猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)SA毒株的分离与鉴定

从仔猪内脏分离到一株猪繁殖呼吸综合征病毒（PRRSV）毒株，该毒株能在Marc－145细胞上增殖致细胞病变，该病变能被PRRSV美洲型阳性血清所抑制，不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制，经美洲型PRRSV荧光抗体染色呈阳性反应，电镜观察到直径55nm左右的病毒粒子，属RNA病毒，接种阴性仔猪未见临床症状异常，但血清学阳性。命名该分离毒为PRRSV－SA毒株。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传变异研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是目前严重危害养猪业的一种传染病，呈世界性流行，该病的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），不同PRRSV分离株核苷酸序列存在广泛而明显的变异，这给PRRS的准确检测和有效控制带来困难，本文综述了近年来国内外关于该病毒不同分离株的遗传和变异情况，从基因组水平阐述了与病毒致病性关系较大的结构域，其中5'UTR,OIRF1中的Nsp2及ORF3和ORF5为变异较大的区域。     

猪繁殖呼吸综合征弱毒疫苗的研制

PRRSV—SА弱毒株免疫仔猪,无不良临床表现,不排毒;免疫怀孕母猪,母猪精神、食欲、体温均正常,并在预产期顺利产仔,表现出良好的安全性。SА弱毒免疫猪后2周即产生抗体反应,免疫仔猪4～6个月后,能抵抗强毒攻击;母猪在配种前2周免疫,在怀孕90-96d时,用强毒攻击,不表现任何临床症状,并顺利产仔,表现出坚强的免疫力。用SА弱毒制备成冻干疫苗,免疫猪表现出良好的安全性和免疫力。证明PRRSV—SА弱毒疫苗能预防猪繁殖呼吸综合征。     

新疆南疆猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株分型鉴定

了解新疆南疆PRRSV毒株类型,为新疆南疆PRRS防制疫苗的选择和防制措施的制定提供理论依据。本实验利用可同时扩增PRRSV欧洲型和美洲型毒株的ORF7基因特异性引物,进行RT-PCR、克隆、测序及序列分析。结果显示:本研究获得的14个ORF7基因片段不存在类似欧洲型代表株LV的9个核苷酸缺失,进化树显示均与国内外的美洲型代表株在同一分支内,其中XJNJ-5-2和XJNJ-5-3株与高致病性代表株JXA1在同一个小的分支内。结论为本实验未检测到欧洲型毒株,获得了14个美洲型毒株,其中有2株属于高致病性毒株。利用新疆南疆PRRSV分子流行病学调查结果,对新疆南疆PRRS的防制具有现实意义。     

猪细小病毒弱毒株（PPVs—1A）及其疫苗的免疫效力

以ＰＰＶｓ－１Ａ株弱毒肌肉接种后备母猪２头，每头注射１ｍＬ。接种后第８天的ＨＩ价为１２８￣２５６。以后抗体上升，攻毒前ＨＩ价平均为１２８０。对照母猪２头ＨＩ抗体均为阴性。４头母猪配种后，怀孕至３８￣４０ｄ时攻毒，结果从接种母猪的血浆中没有分离到病毒，而对照母猪的血浆中则分离到病毒。攻毒４０ｄ后宰杀，接种母猪共怀２５头胎猪，从它们的脏器中均没有分离到病毒，而对照母猪共怀２３头胎猪，其中有１０头的脏器     

我国猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子演化及与疫苗毒株的比较分析

为了解我国大陆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子演化特点,为PRRS防控提供参考,对GenBank中收录的60株PRRSV ORF5基因和NSP2基因进行序列分析.根据ORF5基因和NSP2基因构建的进化树分析表明,我国毒株主要分为4大亚群,其中亚群1为主要分支,以2006年分离的JXA1株为代表的HP-PRRSV毒株,我国HP-PRRSV可能起源于CH1-a和HB-1 (sh)/2002株,其变异是逐渐演变的过程.目前我国流行的毒株中HP-PRRSV占绝对优势,且与高致病性疫苗株(JAX1和HUN4株等)同源性较高.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株的分离与鉴定

为了解猪繁殖与呼吸道综合征在新疆的流行现状,以及病毒毒株的分子生物学特征,对疑似该病病料进行地方毒株的分离,并对其进行鉴定。采集新疆乌鲁木齐市七道湾某猪场疑似PRRS病死的猪只肺脏及淋巴结等组织病料,将其处理后接种到Marc-145细胞上,并盲传3代;对分离株进行毒力测定(TCID50),应用RT-PCR方法对出现CPE的细胞培养物进行分子检测。结果显示,分离到的新疆病毒株可发生细胞病变,在Marc-145细胞上的TCID50为10-5·mL-1。RT-PCR检测结果用琼脂糖凝胶电泳鉴定基因序列,将测序结果与GenBank已发表的PRRSV毒株基因序列进行对比分析。研究证明所分离到的病毒为PRRSV,命名为XJ-Q。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白特异性卵黄抗体的制备与鉴定

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)的基因片段克隆至载体pET-30a,转化重组质粒至Escherichia coli BL21(DE3)表达融合蛋白6×His-N,并以其为抗原免疫蛋鸡,制备特异性抗PRRSV-N卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY).结果显示:6×His-N在BL21中的表达量为60.2mg·L-1;将纯化浓缩的6×His-N与弗氏佐剂乳化,连续3次免疫海兰蛋鸡后,经ELISA检测,首免后第36天抗6×His-NIgY抗体为阳性(P/N=2.44);第83天的P/N值达到最高,为5.63,抗体经1:640稀释后,P/N值为2.29;经SDS-PAGE和Western blot分析,提取的卵黄抗体的纯度高且具有良好的免疫反应性.研究表明,抗PRRSV-N蛋白的IgY制备具有简便、成本低廉等特点,可用于PRRSV检测试剂盒的开发.     

猪繁殖与呼吸系统综合征病毒华南株GDgz 的分离鉴定及遗传进化分析

为了解华南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异特性,用Marc-145细胞从广东省疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场采集的肺组织中分离得到1株PRRSV(命名为GDgz),该毒株能产生明显的细胞病变。全基因组进化分析和同源性比对分析结果显示,GDgz与中国高致病性毒株位于同一分支,与欧洲型毒株Lelystad-virus同源性最低、仅为60.3%,与美洲型经典毒株VR-2332的同源性为88.8%,与中国高致病性毒株JXA1和HuN4同源性为98.8% 和98.9%,与JXA1的疫苗株同源性为91.1%,与NADC30和NADC30-like毒株 CHsx1401和JL580同源性分别为84.5%、87.2%和83.6%。NSP2序列比对结果显示,GDgz在高变区存在30个不连续氨基酸缺失。GP5序列比对结果显示,GDgz在GP5抗原表位上有氨基酸突变,表明GDgz属于美洲型高致病性毒株传代致弱的疫苗株,且在抗原表位上有一定程度的突变。     

猪繁殖——呼吸综合症

本文对猪繁殖——呼吸综合症的病原、致病机理、临床症状、病理变化、流行病学、诊断和综合防治进行了综述。     

4株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离和鉴定

为了进一步分析本次猪暴发高发病率和高死亡率疫情的病因,本研究利用病毒分离与鉴定方法,将4份RT-PCR鉴定为单纯PRRSV阳性的组织病料,接种Marc-145细胞,经RT-PCR、IFA和电镜鉴定成功的分离到4株PRRSV,TCID50为10-6.5/0.1ml,命名为BJSY-1、BJPG、BJSD和BJBLZ株.本研究建立的方法为PRRS的诊断及防制提供了技术保障.     

猪繁殖和呼吸综合征病毒分离与鉴定

在对国内某地区７个患病猪群流行病学调查的基础上，用Ｍａｒｃ－１４５细胞培养从４个猪群流产胎儿分离到３株导致细胞病变的病毒－Ｊ１，Ｊ２和Ｊ３株。它们对氯仿和热，甲醛，酸，碱均敏感。病毒粒子呈球状，直径３０－８０ｎｍ，负染后病毒粒子大小８０－１００ｎｍ，在Ｍａｒｃ－１４５细胞质内增殖，５－溴－２’－脱氧尿核苷对其元抑制作用。结合血清学试验，鉴定３个毒株均为猪繁殖和呼吸综合征病毒，可能为美洲型ＰＲＲＳＶ     

猪繁殖与呼吸综合征诊断技术研究进展(综述)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是能够引起母猪的繁殖障碍和新生仔猪呼吸症状的一种严重危害养猪业的传染病。20世纪90年代以来，此病已几乎传播到世界各养猪国家，造成世界养猪业严重经济损失。此病在中国的流行和分布也日益广泛，危害也日益严重，故受到国内外学者的高度重视，对本病的研究也正在逐渐深入。特别是诊断和检测技术的研究正日益受到关注，并建立起了一些新的方法和技术，如RT-PCR、阻断ELISA、原位杂交(ISH)等，同时，一些传统的诊断检测技术也得到了改进。这都为PRRSV的诊断和检测提供了新的思路和方法。     

HP-PRRS临床病理学分析与比较研究

目的、方法:为探讨猪HP-PRHS致病特点、发病机制和临床病理学表现,应用病理组织学方法对HP-PRRSV病猪进行系统病理观察,同时比较分析HP-PRHS和猪瘟、圆环病毒、伪狂犬、传染性胸膜肺炎及附红细胞体分别混染后,以及经典PRRS与HP-PRRS的病理学表现的差异.结果:HP-PRHS病猪表现高热,皮肤发红,眼睑水肿,肺脏出血、淤血、肉样实变,淋巴结出血,淋巴滤泡单核细胞浸润;与猪瘟或圆环病毒混染,病猪全身组织器官多发性出血.与伪狂犬病毒混染,病猪痉挛,呕吐,肝脏有白色坏死灶.神经胶质细胞内镜检可见嗜酸性包涵体;与传染性胸膜肺炎病原体混染,病猪气管充满泡沫状血色渗出物,肺脏表面有纤维素性物质;与附红细胞体混染,仔猪多发病,可视黏膜苍白,血液稀薄、皮下脂肪黄染;经典PRRS虽然有传染性,但病理变化不明显.结论:HP-PRHSV具有组织泛嗜性,引起多组织出血,导致多器官功能衰竭,故HP-PRRS临床表现明显;HP-PRRS混染其他病原后,临床症状和病理损伤较单纯PRRS严重,且死亡率升高;在临床病理学上,HP-PRRS与经典PRRS可以鉴别诊断.     

猪繁殖与呼吸综合征自然病例病理学研究

通过对某猪场猪的发病情况调查、临床症状观察、病理学检查及PCR检测,结果表明：该猪场所爆发的是猪繁殖与呼吸综合征;妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感,并表现为典型的临床症状;病理变化主要为肺间质性肺炎、非化脓性脑炎、急性淋巴结炎、脾自髓淋巴细胞减少,以及肾小管上皮细胞散在性变性坏死及管腔内有滴状物、血管周围和间质组织炎性细胞浸润,肝细胞变性和坏死,心、胃和肠等部位可见到血管周围和间质组织炎性细胞浸润。     

2006年-2008年河南省PRRSV分子流行病学调查

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株的NSP2,ORF5-7基因的核苷酸序列,设计合成5对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出10株PRRSV河南地方株的NSP2和ORF5-7片段,将扩增片段克隆到pMD-18T载体并进行测序。应用DNAStar序列分析软件对分离株的NSP2和ORF5-7基因和其推导的氨基酸序列与不同来源的PRRS毒株进行了同源性比较,结果表明PRRSV河南分离株的NSP2和ORF5-7基因与不同来源美洲型毒株之间的同源性分别为89.1%-98.1%和81.4%-96.1%,而与欧洲型毒株之间的同源性仅为46.7%-61.7%和44.7%-45.9%;同时将PRRSV河南分离株NSP2和ORF5-7基因的推导氨基酸序列与其他美洲型PRRSV毒株进行变异分析比较,证实了PRRSV河南分离株NSP2和ORF5-7基因发生了变异。     

PRRS病毒核衣壳蛋白基因的原核表达

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计1对引物，用RT—PCR扩增出美洲型PRRSV的核衣完蛋白(N)基因，克隆到pGEM—Teasy载体中，再亚克隆到表达载体pGEX—6p—1谷既甘肽—S—转移酶(GST)基因的下游。重组质粒转化大肠杆菌BL21，用IPTG于37℃条件下诱导，经SDS—PAGE和Western blotting分析，GST—N融合蛋白的分子质量约为39．5ku，另3种不同大小的GST—N降解产物，分子质量分别为33．0、30．5和27．5ku，其中39．5和30．5ku的降解产物分别占菌体蛋白的30．9％和15．3％。结果表明：PRRSV核衣壳蛋白基因在大肠杆菌中以GST融合蛋白的形式得到高效表达，且表达产物能与PRRSV抗体阳性的猪血清发生特异性反应，可作为PRRS诊断抗原。     

间接血凝试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体

以猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒致敏猪红细胞作诊断液,用间接血凝试验（IHA）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体。检测了可疑猪场80份血清样本,PRRS阳性32份,阳性率40%,与ELISA试验比较符合率98%。用此方法检测PRRS疫苗免疫猪血清,发现其抗体水平在初免后15天升高,二免后15天达最高峰,二免后45天抗体水平消失。