抑制稗草生长的木霉菌REMI转化子构建与功能初探

创制新的木霉菌突变株,为筛选新的抑草类化合物奠定基础。通过REMI插入突变技术,以Trichoderma atrovirideT23为出发菌,进行了REMI转化子构建。对得到的转化子进行了PCR检测,分别利用抗潮霉素和氨苄青霉素基因为引物进行特异性扩增,并对发酵产物细分为分生孢子、超声波PBS法破碎孢子和发酵液,分别对稗草生长的生物活性进行测试。获得了18个转化子,通过继代培养和PCR扩增,证明线性pV2质粒DNA已成功插入木霉菌基因组。从REMI创制的木霉菌突变株库中,筛选出8株有抑草活性转化子(TaA2、TaB3T、aB7、TaE2、TaE8T、aH8、TaJ6和TaJ9),其发酵液具有抑制稗草的活性,并对水稻生长安全。经测试发酵产物对稗草生长的生物活性,获得了具有抑草活性及稳定性均理想的转化子TaB3。REMI方法所创造的转化子可较高效地筛选出具有抑草功能的突变体。     

棘孢木霉菌剂对黄瓜生理特性及产质量的影响

为改善黄瓜生理特性,保证其高产栽培,利用苗期和成株期盆栽试验,以无菌水为对照,分别施入10~3、10~4、10~5、10~6和10~7 cfu/g棘孢木霉(Trichoderma asperellum)菌剂,测定不同菌剂施用量后的黄瓜幼苗形态建成、生理指标、质量和产量性状。结果表明:棘孢木霉菌剂不同施用量均能有效提高幼苗株高、茎粗、叶面积、全株鲜重、全株干重、根冠比和壮苗指数,其中10~6 cfu/g棘孢木霉菌剂处理对黄瓜幼苗形态建成和物质积累的促进效果最好;棘孢木霉菌剂不同施用量均能改善黄瓜幼苗的生理特性,其中10~6 cfu/g棘孢木霉菌剂处理对黄瓜幼苗叶片叶绿素含量、根系活力、硝态氮含量、硝酸还原酶活性、可溶性糖含量和可溶性蛋白含量的促进效果最好;同时,棘孢木霉菌剂不同施用量均能促进黄瓜品质和产量形成,其中10~6 cfu/g棘孢木霉菌剂处理对黄瓜品质和产量促进效果最好,黄瓜果实可溶性糖、维生素C、可溶性蛋白、可溶性固形物含量和果实产量分别比CK提高了78.43%、31.55%、38.47%、8.63%和26.20%。综上,棘孢木霉菌剂通过改善黄瓜幼苗生理特性,促进幼苗生长,提高了黄瓜产量和品质性状,以10~6 cfu/g棘孢木霉菌剂应用效果最好,研究成果可为木霉菌剂的开发利用和黄瓜的优质栽培提供技术支撑。     

哈茨木霉菌使用方式对黄瓜砧木出苗及幼苗生长的的影响

为研究木霉菌菌剂使用方式对黄瓜砧木种子出苗及幼苗生长的影响,以黄瓜砧木品种"砧大力1989"和哈慈木霉菌孢子粉为试验材料,研究了木霉菌菌剂拌基质、拌种、浸种和播种后喷施4种方法对黄瓜砧木种子出苗时间、苗出齐时间、出苗率及幼苗生长的影响.结果表明:4种木霉菌菌剂使用方式都能缩短砧木种子的出土时间,且4种处理方式中,播种后穴盘喷施木霉菌溶液处理砧木种子出土的时间最短,为14.4h.此外,喷施方法明显缩短了砧木幼苗的出齐时间,齐苗时间为52.8h;同时喷施木霉菌菌剂溶液的使用方式明显提高出苗率,达到99.6％.与对照组相比,拌基质处理能显著提高植株的株高,浸种处理显著提高了植株的干鲜重,而拌种处理明显促进了植株根系的生长.     

深绿木霉T1和哈茨木霉T21抑菌活性及对番茄幼苗促生效果研究

为探究深绿木霉（Trichoderma atroviride）T1和哈茨木霉（Trichoderma harzianum）T21对7种植物病原真菌的抑菌活性及对番茄幼苗的促生效果,利用平板对峙法、平板对扣法、固体稀释法和凹玻片法研究其抑菌活性,并通过灌根法研究木霉菌对番茄幼苗的促生效果,平板对峙试验结果表明：2株木霉对7种病原菌均具有抑菌活性,其中深绿木霉T1的抑菌率为31.81%～86.16%,哈茨木霉T21的抑菌率为80.53%～91.82%;深绿木霉T1挥发性代谢产物对7种病原菌均具有抑菌活性,抑菌率为39.78%～76.78%,而哈茨木霉T21的挥发性代谢产物对7种病原菌均无抑菌活性。固体稀释法结果表明：2株木霉的无菌发酵液对7种病原菌均具有抑菌活性,其中深绿木霉T1的抑菌率为59.22%～75.22%,哈茨木霉T21的抑菌率为49.89%～79.21%。凹玻片法结果表明：2株木霉菌对病原菌孢子萌发均有抑制活性,其中深绿木霉T1无菌发酵液对病原菌孢子萌发抑制率达到44.66%～76.69%,哈茨木霉T21无菌发酵液对病原菌孢子萌发抑制率达到49.87%～100%。经2株木霉孢子...     

生物型种衣剂诱导后黄瓜叶片蛋白质组学初步研究

以木霉菌(Trichoderma atroviride)T23的REMI突变株发酵液为主要原料配制生物型种衣剂处理黄瓜种子,然后播种,2~3叶期挑战接种白粉菌,调查病情指数并取样。结果表明:该生物型种衣剂能够明显提高黄瓜幼苗对白粉病的系统抗性,对白粉病相对防治效果达70%~75%。该研究建立了黄瓜叶片蛋白质提取和双向电泳分离技术。通过双向电泳及相应的分析软件(PDQuestTM2-D software)可将不同处理的幼苗叶片蛋白进行分离。结果发现种衣剂处理的叶片产生22种上游调控蛋白和7种下游调控蛋白,与对照的蛋白质组图谱相似系数为0.813。利用质谱分析发现黄瓜叶光合作用相关蛋白与抗白粉病有一定关系。     

木霉菌固体菌剂使用方法对蔬菜种苗生长的影响

为研究木霉菌剂对蔬菜种苗生长的影响,试验以番茄、黄瓜、辣椒、茄子为试验材料,设置木霉菌孢子粉拌土、浸种、喷雾3种使用方式,清水处理为对照,研究了木霉菌菌剂不同使用方式对4种蔬菜幼苗生长的影响。结果表明:拌土、浸种、喷雾处理能显著提高番茄、辣椒、茄子株高、干鲜重、茎粗以及根系的生长,并提高根系活力,且存在方法以及蔬菜种类之间的差异,浸种处理适用于番茄种苗生产,而浸种和喷雾对辣椒和茄子的促生效果较好;而这3种木霉菌的处理并没明显促进对于黄瓜幼苗生长。总之而言,木霉菌对蔬菜种苗的促生作用存在着蔬菜种类和使用方法之间的差异;因此,需根据蔬菜生产的需要选择最适宜的木霉菌剂施用方法。     

木霉菌REMI转化子解磷筛选及其解磷效果分析

[目的]为了获得具有防病和解磷双重功能的木霉菌REMI转化子。[方法]从康氏木霉菌(Trichoderma koningii)T30及其60株REMI(限制性内切酶介导的基因整合技术)转化子中筛选出3株解磷作用较好的转化子,并研究不同碳、氮源对转化子TK!46解磷作用的影响。[结果]结果表明,碳源对转化子解磷能力影响较小,而氮源的作用较大,其中转化子在解磷过程中最适氮源是氨态氮。[结论]该研究为研制多功能木霉剂奠定了基础,但完全揭示木霉菌解磷机理仍需进一步研究。     

绿色木霉与哈茨木霉对黄瓜幼苗促生作用机理的研究

为探究绿色木霉和哈茨木霉对黄瓜幼苗生长的影响,设置4种处理:以绿色木霉和哈茨木霉混合菌液灌根处理的黄瓜幼苗、绿色木霉灌根处理的黄瓜幼苗、哈茨木霉灌根处理的黄瓜幼苗、PD培养基灌根处理的黄瓜幼苗,对株高、茎粗、叶宽、叶绿素含量和荧光特性、丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶(POD)活性等进行测定。结果表明,与对照相比,施加混合木霉的黄瓜幼苗株高、叶宽、茎粗、叶绿素含量显著增加,最大光化学效率(F_v/F_m)、PSⅡ潜在活性(F_v/F_o)、光化学淬灭系数(q_P)、光合电子传递速率(ETR)、PSⅡ实际光量子产量[Y(Ⅱ)]以及POD活性显著增加,同时非光化学淬灭系数(NPQ)及MDA含量显著降低,表明绿色木霉和哈茨木霉混合菌液能够显著促进黄瓜幼苗生长,效果优于施加单种菌液。     

以G418抗性为筛选标记的深绿木霉遗传转化研究

【目的】探索建立以G418抗性为筛选标记的农杆菌介导的深绿木霉遗传转化方法,为木霉菌突变菌株的筛选和基因功能研究奠定基础。【方法】测试供试野生型深绿木霉菌菌株T23对G418的敏感性,构建以G418抗性为筛选标记的质粒载体p1300-neo,并将该质粒通过农杆菌导入深绿木霉T23菌株中,利用G418抗性平板筛选获得转化子,通过PCR对稳定转化子进行鉴定。【结果】T23菌株对G418具有高度敏感性,25μg/mL G418可完全抑制T23菌株的生长;构建的p1300-neo载体是可行的G418抗性标记,通过该载体获得了多株具有G418抗性的深绿木霉遗传转化子。【结论】G418抗性可以作为深绿木霉菌有效的遗传筛选标记,其在PDA培养基中的使用量为25μg/mL。     

棘孢木霉T437对黄瓜幼苗根系生理特性及立枯病防效的研究

试验以立枯丝核菌和棘孢木霉菌437配合施用,研究棘孢木霉菌437对黄瓜立枯病的防效、施用方法以及对黄瓜幼苗根系生理特性的影响。研究表明:接种棘孢木霉菌437的各处理均能显著提高黄瓜幼苗根系体积、根系鲜重、根系活力、根系总吸收面积、根系活跃吸收面积,其中CK3(只接种木霉发酵液的对照)对黄瓜幼苗根系体积、根系鲜重、根系活力、根系总吸收面积、根系活跃吸收面积促进效果最显著。在立枯病防效方面,T1(木霉菌剂和病原菌同时接种)防治效果较高。     

接种生防菌和病原菌对香蕉抗枯萎病的诱导

使用2株生防枯草芽孢杆菌A5-6,C10-1和香蕉枯萎病病原菌（Foc4）,以不同的接种方式对4～5叶香蕉组培苗进行根部接种,以苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）这3种与植物抗病性密切相关的酶活性变化为指标,研究植物产生抗性的时间和强度的变化趋势。结果表明,经过生防菌A5-6和C10-1诱导处理的叶片PAL,POD,PPO的活性均高于对照（CK）,生防菌和病原菌混合接种处理的POD和PPO酶活峰值高于生防菌和病原菌单独接种的处理。     

生防菌TB2对甘蔗叶片抗病相关酶活的诱导作用

以多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和过氧化氢酶(CAT)等5种防御酶作为植物抗病性反应指标,研究生防菌TB2和甘蔗赤腐病病菌对甘蔗植株抗病相关酶的影响。结果表明,先接病原菌后喷施生防菌TB2、先喷施生防菌后接病原菌、病原菌处理、生防菌处理等处理后,与植物防御抗病相关的PPO、POD、SOD、PAL、CAT防御酶活性均比对照组高,表明TB2和赤腐病菌均能诱导甘蔗叶片中的防御酶活性增强;先喷施生防菌后接病原菌的防御酶活性比同期先接病原菌后喷施生防菌的高,说明TB2诱导能力强于赤腐病菌。两者共同处理的甘蔗叶片中5种防御酶活性高于单独处理。可见TB2和赤腐病菌共同诱导具有协同增效作用。     

粘帚霉生防菌株发酵液对大豆幼苗中几种防御酶活性的影响

采用盆栽试验法研究了用粘帚霉生防菌株发酵液处理后的大豆叶片组织内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性变化。结果表明:3个菌株的发酵液处理大豆叶片后,4种酶的活性在大豆叶片中都有明显提高,但不同菌株发酵液处理后的酶活性提高程度不同,酶活高峰出现的时间也不同。处理后第1 d,PAL活性达到高峰,处理后第4 d,PPO活性达到最大值,处理后第5 d,SOD活性和POD活性达到高峰,说明不同的酶在大豆体内发挥作用的时间不同。粘帚霉生防菌株可通过诱导植株防御酶系活性的提高增强植株的抗病性。     

Genetic improvement of Trichoderma ability to induce systemic resistance

The beneficial applications of Trichoderma spp. in agriculture include not only the control of plant pathogens, but also the improvement of plant growth, micronutrient availability, and plant tolerance to abiotic stress. In addition, it has been suggested that these fungi are able to increase plant disease resistance by activating induced systemic resistance (ISR) . The mode of action of these beneficial fungi in the Trichoderma -plant-pathogen interaction are many, complex and not comple…     

Mechanisms involved in biocontrol and plant induced resistance by richoderma. asperellum (T. harzianum T-203)

Growing awareness of the environmental damage caused by the use of chemical substances for plant disease control in agriculture has raised the need to study biological alternatives, such as activating the defense response of plant crops by inducers not toxic to the environment. Trichoderma spp. are effective biocontrol agents for a number of soilborne pathogens, and are also known for their ability to enhance plant growth and to induce systemic resistance (ISR) in plants. In our laborator…     

生防菌诱导水稻抗病性相关酶活性的变化

将生防菌bio—2和稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）接种于正处于分蘖期的水稻植株上,测定其与植物抗病有重要相关的苯丙氨酸解氨酶（Phenlyalanine ammonia lyase PAL）、过氧化物酶（Peroxidase,POD）和多酚氧化酶（Polyphenoase,PPO）活性的变化．结果显示,接种处理后,POD活性明显高于对照,在接种后第5d。稻瘟病菌、稻瘟病菌＋生防菌bio-2处理组的POD活性达到最大值,但到接种后第8d开始略低于对照;稻瘟病菌＋生防菌bio-2、生防菌bio-2处理组,其叶片内的PAL活性仅在第1—2d内高于对照,其后均低于对照;在稻瘟病菌＋生防菌bio-2、生防菌bio-2处理组,其PPO活性除在第2d高于对照外,其余均低于对照．     

四霉素诱导水稻对稻瘟病的抗性研究

[目的]探讨四霉素诱导抗性的作用及作用机理,为其在生产实践中更好地应用提供依据。[方法]以稻瘟病为防治对象,研究四霉素对水稻叶片苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、超氧化物歧化酶（SOD）的影响。[结果]喷施四霉素后,水稻叶片PAL、POD、PPO活性明显升高,其中喷药24h后接种处理的酶活升高最明显,各处理间SOD酶活无明显差异。[结论]四霉素不仅具有较强的抑菌作用,还可能通过诱导水稻防御酶系活性升高而增强抗病性以防止病菌侵染。     

Use of Hypocrea jecorina (anamorph Trichoderma reesei) as a model system for Trichoderma biocontrol of Pythium blight identifies new targets for genetic strain improvement

Biocontrol by Trichoderma has been studied mainly with selected isolates of T. harzianum, T. atroviride and T. asperellum, which are members of sections Pachybasium and Trichoderma. In contrast, species from section Longibrachiatum have only rarely been studied. On the other hand, one taxon from this section-Hypocrea jecorina (anamorph: Trichoderma reesei)-has been widely used for the production of cellulolytic and hemicellulolytic enzymes and recombinant proteins. As far as T…     

烟草品种防御酶活性对黑胫病菌响应差异

 以不同抗、感黑胫病烤烟品种云85（高抗）、K326(中抗)、净叶黄（中感）和红花大金元（高感）为供试材料,采用人工接种方法研究了黑胫病菌诱导的这些品种超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶（PPO）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性差异及其与品种抗性的关系。结果表明,接种黑胫病后不同抗性品种SOD,POD,PPO和PAL活性与对照相比均出现明显提高,抗病品种SOD和POD活性较感病品种上升快且维持较高活性水平,且抗病品种POD酶活高峰较感病品种出现得早;抗病品种PPO和PAL较感病品种活性上升幅度更大,维持时间更长。相关性分析表明,SOD,POD,PPO和PAL活性与品种的黑胫病抗性呈正相关关系。     

蜡状芽孢杆菌菌株255诱导香蕉产生抗性相关酶初步研究

在香蕉苗6叶期分别接种蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense),在接种后1、2、4、6、9 d,测定过氧化物酶POD、多酚氧化酶PPO、苯丙氨酸解氨酶PAL、超氧化物歧化酶SOD等4种与植物抗病密切相关的酶活性变化,结果显示,接种蜡状芽孢杆菌后,POD、PPO、SOD活性在接种后2d达到最高值,明显高于对照和接种香蕉枯萎病菌,PAL活性在接种后6 d达到最高值;而接种香蕉枯萎病菌后,POD、PPO、PAL活性在接种后24 h达到最高值,并明显高于对照,SOD活性在接种后2 d达到最高值。