急性热应激肉鸡组织中Hsp90的表达与应激损伤

【目的】探讨急性热应激条件下肉鸡组织的病理性损伤及其Hsp90含量变化的相关性。【方法】将100只1日龄AA肉鸡随机分成5组,每组20羽。正常环境温度下对受试鸡进行30 d的适应性饲养后,除对照组外,将其余80只受试鸡的环境温度迅速由（25±1）℃上升至（40±1）℃,并分别持续进行2、3、5和10 h的热应激处理。利用组织病理、免疫组织化学和酶联免疫吸附试验,检测急性热应激状态下受试肉鸡心脏、肝脏及肾脏组织的病理性损伤和Hsp90的定位与表达。【结果】在热应激开始的2～5 h,受试鸡心脏、肝脏和肾脏组织的实质细胞损伤表现出随热应激时间的持续而逐渐加重的趋势,病理变化特征以颗粒变性和水泡变性为主。热应激2 h后,Hsp90在肉鸡心脏、肝脏、肾脏组织中的表达量呈极显著增加（P＜0.01）,而在应激持续到3～5 h时呈现下降趋势,待热应激持续至10 h后,心脏和肾脏组织中Hsp90的表达量又逐渐上升。【结论】热应激状态下肉鸡组织细胞的应激性病理损伤与Hsp90的分布和含量存在一定程度的关联。Hsp90含量随热应激时间延长而出现先升高、然后下降并逐渐回升的波动,与同期各组织细胞所呈现的病理损伤变化相吻合,表明在热应激初期促使Hsp90表达量增加,以增强细胞在不利环境中的生存能力。     

运输应激猪骨骼肌中热应激蛋白HSP70和HSP90家族的表达

利用Western blot技术，检测长途运输试验猪骨骼肌（背最长肌和臀长肌）中分属于HSP70家族和HSP90家族的4种应激蛋白（HSP70，HSP72，HSP86和HSP90）的表达，所有运输应激猪和对照猪肌肉组织 中均检测到了上述4种HSP，对照猪组织中HSP的表达说明HSP除了在受应激 的细胞内行使生理功能外，还具有独立于应激刺激应答以外的其它作用，6h长途运输后，HSP的表达量明显不同，HSP70和HSP72在肌肉组织中的表达虽然有一定的增加，但统计学分析差异不显（P＞0．05），而HSP86和HSP90在骨髓肌中的表达明显下降，尤以HSP90下降最显（P＜0．01），提示HSP90家族成员与肉品品质相关，可能作为判应激损伤的的指征。     

肉鸡热应激病理损伤与应激蛋白(HSP_(70))相关性研究

 通过血液临床病理学、组织学和免疫组织化学检测技术,对AA肉鸡进行了为期10 h的急性热应激,观察分析了高热应激状态下受试鸡组织损伤及其与HSP70的相关性。热应激受试鸡组织脏器在应激初期即开始出现较明显的组织病理学改变,表现为心肌纤维、肾小管上皮细胞等呈现不同程度的变性、坏死等退行性变化;外周血液中反映受试鸡心肌等细胞组织损伤的肌酸激酶(对照)活性显著升高;反映鸡体基础代谢水平的甲状腺素T3和T4、胰岛素则呈现不同程度的下降趋势。应激持续较长时间(10 h)后受试鸡外周血液中对照含量下降的幅度明显趋缓的现象     

大蒜素对急性热应激肉鸡脏器功能的影响

通过理化指标的观测研究了大蒜素对热应激肉鸡脏器功能的影响。结果表明,36℃急性热应激对肉鸡血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)的活性影响不明显,但显著降低肉鸡血清磷酸肌酸激酶(CK)和碱性磷酸酶(ALP)的活性;热应激和大蒜素同时作用显著降低肉鸡股动脉压(FAP)、红细胞比容(HT)及CK、ALP的活性,但对GPT、GOT活性和肌酐(CR)浓度的影响不明显;大蒜素显著降低热应激肉鸡ALP活性,对GPT、GOT活性、尿酸(UA)和CR浓度的影响不明显,有提高新城疫抗体效价的趋势,显著增加热应激肉鸡血清总蛋白(TP)浓度。表明36℃热应激对肉鸡心、肝、肾和肌肉等组织没有明显的损害;大蒜素对热应激肉鸡心血管功能有一定的影响,并有疏肝利胆、促进肝脏合成代谢的功能,对肾脏排泌功能影响不明显。     

热应激小鼠附睾组织HSP70表达的研究

利用化学恒温培养箱对小鼠实施42℃1h/天的热应激处理,建立持续的全身热应激动物模型.在热应激持续到8、13、21和35天时,颈椎脱臼处死对照组和热应激组小鼠,应用改良巴氏染色法检测附睾精子畸形率,免疫荧光组织化学和蛋白质印迹分析的方法检测附睾组织HSP70的表达.结果显示:热应激组小鼠附睾精子畸形率随着热应激持续时间的延长而升高,且显著(P＜0.05)高于对照组;对照组小鼠附睾组织HSP70呈极强表达(+++),而热应激组小鼠附睾组织HSP70的表达随着热应激持续时间的延长而减弱,当热应激持续到35天时呈极弱的表达(±).结果表明:热应激损伤了附睾的功能,使附睾精子畸形率增加;附睾内HSP70为非热诱导型,HSP70可能在附睾精子的成熟过程发挥特殊的作用.     

肉鸡心脏热应激损伤和热休克蛋白mRNA转录水平的相关性

 通过分光光度计、组织病理学和荧光定量反转录PCR检测技术，研究肉鸡心脏热应激损伤和热休克蛋白mRNA 变化的相关性。试验结果显示，热应激过程中肌酸激酶和谷丙转氨酶的活性呈现波动性变化，肌酸激酶的变化更明显；心脏的组织病理学变化主要表现为心肌纤维变性和坏死；热应激过程中HSC70 mRNA也呈现波动性变化，而 HSP70 mRNA水平呈现上升趋势。结果提示，HSC70 mRNA与肌酸激酶活性变化呈现一定负相关，HSC70有可能作为心脏热应激损伤的标志物。     

运输应激猪组织病理性损伤、HSP27的组织分布及其相关性研究

利用组织学、免疫组织化学以及临床血液检测等方法，探讨持续运输应激对育肥出栏猪组织的病理性损伤以及组织损伤与HSP27组织定位之间的相关性。结果表明：运输应激初期（1～2h），反映组织损伤的血液肌酸激酶（CK）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性都显著升高；应激4h时，CK及AST活性有所下降；当应激持续到6h和10h时，CK活性又显著升高。组织病理损伤也呈现出相似的波动变化。免疫组织化学结果显示，随着应激时间的延长，HSP押在组织中的定位没有发生肉眼可见的变化；HSP27主要分布在心肌和肝细胞胞浆中，在背最长肌的细胞浆和细胞核中均呈强阳性表达，在肺脏细支气管的黏膜下层有强阳性表达，在受检组织的血管壁及内皮细胞中也有强阳性表达。     

肉鸡HSP70的基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

 【目的】制备高特异性的肉鸡热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）单克隆抗体,研究肉鸡HSP70与热应激损伤的关系。 【方法】 利用RT-PCR方法扩增肉鸡HSP70 mRNA,将其扩增产物克隆到PGEM-T Easy 载体和原核表达载体pET-28a(+)上,进一步转化至大肠杆菌BL-21中,用IPTG诱导表达重组肉鸡HSP70。以纯化的重组肉鸡HSP70制备多克隆抗体,免疫印迹分析说明重组肉鸡HSP70具有很好的免疫原性。以纯化的重组肉鸡HSP70免疫Balb/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。【结果】获得2株分泌肉鸡HSP70单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步通过免疫印迹分析筛选出1株高特异性的肉鸡HSP70单克隆抗体,命名为BH70-1。 【结论】免疫组织化学结果显示,单克隆抗体BH70-1是一种理想的抗体。     

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)热休克蛋白HSP30基因的克隆与组织表达

[目的]获得卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)HSP30基因并探讨其组织表达.[方法]采用RACE的方法从卵形鲳鲹脾组织克隆HSP30基因的cDNA全序列,并用荧光定量PCR分析在健康鱼及哈维氏弧菌感染后HSP30基因的组织表达.[结果]HSP30基因cDNA序列全长913 bp,包含5′非编码区(5′UTR)89 bp、3′非编码区(3′UTR)188 bp,开放阅读框(ORF)636 bp,编码211个氨基酸.预测其氨基酸序列成熟肽的蛋白分子质量为24.1 kD,理论等电点为5.62.HSP30包括N-末端序列(NTS)、α-晶状体蛋白结构域(ACD)、C-末端序列(CTS)和C-末端延伸(CTE).系统进化分析结果显示卵形鲳鲹HSP30与高体鰤(Seriola dumerili)HSP30聚为一支.卵形鲳鲹HSP30基因在各组织中均有不同程度的表达,其中肝组织中表达量最高,其次为皮肤、肌肉、脾、心、肾,其他组织的表达量较低.哈维弧菌侵染卵形鲳鲹后,肝、脾和肾组织中HSP30基因mRNA表达量均升高,肝组织中变化最显著.[结论]成功克隆了卵形鲳鲹HSP30基因,为进一步揭示卵形鲳鲹HSP30的抗菌免疫应答机制提供了理论依据.     

肉鸡热应激及防治措施

肉鸡高密度饲养在夏季容易发生热应激，给肉鸡生产带来很大经济损失，引起了国内外学者的广泛重视。１发生原因肉鸡体表羽毛丰厚，皮肤没有汗腺，生长迅速，新陈代谢旺盛，本身体温较高。正常情况下依靠呼吸蒸发散热，因此环境温度对肉鸡生产影响很大。肉鸡生长的适宜温度为１５．６～２１．１℃，在适温范围内，产热和散热维持平衡，肉鸡体温不升高，生长速度快，饲料利用率高，死亡率低，温度超过２８℃时，肉鸡发生明显的热应激反应，达３８℃以上就出现死亡。２临床变化热应激时肉鸡采食量减少，生长速度变慢，饲料转化率降低，死亡率增…     

热应激下肉鸡心肌的损伤和热休克蛋白的定位

将90只肉鸡随机分成A组(对照)、B组(热应激6h)、C组(热应激12h)、D组(热应激18h)、E组(热应激24h)和F组(热应激48h)。对各组受试鸡心肌进行病理组织学检查,并利用4种HSP单克隆抗体(HSP27、HSP60、HSC70和HSP86)对心肌纤维进行免疫组织化学染色。实验结果显示,热应激时心肌纤维的病理组织学损伤主要表现为心肌纤维变性和心肌纤维断裂;HSP27、HSP60、HSC70和HSP86在心肌纤维中的定位不尽相同,HSP27、HSC70,和HSP86在心肌纤维中有强阳性表达,但HSP60的阳性染色较弱。提示HSPs在心肌纤维内的广泛分布对保护心肌纤维方面可能起重要的作用。     

热应激条件下小鼠睾丸组织HSP70基因表达谱的研究

本试验建立了不同温度、不同时间热应激实验小鼠动物模型,采用Real-time PCR和Western-blot方法检测了小鼠睾丸组织热应激蛋白70(HSP70)在mRNA和蛋白质水平的表达规律。结果表明:25℃时,HSP70在mR-NA和蛋白质表达水平没有变化;在31℃、34℃和37℃时,随应激时间的延长,HSP70mRNA和蛋白质的表达均呈现先升高后下降的趋势;40℃时,HSP70mRNA和蛋白质始终持续高表达。结论:小鼠受热应激后,睾丸组织HSP70mRNA和蛋白质均随着温度和时间的增加呈规律性变化,本研究为探索HSP70对精液品质的影响奠定了基础。     

热应激下肉鸡心肌的损伤和热休克蛋白的定位

将90只肉鸡随机分成A组(对照)、B组(热应激6 h)、C组(热应激12 h)、D组(热应激18 h)、E组(热应激24 h)和F组(热应激48 h).对各组受试鸡心肌进行病理组织学检查,并利用4种HSP单克隆抗体(HSP27、HSP60、HSC70和HSP86)对心肌纤维进行免疫组织化学染色.实验结果显示,热应激时心肌纤维的病理组织学损伤主要表现为心肌纤维变性和心肌纤维断裂;HSP27、HSP60、HSC70和HSP86在心肌纤维中的定位不尽相同,HSP27、HSC70和HSP86在心肌纤维中有强阳性表达,但HSP60的阳性染色较弱.提示HSPs在心肌纤维内的广泛分布对保护心肌纤维方面可能起重要的作用.     

运输应激猪组织病理性损伤、HSP27的组织分布及其相关性研究

利用组织学、免疫组织化学以及临床血液检测等方法,探讨持续运输应激对育肥出栏猪组织的病理性损伤以及组织损伤与HSP27组织定位之间的相关性.结果表明:运输应激初期(1～2 h),反映组织损伤的血液肌酸激酶(CK)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性都显著升高;应激4 h时,CK及AST活性有所下降;当应激持续到6 h和10 h时,CK活性又显著升高.组织病理损伤也呈现出相似的波动变化.免疫组织化学结果显示,随着应激时间的延长,HSP27在组织中的定位没有发生肉眼可见的变化;HSP27主要分布在心肌和肝细胞胞浆中,在背最长肌的细胞浆和细胞核中均呈强阳性表达,在肺脏细支气管的黏膜下层有强阳性表达,在受检组织的血管壁及内皮细胞中也有强阳性表达.     

热应激对SH-SY5Y细胞中PrP及HSP90 mRNA转录水平的影响

人神经细胞SH-SY 5Y常规法培养至长满细胞瓶(120 cm2)后均分为A~I 9个小细胞瓶(30 cm2),37℃培养15 h后,B~D组在42℃条件下分别进行0.5、1和2 h的持续热应激处理,而E~I组于42℃热应激处理0.5 h后,37℃分别恢复1、3、8、12、24 h。持续热应激阶段,朊蛋白(P rP)和热休克蛋白(HSP)90 mRNA水平显著提高(P<0.01),应激2 h时,P rP和HSP 90 mRNA水平分别约为对照组(A组)的2.5和5倍;在应激后恢复初期(1~3 h),P rP和HSP 90mRNA水平也显著升高(P<0.01),其中恢复到3 h时,P rP和HSP 90 mRNA水平分别为对照组的9和7倍;当恢复到12~24 h时,HSP 90和P rP mRNA的转录水平与对照组差异不显著。结果表明热应激可以提高HSP 90和P rP mRNA的转录水平。应激时P rP mRNA转录水平的提高暗示着P rP在细胞应激中起着一定的生物作用。     

肉鸡热应激下肝脏和下丘脑HSP70 mRNA的表达

研究优质黄羽肉鸡热应激期间肝脏和下丘脑组织中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因mRNA的动态表达规律,为揭示该类型优质鸡种热应激反应机理提供参考。64日龄Anak 40(♂)×岭南黄(♀)杂交后代母鸡置于(38±1)℃恒温室内进行持续热应激处理,采取荧光定量PCR方法分别测定热应激起始(0 h)、热应激后12、24、36、48和60 h肝脏和下丘脑组织中HSP70 mRNA的表达水平。随着热应激时间的延长,肝脏和下丘脑组织中HSP70 mRNA表达水平均显著上升,至热应激36 h时表达水平达高峰值,约为应激起始表达水平的7倍,差异显著(P<0.05);热应激48和60 h,下丘脑HSP70 mRNA表达量快速回落至热应激初期的水平,而肝脏表达量极显著地骤降至低于热应激初期10%的水平。在(38±1)℃持续热应激期间,优质肉鸡肝脏和下丘脑HSP70 mRNA表达呈现基本同步的变化规律,即表达水平先上升后下降,热应激36 h时表达水平达高峰值。     

急性热应激对蛋鸭内脏组织HSP70表达的影响

选取20只处于产蛋高峰期的蛋鸭,急性热应激处理后,用RT-PCR和Western-blot研究蛋鸭各内脏器官内热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)的表达情况.结果显示:急性热应激后内脏组织肝脏、心脏和卵巢中的HSP70 mRNA和蛋白水平的表达量无明显变化,肾脏内mRNA水平的表达量显著下降,而脾脏内mRNA和蛋白水平的表达量呈短暂下降后又恢复到原来水平.结果表明当蛋鸭遭受急性热应激时内脏器官呈现特异性反应.     

持续热应激状态下肉鸡心脏和肾脏组织损伤与hsp_(60) mRNA转录

为研究环境胁迫条件下热休克蛋白60 mRNA(hsp60 mRNA)转录水平和应激性损伤的关系,将30日龄AA肉鸡的饲养环境温度从(22±1) ℃突然升高到(37± 1) ℃分别热应激1、2、3、5和10 h后剖杀,利用临床血液病理学、组织病理学和荧光定量PCR方法,观察热应激不同时间对肉鸡重要器官心脏和肾脏组织损伤及其hsp60 mRNA表达水平的影响.结果显示,持续热应激处理后的肉鸡血液肌酸激酶(CK)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)均显著升高,CK在2、3、5和10 h与对照组(无热应激)差异极显著(P<0.01),ALT在3 h与对照组差异显著(P<0.05),在5 h和10 h差异极显著(P<0.01);持续热应激处理2 h后的肉鸡心脏和肾脏组织均呈现出不同程度的以颗粒变性和水泡变性为主要特征的病理性损伤;心脏和肾脏组织中hsp60 mRNA转录水平在热应激2 h时显著高于对照组(P<0.05),而在5、10 h逐渐恢复正常.提示:hsp60 mRNA转录水平与其相应蛋白的表达和肉鸡组织的热应激损伤存在一定程度的关联性.     

急性热应激后小鼠的抗氧化能力和Hsp70基因的表达

为研究急性热应激后小鼠抗氧化酶活性的变化及其肝脏热休克蛋白70基因(Hsp70)的表达规律,选取5～6周龄健康昆明雄性小鼠56只,平均分成7组(1个对照组和6个急性高温处理组).6个急性高温处理组小鼠分别为41℃、急性高温处理2h后再置于25℃环境中0、2、6、12、24、48 h的小鼠.分别测定各处理小鼠的脏器指数、...