比较,JWDSY+IRI组ODC含量显著减少,ODC mRNA和蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 加味丹参饮可能通过调节ODC活性,从而发挥对IRI后心肌的保护作用。     

梨小食心虫滞育过程中多胺代谢的变化

为明确低温条件下梨小食心虫幼虫滞育过程中体内多胺代谢的变化规律,用高效液相色谱法、紫外比色法和碘-淀粉比色法分别测定了梨小食心虫体内腐胺(Put)、亚精胺(Spd)、精胺(Spm)含量,及鸟氨酸脱羧酶(ODC)、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)和多胺氧化酶(PAO)活性。结果表明:在低温条件下,梨小食心虫幼虫在滞育过程中体内Put含量,除在滞育初期稍有减少外,一直维持较高含量;Spd含量始终处于较高水平;Spm含量呈现出先降低后升高再降低的变化趋势。ODC,SAMDC和PAO 3种酶活性在滞育过程中均表现出不同程度的升高。梨小食心虫滞育期间,滞育强度及环境温度对多胺代谢有明显影响,低温条件下,虫体内多胺含量的增加有助于增强滞育幼虫的耐寒能力。     

水分胁迫对番茄幼苗叶片和根系中多胺代谢的影响

【目的】探讨番茄体内多胺代谢与抗旱性的关系,为植物抗旱性的深入研究提供理论依据。【方法】以番茄幼苗为材料,用不同质量浓度(0(CK),50,75,100 g/L)的聚乙二醇(PEG6000)模拟水分胁迫,研究不同水分胁迫条件下番茄幼苗叶片和根系中多胺代谢的变化。【结果】水分胁迫影响番茄幼苗叶片和根系中的多胺代谢,随胁迫时间的延长,番茄幼苗叶片和根系中游离态腐胺(Put)、亚精胺(Spd)、精胺(Spm)及精氨酸脱羧酶(ADC)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)、多胺氧化酶(PAO)活性均呈先上升后下降的趋势,且除PAO外上升幅度随胁迫程度加重而增大。番茄幼苗叶片和根系中ADC、ODC活性与Put含量极显著正相关,水分胁迫下ADC、ODC都参与番茄幼苗Put的合成代谢;PAO活性与Spd、Spm含量变化趋势相似且极显著相关,叶片与根系中的多胺代谢显著相关。【结论】水分胁迫下番茄幼苗中多胺代谢活跃,且不同水分胁迫处理间多胺代谢差异显著,多胺代谢与番茄抗旱性间关系密切。     

水分胁迫下斑茅3个逆境代谢相关基因表达的实时PCR分析

【研究目的】初步探讨斑茅3个关键逆境适应相关基因在水分胁迫下的表达机制。【方法】已克隆S-腺苷蛋氨酸脱羧酶、鸟氨酸氨基转移酶、甜菜碱脱氢酶3个基因和内参基因的基础上,应用定量PCR技术,对这3个基因在不同胁迫时间下的表达水平进行分析。【结果】斑茅的S-腺苷蛋氨酸脱羧酶、鸟氨酸氨基转移酶基因、甜菜碱脱氢酶基因表达在初期均受抑制,后期表达持续上调,但甜菜碱脱氢酶基因受水分诱导表达较前两个基因明显。【结论】这可能暗示着在斑茅中,脯胺酸和甜菜碱的合成受水分胁迫诱导,而甜菜碱的合成相对脯胺酸和多胺受水分胁迫诱导影响更大。这些研究为斑茅抗旱的分子机制提供初步的理论基础。     

多胺代谢相关基因在小鼠子宫蜕膜中的转录

检测多胺代谢相关基因在子宫蜕膜细胞中的转录.获取正常的小鼠子宫蜕膜组织和人工诱导蜕膜化组织,同时利用酶消化分离小鼠子宫内膜基质细胞,进行体外诱导蜕膜化,利用实时定量PCR检测多胺相关基因在子宫蜕膜组织或细胞中的转录.结果表明:多胺相关基因在小鼠正常蜕膜化组织以及人工蜕膜化组织中mRNA水平均发生了显著的变化,但基质细胞体外蜕膜化后仅有SSAT和SMS mRNA发生显著的变化.多胺相关基因在小鼠子宫蜕膜中转录水平发生了显著的变化,这可能引起细胞内多胺水平的变化,从而对细胞增殖具有调节作用.     

腹腔注射亚精胺对小鼠卵巢组织多胺含量及代谢相关基因表达的影响

【目的】研究腹腔注射亚精胺对鼠卵巢组织多胺代谢的影响。【方法】给鼠腹腔注射不同剂量亚精胺[0(对照组、0.05、0.10和0.15 mg·g~(-1)],应用实时荧光定量PCR检测多胺代谢关键基因表达量,应用高效液相色谱检测鼠卵巢组织中多胺含量。【结果】注射0.15 mg·g~(-1)亚精胺时,卵巢组织ODC、OAZ1、SPMS、SSAT、PAOX和SMOX基因表达量显著高于其他3组;注射亚精胺组鼠卵巢组织SPDS表达量均显著低于对照组;注射0.10 mg·g-1亚精胺组鼠卵巢组织中腐胺和亚精胺含量均显著高于对照组,而注射亚精胺对卵巢中精胺含量无显著影响。【结论】外源性亚精胺的腹腔注射可导致鼠卵巢组织中多胺含量以及多胺代谢相关基因表达量发生变化,且具有剂量依赖性,提示外源性亚精胺可通过介导卵巢组织的多胺代谢来参与调控卵巢功能。     

腐胺和脯氨酸对哺乳期仔猪空肠绒毛-隐窝轴上皮细胞的多胺代谢及Wnt信号通路的影响

【目的】研究腐胺和脯氨酸对哺乳期仔猪空肠绒毛-隐窝轴上皮细胞的多胺（腐胺、亚精胺和精胺）代谢、Wnt信号通路关键基因的mRNA相对表达量的影响。【方法】选取18头0日龄的刚出生的三元杂交（长白×大白×杜洛克）仔猪,随机配对分成3组,每组6个重复,每个重复1头猪,对照组,腐胺组和脯氨酸组,分别灌喂等体积的生理盐水,5 mg·kg^-1体重添加剂量的腐胺和25 mg·kg^-1体重添加剂量的脯氨酸,到14日龄断奶,断奶后3 d屠宰,分离空肠绒毛-隐窝轴的3个不同分化程度（绒毛顶端,绒毛中段和隐窝）的细胞,分别为F1,F2,F3。高效液相色谱法测定F1,F2,F3中的多胺浓度,RT-PCR测定多胺代谢途径中的相关基因以及Wnt信号通路中关键基因的mRNA相对表达量。【结果】1、在绒毛顶端细胞F1中,与对照组相比,脯氨酸组的腐胺、亚精胺、精胺的浓度均显著增加（P＜0.05）,而腐胺组的多胺均无显著差异（P＞0.05）;在绒毛中段细胞F2中,除了腐胺的含量无显著差异外,脯氨酸组和腐胺组的亚精胺、精胺的浓度均显著高于对照组（P＜0.05）,且脯氨酸组的亚精胺和精胺的浓度均显著高于腐胺组（P＜0.05）;在隐窝底端细胞F3中,腐胺组和脯氨酸组的腐胺、亚精胺、精胺浓度与对照组的浓度差异均不显著（P＞0.05）。2、鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因在绒毛顶端上皮细胞F1中的mRNA表达量,腐胺组显著高于脯氨酸组和对照组（P＜0.05）;精氨酸酶（arginase）在F2中的mRNA表达量,脯氨酸组显著高于腐胺组和对照组（P＜0.05）;sFRP3在绒毛中段上皮细胞F2中的mRNA表达量,脯氨酸组的显著高于腐胺组（P＞0.05）;sFRP4在隐窝上皮细胞F3中的mRNA表达量,腐胺组显著高于对照组和脯氨酸组（P＜0.05）。【结论】添加了外源腐胺和脯氨酸,促进了哺乳期仔猪的空肠绒毛-隐窝轴上皮细胞的分化细胞的多胺浓度及促进了多胺的代谢,而对未分化的隐窝细胞没显著影响,同时通过Wnt信号通路调控空肠绒毛-隐窝轴细胞的分化成熟。     

黄芩苷通过上调miR-126诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察黄芩苷对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 用qRT-PCR检测miR-126的表达变化,Western-blot检测Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、p-p38和p53的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 miR-126在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达比正常乳腺细胞低,黄芩苷干预乳腺癌细胞后miR-126上调最为明显（P<0.05）。用miR-126 mimics、miR-126 inhibitors转染乳腺癌细胞,Western-blot显示黄芩苷及miR-126 mimics作用于人乳腺癌细胞后Bcl-2表达水平下降,Caspase-9和Caspase-3的裂解产物、p-p38、p53表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。MTT法显示黄芩苷和miR-126 均可抑制乳腺癌细胞的增殖,流式细胞术显示黄芩苷与miR-126 mimics促进癌细胞凋亡。结论 黄芩苷可以抑制乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与通过上调miR-126调节凋亡相关基因有关。     

盐胁迫对葡萄苗期多胺和激素代谢的影响

【目的】 研究盐胁迫条件下,葡萄叶片中多胺含量、多胺氧化酶、多胺合成酶活性以及激素的动态变化,研究不同盐胁迫强度对多胺类物质及激素代谢的影响。【方法】 采用盆栽基质培养模拟盐胁迫环境,设置4个NaCl处理梯度:0 (CK)、1、2和3 g/kg。多胺和激素含量的测定采用高效液相色谱法,多胺合成及分解酶活性的测定采用紫外分光光度计比色法。【结果】 盐胁迫处理后,葡萄叶片中多胺含量和脱落酸含量较对照而言显著增加,玉米素含量显著降低,随胁迫时间的延长,Put、Spm、Spd、ABA以及PAO、DAO、ADC、ODC、SAMDC活性均呈先上升后下降趋势,在10 d及10 d后达到峰值。ZT呈逐渐下降的趋势,并随胁迫强度增大而减小;进行显著性分析后,叶片中多胺含量与Put、Spm、Spd含量呈极显著正相关,DAO、ADC、ODC活性与Put含量呈显著正相关,PAO与SAMDC活性与Spm和Spd含量也呈极显著正相关。【结论】 3种多胺经酶的合成代谢后和激素共同缓解葡萄苗所遭受到的盐胁迫,期间主要发生作用的是多胺合成酶,盐胁迫下多胺与激素含量之间的变化关系也十分密切。     

雄激素和氢化可的松对山羊附睾头上皮细胞增殖的影响

为研究雄激素和氢化可的松对山羊附睾上皮细胞生长的作用模式,本研究利用酶标仪检测附睾头部上皮细胞增殖情况,实时荧光定量PCR及ELISA检测雄激素受体(AR)的表达,检测睾酮与氢化可的松对山羊附睾上皮细胞体外增殖的作用以及对AR表达的影响。结果表明:100nmol/L睾酮对附睾头上皮细胞增殖的促进效应最高且与对照组差异极显著(P0.01),200nmol/L氢化可的松促进附睾头上皮细胞增殖效应最佳并与对照组差异显著(P0.05),前者的效应明显且可以被AR阻断剂阻断;睾酮和氢化可的松对附睾头上皮细胞增殖表现为协同作用;100nmol/L睾酮与200nmol/L氢化可的松均使附睾头上皮细胞的AR mRNA和蛋白表达量上调,与对照组差异显著(P0.05),且二者共存时附睾头上皮细胞的AR mRNA和蛋白表达量极显著高于对照组(P0.01)。本研究表明睾酮和氢化可的松对附睾头上皮细胞体外增殖均有促进作用,呈明显的浓度依赖性,且二者之间存在协同作用,这为进一步研究附睾上皮细胞增殖及功能的调节机理提供了基础。     

三疣梭子蟹雌激素相关受体基因在蜕皮过程中的表达分析

雌激素相关受体(ERR)在甲壳动物蜕皮过程中可能起着重要的调节作用,但是尚不清楚该基因在三疣梭子蟹不同组织和不同蜕皮阶段的表达模式。本文采用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术研究了三疣梭子蟹雌激素相关受体(Pt ERR)基因在不同组织和不同蜕皮阶段的表达情况。结果表明,Pt ERR-mRNA在C期三疣梭子蟹的Y器官和鳃中表达水平最高,其次眼柄和胃中表达水平也相对较高,在3种肌肉组织和三角膜中表达水平较低。在不同蜕皮阶段,13种组织中的Pt ERR-mRNA表达水平均差异显著。Y器官中Pt ERR-mRNA从AB期到E期呈显著上升趋势;胸神经节和眼柄中的Pt ERR-mRNA变化模式均为先上升后下降趋势,大颚器中的Pt ERR-mRNA变化趋势为先下降后上升;大螯肌肉、附肢肌肉和三角膜中的Pt ERR-mRNA表达水平均呈显著升高趋势,而腹部肌肉中Pt ERR-mRNA为先下降后上升趋势;就消化代谢器官而言,胃、肝胰腺和鳃中Pt ERR-mRNA在整个蜕皮周期中均为先升高后降低的趋势,其中D期达最高值;肠道中Pt ERR-mRNA相对表达量在D期最高,C期和E期较低;从AB期至E期,心脏中Pt ERR-mRNA表达水平一直显著增加,每期增加1倍左右。综上,Pt ERR主要在Y器官、鳃、眼柄和胃中表达,可能参与调控蜕皮过程、细胞增殖和能量代谢等。     

Melatonin treatment induces chilling tolerance by regulating the contents of polyamine, γ-aminobutyric acid,and proline in cucumber fruit

The mechanism of melatonin (MT) induced chilling tolerance in harvested cucumber fruit was investigated at commercial maturity. In this study, cucumber fruits were treated with 100 µmol L^–1 MT at 4°C and 90% relative humidity for 15 d of storage. In comparison with the control, cucumber treatment with MT resulted in reduced chilling injury (CI), decreased electrolyte leakage and enhanced firmness. The fruits treated with MT showed higher chlorophyll contents in storage conditions with suppressed chlorophyllase enzyme activity. MT treatment increased arginine decarboxylase (ADC) and ornithine decarboxylase (ODC) enzyme activities. Moreover, enhanced expression of the Cucumis sativus ADC (CsADC) and C. sativus ODC (CsODC) genes resulted in the accumulation of polyamine contents. Similarly, proline levels exhibited higher levels among treated fruits. Meanwhile, the proline synthesizing enzymes △¹-pyrroline-5-carboxylate syntheses (P5CS) and ornithine aminotransferase (OAT) were significantly increased, while a catabolic enzyme of proline dehydrogenase (PDH) activity was inhibited by treatment. In addition, MT induced expression of C. sativus OAT (CsOAT) and C. sativus P5CS (CsP5CS) genes. Cucumber fruits treated with MT also exhibited higher γ-aminobutyric acid (GABA) content by enhanced GABA transaminase (GABA-T) and glutamate decarboxylase (GAD) enzyme activities and a higher C. sativus GAD (CsGAD) gene expression. To sum up, the results show that MT treatment enhanced chilling tolerance, which was associated with the regulation of polyamines, as well as proline and γ-aminobutyric acid.