流感病毒 HA 受体结合位点抑制剂研究进展

目前临床所用控制流感病毒的药物和疫苗受到病毒耐药性、疫苗滞后性等诸多因素的限制,使能阻止病毒侵入宿主细胞的抑制剂成为当前研究的热点。唾液酸是流感病毒囊膜表面血凝素（HA）的受体,但研究表明唾液酸并不适合作为研制流感病毒侵入宿主细胞抑制剂的结构模型。研究发现流感病毒的HA 受体结合位点必须外露才能与宿主细胞受体结合,因此 HA 受体结合位点可以被宿主免疫系统监视,成为抗体潜在的靶向契合位点。随后发现的 HA 受体结合位点抗体能与 HA 受体结合位点的保守氨基酸残基结合,能有效阻止流感病毒感染宿主。因此,可用 HA 受体结合位点抗体作为流感病毒感染抑制剂的模型,研制流感病毒抑制剂。论文就流感病毒 HA 的分子结构和功能,HA 结合受体的机制,HA 受体结合位点抗体以及该类抗体对流感病毒的抑制效果进行了阐述,以期对以 HA 受体结合位点抗体为模型研制流感病毒感染抑制剂提供帮助。     

流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）１．７ｋｂ的ＨＡ基因,将其克隆到ｐＵＣ１９的ＢａｍＨＩ位点,筛选到阳性重组子 ｐＵＣＨ５。然后将 ＨＡ基因亚克隆到杆状病毒转移载体 ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ,筛选到重组转移载体ｐＢａｃＨ５。经过序列分析证明阅读框架正确后,在脂质体转染试剂介导下,ｐＢａｃＨ５与线性化的杆状病毒 ＤＮＡ（Ｂａｃ－Ｎ－Ｂｌｕｅ ＤＮＡ）共转染Ｓｆ９昆虫细胞。重组杆状病毒经三轮蚀斑纯化,获得纯化的重组杆状病毒ｒＢａｃＨ５。提取重组杆状病毒ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增证明目的基因片段插入到杆状病毒基因组中。间接免疫荧光染色试验、血凝试验和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验结果表明 ＨＡ基因在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞表面获得表达。重组杆状病毒表达的ＨＡ蛋白能够凝集公鸡红细胞,血凝价１２８０－２５６０ＨＡＵ／ｍｌ。ＨＡ蛋白在杆状病毒表达系统的成功表达,为禽流感亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

流感病毒受体特异性检测新技术

新流感病毒及血凝素(HA)受体特异性研究需要分析大量相关毒株或HA,现有的很多流感病毒受体特异性分析方法存在准确性差、效率低、成本高等问题。中国科学院微生物研究所李学兵研究员领导的科研团队研发了一种高通量、可视化、特异性的流感病毒受体特异性检测新技术,相关内容于2014年5月发表在《ACS Nano》杂志。     

流感病毒血凝素受体分子的研究进展

血凝素是流感病毒的重要糖蛋白,它的受体研究是目前国际上的热点。作者针对流感病毒的HA受体分子从分子学基础、种属特异性和致病性方面作一综述。     

流感病毒受体结合与抗原性改变的分子基础

流感病毒的血凝素(HA)与宿主细胞表面糖链末端唾液酸(SA)的结合对流感病毒感染宿主起着至关重要的作用。禽流感病毒对SAα2-3Galβ糖链以及人流感病毒对SAα2-6Galβ糖链的结合特异性使跨种属传播受阻,但不同的流感病毒在猪和陆地家禽等中间宿主体内发生基因重配作用后,可使部分禽流感病毒获得适应性感染人的能力,另一方面,流感病毒自身的基因突变,尤其是受体结合部位周围的特定位点,可导致流感病毒受体结合特异性发生转变,而病毒的变异伴随着自身糖修饰和抗原表位的改变,使机体对其免疫识别结合的能力也随之发生变化。这些分子水平的改变都将对病毒相关的宿主受体结合和免疫应答反应产生影响。     

流感病毒受体识别以及流感病毒跨宿主感染的分子机理

近年来禽流感病毒在亚洲流行,使家禽养殖业受到很大冲击。令人担心的是,从东南亚疫情爆发地区还报道了人类感染禽流感病毒的病例,我国湖南等省也有人类感染禽流感病毒。目前疫情虽然已经得到控制,但是H5N1亚型禽流感病毒将长期在亚洲存在。由于流感病毒的自身基因组极易产生变异和亚洲地区家禽业的养殖模式特点,禽流感病毒极有可能进化成可以跨宿主感染的新型流感毒株。本文对流感病毒的受体识别和跨宿主感染的分子机理作一综述,并讨论若出现流感大流行时的药物控制措施。     

流感病毒受体特异性间接ELISA检测方法的建立

本研究采用过碘酸钠法对去唾液酸胎球蛋白进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,然后通过两种不同类型的唾液酸转移酶对HRP去唾液酸胎球蛋白进行唾液酸标记,使其成为只含有单一受体的载体。利用MAA和SNA以及已知受体特性的两株流感病毒对唾液酸标记的HRP去唾液酸胎球蛋白进行受体结合特异性鉴定。结果表明,该方法可以快速准确的鉴定流感病毒的受体特异性。     

鸭流感病毒HA基因遗传变异分析

本文根据近年来中国医学机构发表的分离自我国鸭群的流感病毒HA基因,与我国正在使用的流感疫苗等毒株的HA基因进行了遗传进化分析。结果显示,目前我国流行的鸭流感病毒与H5N1 Re-5最接近,但是也有一定程度的变异。     

甲型流感病毒血凝素糖基化的生物学效应

糖基化是甲型流感病毒(IAV)血凝素(HA)的一种重要翻译后修饰.HA糖基化在IAV的演化和适应过程中发挥重要作用.现从IAV的免疫应答、HA受体亲和性和病毒的适应性等角度,详述HA糖基化修饰的生物学意义,以此为创建基于HA糖基化依赖机制的新型流感疫苗提供指导.     

流感病毒受体特异性红细胞检测试剂的制备及初步应用

为优化流感病毒受体特异性的检测方法,本研究利用霍乱弧菌神经氨酸酶(VCNA)对鸡红细胞(RBC)进行去唾液酸化处理后,再分别通过α2,3和α2,6唾液酸转移酶以CMP-唾液酸作为底物进行不同唾液酸受体的标记,使其分别仅含SAα2,3Gal和SA2,6Gal受体,利用血凝试验和流式细胞仪检测其标记效果。流式检测结果显示,经过α2,3唾液酸转移酶处理的红细胞只含有SAα2,3唾液酸受体,而α2,6唾液酸转移酶只将SAα2,6唾液酸受体标记到红细胞表面。将两种红细胞分别经过人流感病毒和禽流感病毒的检测,表明该方法可以快速鉴定流感病毒的受体特异性。本研究所建立的流感病毒受体特异性标记和检测方法为流感病毒宿主嗜性范围的检测提供了一种有效的技术手段。     

A型流感病毒毒力因子研究进展

A型流感病毒是致人和禽类感染、致病的重要病原体 ,病毒能否感染宿主和致病 ,其毒力是由多因子决定 ,并由基因组编码的 1 1种功能蛋白分工协作完成。流感病毒可通过表面抗原的变异逃避宿主保护性免疫 ;HA是毒力的主要决定因子 ,NA、PB2、NS1和新发现的 PB1 -F2等蛋白质从不同的方面起作用     

病毒受体及其研究现状

受体在宿主细胞与病毒的相互作用中起着极其重要的作用。病毒受体的特性与病毒的宿主范围、组织嗜性有密切关系,是病毒致病性的主要因素之一。病毒受体的研究方法有经典的研究方法,也有现代分子生物学方法。在病毒受体的研究中,通常以分离纯化的细胞膜代替活体细胞来研究病毒受体。通过对病毒与细胞受体相互作用的深入研究,人们已经发现很多受体阻断剂例如植物凝集素和肝素等物质可以阻断病毒与受体的结合,从而为病毒病的防控提供繁殖一些有效的新方法。     

4株不同亚型流感病毒NP基因的原核表达

为了进一步研究A型流感病毒核蛋白功能及在诊断中的应用,采用RT-PCR技术分别扩增H1N1、H3N2、H5N1、H9N2等4株不同亚型流感病毒的NP基因,分别将其克隆到原核表达载体pET30(a)上,在大肠埃希菌中进行诱导表达.SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,H1N1亚型流感病毒NP蛋白得到表达,并且能分别与H1N1和H5N1亚型流感病毒的鼠高免血清发生特异性反应,具有良好的反应活性;而H3N2、H5N1、H9N2亚型流感病毒的重组NP蛋白未获得表述.本研究结果表明,不同毒株的NP蛋白在大肠埃希菌中的表达具有一定差异性,为把NP蛋白作为诊断抗原的开发、ELISA诊断方法的建立以及蛋白功能的研究奠定了基础.     

表达猪流感病毒血凝素基因的重组腺病毒的构建及免疫原性分析

通过细菌内同源重组的方法成功构建了表达H3N2亚型猪流感病毒血凝素的重组腺病毒。首先将血凝素基因亚克隆到穿梭载体质粒pAdeno Vator-CMV5-IRES-GFP上，与腺病毒基因组质粒pAdeno Vator△E1／E3共转化大肠杆菌BJ5183菌株，经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAd—HA—GFP。将该重组质粒转染293细胞以包装重组腺病毒。根据报告基因GFP的表达及Western-blot分析，证明获得了可正确表达猪流感病毒血凝素的重组腺病毒rAd—HA—GFP。重组腺病毒经一次性腹腔注射接种昆明鼠，2周后可检测到血凝抑制抗体，并且抗体至少可以持续12周，证实重组腺病毒介导表达的血凝素蛋白具有良好的免疫原性，可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。     

A型流感病毒M2蛋白研究进展

M2蛋白是A型流感病毒所特有的一种结构保守的非糖基化的跨膜蛋白,主要在病毒脱壳时酸化病毒粒子的内部环境,在表面血凝素糖蛋白合成过程中作为质子通道调节高尔基体跨膜转移通道的pH.其核苷酸序列高度保守,几乎不发生变异.其25位～43位氨基酸多肽是金刚烷胺类抗流感病毒药物的作用靶位,氨基酸极小变异都可能导致流感病毒抗药性的产生.M2蛋白胞外区域的氨基酸残基多肽(M2e)的特异性抗体可以在感染流感病毒的动物血清中检测出来,将M2e与相关佐剂联合使用可极太的提高机体对流感病毒的免疫力,在病毒感染中起重要作用,是一种潜在的交叉保护性抗原,常被用来探索具有广谱性和持久性的流感"通用疫苗".     

流感病毒基因组结构及其编码蛋白研究进展

由流感病毒引起的流感是严重危害人类和畜禽健康的一种传染病。此病的暴发给世界上许多国家和地区造成了巨大的经济损失。对流感病毒基因组结构及其编码蛋白质的研究有助于进一步加强对流感的治疗和预防。流感病毒含 8个负链单股独立的 RNA片段 ,共编码1 0种蛋白。每种蛋白具有不同的结构和功能。文章主要对流感病毒不同基因片段的结构特征及其编码的结构蛋白及非结构蛋白的形态结构、功能、免疫学特性等方面的分子生物学最新研究进展进行了综述     

A型流感病毒NS1蛋白的结构与功能

A型流感病毒片段8编码的NS1蛋白是病毒复制和传播的重要调节蛋白。它含有3个功能区,即RNA结合区,eIF4GI结合区和效应区。NS1蛋白在A型流感病毒感染细胞中高水平表达,它的主要功能是抑制NF-κB(nuclear factor-κB)活化和IFN(inter-feron)-α/β介导的抗病毒作用,抑制Jun N末端激酶(jun N-terminal kinase,JNK)和AP-1(activating posttranslation)转录因子活化;下调病毒感染细胞凋亡;促进病毒基因表达,抑制宿主mRNA加工和转运。NS1蛋白的深入研究,为今后预防和治疗A型流感病毒寻找突破口。     

3种细胞培养流感病毒的比较

将流感病毒分别接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)、Vero和MDCK细胞,并改变细胞维持液中FBS浓度,然后检测胰酶的用量、细胞培养流感病毒的最佳时间、细胞接种病毒最佳吸附时间和接种剂量、收获细胞液后的血凝素(HA)滴度.结果表明,胎牛血清对病毒的繁殖有明显抑制作用;加入约4 μg/mL的胰酶可提高病毒产量.最佳收获时间为60 h～72 h,吸附时间为90 min,接种剂量为0.1 mL/L;CEF、MDCK细胞上病毒HA滴度高于Vero细胞.     

猪流感病毒血凝素基因的研究进展

猪流感是由猪流感病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性呼吸道疾病,可继发和并发多种细菌病和病毒病,已日益成为危害世界猪群的主要传染病之一。猪流感病毒血凝素基因作为流感病毒表面最主要的抗原基因,其表达蛋白具有丰富的生物学作用,对流感病毒的致病性起着主导作用。作者主要对猪流感病毒血凝素基因的研究进行了综述,为进一步防治猪流感及开发新型疫苗提供帮助。     

A型流感病毒PB1-F2蛋白的结构与功能研究进展

PB1-F2蛋白是一种流感病毒蛋白,蛋白通过诱导巨噬细胞凋亡降低宿主的免疫反应.PB1-F2蛋白介导的细胞杀伤作用通过阻碍专职抗原递呈细胞对后天免疫的调节而增加继发细菌感染的可能性,从而使病毒的致病性增加.现就PB1-F2蛋白结构与功能方面的研究进展做一综述.