燕山板栗叶片基因组AFLP反应体系建立

该文以燕山板栗嫩叶为材料,利用改良的CTAB法提取高质量的总DNA,通过优化了酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱.研究结果表明:① 应用经过改良的CTAB法可获得用于构建板栗AFLP体系的高质量DNA;②单独酶切和单独酶连体系比酶切酶连共体系效果更好,确定了板栗基因组DNA AFLP分子标记反应体系;③在所分析的9种引物组合中EAAC＋M-CAA、E-AAC＋M-CAT和E-AGT＋M-CAT 3个引物均获得较好的多态性.其中以E-AGT＋M-CAT引物对组合的扩增条带信号强度一致性好,条带分布均匀,得到了稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带.      

华北堇菜属植物化学分类初探

堇菜属植物是一类具有开发价值的植物，它既能入药，又可观赏和食用。历史上，虽经许多学者，尤其是W．Becker（1916）进行过系统的研究，但至今仍存在许多分类学问题。Jacobs和Moors（1971）认为：本属组的划分还末确定，有待进行多方面的研究。周荣汉（1988）指出：植物叶乙醇提取液紫外吸收光谱具有种的特异性。本实验就是此技术在虽菜属中的首次尝村＿给县委明．叶乙醇提取液紫外吸收光谱不仅具有种的特异性，而且对本属组的划分也有一定的价值。取正常发育的叶片，经干燥、剪碎、研磨成浆（75％乙醇）、恒温回流提取，过滤及苹取等步…     

悬铃木AFLP分子标记技术体系的建立

采用改进的CTAB方法,从悬铃木叶片中提取基因组DNA,所得DNA样品的A260/A280值为1.7～1.9,琼脂糖凝胶电泳主带清晰、DNA纯度高、较少降解、不含酶反应抑制剂,可被MseⅠ和PstⅠ两种限制性内切酶完全酶切,从20对引物中筛选出6对带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物,分别为: M74P50,M89P57,M74P26,M36P16,M80P66,M23P66.通过酶切连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验过程,成功建立了悬铃木AP反应体系,得到了清晰的指纹图谱,试验结果重复性好.     

板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系等研究奠定了基础。研究结果表明:①DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应。以初展开的嫩叶提取的板栗叶片总DNA纯度最高,所含蛋白质、小分子杂质少,改良的CTAB提取法可用于板栗AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。②先进行酶切后再进行酶连的反应体系比酶切酶连一起进行的体系效果更好。板栗基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量500ng,反应体积为25μl,10×Y+/TanqoTMBuffer2.5μl,BSA0.8μl,EcoRI5U,MseI5U。连接反应体系中T4DNA连接酶浓度2U即达最佳效果。酶切、酶连反应最佳温度均为37℃。③以板栗为材料进行AFLP标记时,E AAC+M CAA、E AAC+M CAT和E AGT+M CAT三个引物均获得较好的多态性。其中以E AGT+M CAT引物组合的扩增条带信号强度一致性好,条带分布均匀,能够得到稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带,可进行中国板栗的遗传变异分析。     

橡胶树AFLP银染体系建立前期的准备

以橡胶树杂交群体为材料,来寻找适合于研究橡胶树的AFLP技术体系的建立,优化是在多方面原因的,在众多关键因素的影响中,其中优化的关键前提为质量较高的基因组DNA。本实验采取CTAB改良法提取DNA为橡胶树的AFL,P技术后续工作顺利开展打下基础。     

我国紫薇属植物AFLP分子标记体系的优化

以采自广西、云南和河南等地的紫薇属Lagerstroemia植物紫薇L.indica,南紫薇L.subcostata,福建紫薇L.limii和桂林紫薇L.guilinensis叶片为材料,利用改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法提取叶片基因组DNA,获得了高质量的紫薇叶片DNA,并以其基因组DNA为模板进行了酶切连接,利用酶切连接的产物稀释一定倍数作为预扩增的模板,最后以稀释一定倍数的预扩增产物进行选择性扩增,进行紫薇和南紫薇的AFLP（扩增片段长度多态性）银染反应体系的优化。AFLP体系中每一步反应都设置了不同的反应体系,采用了160对引物作为初选引物,筛选出了10对适合紫薇基因组扩增的引物。结果表明,适宜紫薇基因组扩增的最佳酶切、预扩增和选择性扩增体系为：酶切连接体系1;预扩体系3;选扩体系3,反应体系中Mg2＋质量浓度为1.2×10-6kg.L-1时扩增效果较好。     

梅花基因组AFLP银染反应体系的建立和优化

采用改进的SDS DNA提取方法从梅花的嫩叶和老叶中提取获得总DNA .所得DNA样品的OD2 6 0 OD2 80 值在1 7～ 1 9之间 ,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且得率高 .该体系对原提取程序作了多处简化 ,使操作简便、快捷、高效 ,适合于梅花DNA提取 ,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂 ,可被限制性内切酶MseⅠ和EcoRⅠ完全酶切 ,适合AFLP PCR反应应用 ,得到清晰的指纹式样 .     

紫薇叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以紫薇叶片为材料,利用改进的酚一氯仿法,提取到了高质量的紫薇叶片DNA,并建立了20个紫薇品种和南紫薇的AFLP银染反应体系,首次在紫薇DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验过程取得了成功,得到了清晰的紫薇品种的AFLP指纹图谱,为紫薇基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究奠定了理论基础．     

中国堇菜属(堇菜科)一未详知种

Viola suavis M. Bieb. (Violaceae), 在我国仅记录于未出版的资料《新疆植物名录》中,并未对其进行任何说明.在查阅了存放于中国科学院新疆生态与地理研究所标本馆(XJBI)的标本和文献资料后,确认了该种在我国有分布,且对其在我国的分布情况和形态特征进行了报道,并给予绘图.     

牡丹基因组AFLP银染反应体系的建立和优化

采用改进的SDS方法,从牡丹成熟叶片中提取基因组DNA,所得DNA样品的A260/A280值在1.7～1.8之间,琼脂糖凝胶电泳主带清晰、DNA纯度高、较少降解、不含酶反应抑制剂,可被MseⅠ和PstⅠ两种限制性内切酶完全酶切.通过酶切连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验过程,成功建立了牡丹品种AFLP银染反应体系,得到了清晰的指纹图谱.对扩增结果进行聚类分析,得到了23个牡丹品种的聚类分析图.     

黑龙江省乌苏里江流域堇菜属植物资源调查

乌苏里江流域植物资源较为丰富,堇菜属植物种类也较多。2011年春至2013年秋,对乌苏里江流域堇菜属植物资源进行专项调查,共发现有堇菜属植物13种,常见种9种。其中,库页堇菜为黑龙江省新记录种,同时,对堇菜属植物的地理分布、利用价值等内容进行了阐述。乌苏里江为中俄界江,此次植物调查形成的名录收录了俄文俗名,为中、俄两国综合利用植物资源提供技术参考。     

青阳参叶片DNA的提取与AFLP反应体系的建立

以青阳参叶片12个样品为材料,利用改良的CTAB法,提取得到高质量的青阳参DNA,通过对AFLP分析过程中DNA的提取、酶切、连接、预扩增、选择性扩增、电泳和银染等诸多因素进行优化、分析,建立了一套适合青阳参的AFLP技术优化体系,得到了清晰的青阳参AFLP指纹图谱,为青阳参基因库的建立、遗传多样性研究等奠定了理论基础。     

4种楠木AFLP反应体系优化建立

采用核酸电泳缓冲液（TNE）结合十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）提取的高质量楠木Phoebe基因组脱氧核糖核苷酸（DNA）可满足扩增片段长度多态性（AFLP）分析的要求。利用浙江楠Phoebe chekiangensis基因组DNA优化建立楠木AFLP反应体系如下:酶切反应300 ng基因组DNA,0.3 L缓冲液4,0.3 L牛血清白蛋白（100 BSA）,50 nkat EcoR,25 nkat Mse,双蒸水加至30.0 L放置37 ℃恒温箱酶切4 h,聚合酶链式反应（PCR）仪上65 ℃15 min;连接反应20.0 L酶切产物,2.5 L T4缓冲液,666.8 nkat T4 连接酶,5 pmol EcoR接头,10 pmol Mse接头,双蒸水加至25.0 L,16 ℃连接过夜（10 ~14 h）;预扩增反应2.0 L连接产物,2.0 L 10 缓冲液,31.25 nmol镁离子,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,4 pmol脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）,预扩增引物（E＋A,M＋C）各6 pmol,双蒸水加至20.0 L;选扩增反应稀释40倍的预扩产物2.0 L,2.0 L 10缓冲液,31.25 nmol镁离子,4 pmol dNTP,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,选扩增引物（M＋CNN）15 pmol,选扩增引物（E+ANN）12 pmol,双蒸水加至20.0 L。利用上面体系在64对选扩引物中筛出13对适于浙江楠AFLP分析的最佳引物组合。图5表3参24     

不同堇菜属植物根和叶显微结构比较研究

对沈阳市常见的4种堇菜属植物的根和叶的显微结构进行观察和研究,比较其营养器官结构上的差异。结果表明:4种堇菜属植物在根和叶的显微结构上,均有不同程度的差异;根的木质部、叶的栅栏组织、海绵组织等,差异尤为显著。紫花地丁和早开堇菜的根和叶解剖结构差异明显,应为2个不同的种。     

堇菜属Viola植物资源的园林开发前景探讨

介绍了中国堇菜属野生植物的资源数量、分布及观赏特性,并分析了堇菜属植物的园林开发前景。     

华北地区堇菜属植物的果实和种子形态学研究

就华北地区分布的22种堇菜属植物进行了果实和种子形态方面的观察,并对一些有争议的分类学问题进行了探讨。本研究认为果实和种子形态对本属分类具有一定价值;支持将毛萼堇菜作为细距堇菜亚种;北京堇菜与蒙古堇菜应该是独立的2个种。     

枸杞属AFLP分析体系优化与建立

以枸杞属种质资源为试材,对AFLP分析过程中包括DNA的提取质量和浓度、Mse I/EcoR I以及T4 DNA连接酶的浓度、反应时间等影响因素进行了研究.建立了一种适于枸杞AFLP银染技术的优化体系.该体系中各优化因素为:模板DNA的用量为300～400 ng,酶切体系中Mse I和EcoR I各加入3 U,T4 DNA连接酶加入2.0U,采用酶切与连接在同一体系中一步完成,其酶切温度为37℃,反应时间为5 h.与22℃连接过夜.并对预扩增、选择性扩增和银染的效果进行了检测,以引物M+CAC/E+AGG构建了枸杞种质资源的AFLP指纹图谱,该图谱扩增带多,多态性强,且质量好.     

安徽堇菜科植物新资料

[目的]丰富安徽省堇菜科植物资料。[方法]野外采集标本并记录照片与地理信息,查阅中国堇菜属植物资料及安徽省植物专著,并进行比较。[结果]在滁州琅琊山森林公园发现了堇菜科(Violaceae)堇菜属植物——西山堇菜(Viola hancockii W.Becker),为安徽省新记录,并提供详细的形态描述与照片,凭证标本保存于安徽科技学院标本室(AHSTU)。列出最新的安徽省堇菜属植物名录。[结论]西山堇菜为安徽省植物新记录。     

部分鸢尾属植物的AFLP标记

利用AFLP技术,选择EcoRI/MesI酶切组合,从48对EcoRI,3/MesI+3引物组合中筛选出6对引物进行选择性扩增,检测了鸢尾属植物26个样品基因组的DNA多态性,共扩增出536个遗传位点,并通过Jaccard的方法将电泳谱带矩阵转化为遗传相似性系数矩阵,进行了UPGMA聚类分析.26个样品的遗传相似性系数...     

苹果AFLP分析体系的建立

以１２个苹果砧枯木基因型为试材,建立了扩增酶切片段长度多态性（ＡＦＬＰ）分析体系,对其分析过程中ＤＮＡ提取、双酶切、连接、预扩增、标记和选择性扩增的效果进行了检测。用Ｐ３２Ｍ６４引物构建了供试苹果砧木基因型的ＡＦＬＰ指纹图谱。该指纹图谱拥有扩增条带１０５条,多态性带６７条（占６３．８％）,条带清晰可辨,扩增信号强,无背景干扰。讨论了ＡＦＬＰ分析的影响因素。