不同水域中克氏原螯虾主要组织的LDH同工酶分析

[目的]为探究克氏原螯虾的食用安全性以及哈夫病的致病因素等提供检测方法。[方法]以孝感市不同水域中生活的克氏原螯虾为材料,对其主要组织的LDH同工酶进行电泳分析。[结果]2处水域的pH、总磷、总氮和化学需氧量存在差异,2处水域中克氏原螯虾的鳃、心脏和肌肉的LDH同工酶酶谱也存在差异。B水域(流水)中克氏原螯虾的酶带数目比A水域(静水)多。从Ldh-5同工酶染色深浅可以看出,静水虾肝胰腺、心脏和眼球的Ldh-5同工酶活力比流水虾的大,而肌肉和腮则是流水虾的Ldh-5同工酶活力较大。[结论]2处水域克氏原螯虾组织LDH同工酶的差异是由水质差异引起的。     

克氏原螯虾CSGalNAcT-1基因功能初步研究

为探究硫酸软骨素N-乙酰半乳糖胺基转移酶-1（chondroitin sulfate N-acetylgalactosaminyltransferase-1,CSGalNAcT-1）在克氏原螯虾免疫反应中的作用,利用RACE技术成功获得克氏原螯虾CSGalNAcT-1基因完整cDNA序列,并通过荧光定量PCR分析该基因在各组织中的表达模式以及在CpG寡脱氧核苷酸（ODN）、嗜水气单胞菌和白斑综合征病毒（WSSV）刺激后的表达情况。结果显示,克氏原螯虾CSGalNAcT-1基因在中肠的相对表达量最高,其次是近胃段肠,在心脏、胃、肌肉和围食道神经中的相对表达量较低。克氏原螯虾肝胰腺、血细胞中CSGalNAcT-1基因表达量在嗜水气单胞菌和WSSV刺激下呈现出下调及上调,而在注射免疫刺激剂CpG ODN后,CSGalNAcT-1基因表达水平在大部分组织中呈现上调。表明克氏原螯虾CSGalNAcT-1基因可能在抵御外界病原侵染以及增强自身免疫反应的过程中发挥重要作用。     

3种中草药对克氏原螯虾肝胰腺抗氧化系统及组织结构的影响

以平均体质量为(6.45±0.14) g克氏原螯虾为研究对象,分别投喂含1%姜黄素、肝胆利康散、穿梅三黄散的配合饲料,饲养42 d后检测并比较不同中草药对克氏原螯虾肝胰腺抗氧化应激指标和组织结构的影响。结果表明,3种中草药均显著提高了克氏原螯虾肝胰腺SOD和CAT活性,其中姜黄素对CAT活性的促进作用更显著;3种中草药均明显降低了肝胰腺的MDA含量,但对GSH-Px活性无显著影响。组织学观察发现3种中草药对克氏原螯虾肝胰腺未造成明显损失。由此可见,饲料中添加1%剂量的3种中草药可明显增强克氏原螯虾肝胰腺的抗氧化能力,且安全可靠。     

模拟空运过程中克氏原螯虾生理生化指标的变化规律

【目的】明确空运过程中影响克氏原螯虾存活率的关键环境因子,为有针对性地进行空运前预处理提供科学依据。【方法】模拟克氏原螯虾空运条件,将克氏原螯虾放入泡沫箱中,加入冰瓶后进行完全密封（密封组）或打孔通气（打孔组）。模拟空运过程实时监测泡沫箱内的含氧量、温度和相对湿度;模拟空运18 h后采集克氏原螯虾的血清、肝胰腺、鳃丝及中肠等组织样品,分别测定血清溶菌酶（LZM）活性、多酚氧化酶（PPO）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量,肝胰腺SOD活性、总抗氧化能力（T-AOC）、MDA含量及蛋白质羰基含量,以及鳃丝Na+K+-ATP活性;并制作克氏原螯虾肝胰腺、鳃丝及中肠组织石蜡切片,统计模拟空运结束后克氏原螯虾的存活率。【结果】在模拟空运过程中,相对湿度变化不明显,温度和含氧量的变化引起克氏原螯虾应激反应,是影响空运的主要环境因子。经模拟空运后,密封组克氏原螯虾血清LZM活性、PPO活性及MDA含量显著升高（P<0.05,下同）,SOD活性显著降低;肝胰腺蛋白质羰基含量、MDA含量和T-AOC水平均显著高于打孔组及模拟空运前,而SOD活性变化不显著;密封组和打孔组克氏原螯虾经模拟空运18 h后,其鳃丝Na+K+-ATP活性均显著高于模拟空运前。克氏原螯虾经模拟空运18 h后其存活率较高,但模拟空运后暂养1周发现密封组和打孔组的克氏原螯虾存活率均从第4 d开始显著下降,至暂养第7 d密封组克氏原螯虾的存活率仅为59.33%;且其鳃丝有大量附着物,微血管腔结构已完全消失,大部分呼吸上皮细胞脱落、坏死,鳃膜结构遭到破坏。【结论】温度和含氧量是影响克氏原螯虾空运存活率的主要环境因子。模拟空运对克氏原螯虾造成严重损伤且不可逆,在模拟空运结束后克氏原螯虾因自身缺乏修复能力而大量死亡。因此,实际生产中可通过在运输前投喂免疫增强剂,或在运输后优化其暂养环境等方式以提高克氏原螯虾空运存活率,进而确得其引种成功。     

克氏原螯虾LC3基因克隆及组织特异性表达

为了研究克氏原螯虾LC3基因的序列及其生物信息学,分离并提取肝胰腺组织,并克隆了其LC3基因ORF全长序列.结果表明,克氏原螯虾LC3基因ORF序列片段为369 bp,编码122个氨基酸.结构分析显示,LC3基因存在2个结构域,证明了LC3基因在细胞自噬中存在多种功能.序列比对及系统进化树分析表明,克氏原螯虾与节肢动物进化关系最接近,其LC3基因序列具有节肢动物的典型特征,在进化过程中保守性较高.荧光定量PCR显示,克氏原螯虾LC3基因在肝胰腺中表达水平最高,与肠道相比有显著差异(P<0.05),与心脏和肌肉无显著差异(P>0.05);心脏和肌肉中LC3基因的表达量次之,但与肠道相比差异显著(P<0.05);肠道中LC3表达量最低.该研究结果可为深入研究LC3基因表达与动物营养调控提供基础依据和参考.     

克氏原螯虾抗菌肽crustin5基因克隆及其表达分析

[目的]深入了解克氏原螯虾先天免疫过程中抗菌肽的作用与功能,丰富先天免疫中抗菌肽的理论知识,为克氏原螯虾的病害机理研究及防控措施制定提供参考依据.[方法]从克氏原螯虾肝胰腺组织提取总RNA,利用PCR扩增crustin5基因全长cDNA序列,运用DNAMAN 6.0、ProtParam、ProtScale、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件对其进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测crustin5基因在克氏原螯虾各组织中的表达情况.[结果]克氏原螯虾crustin5基因cDNA序列全长954 bp,开放阅读框(ORF)为429 bp,共编码167个氨基酸残基,其编码蛋白相对分子量为16485.42 Da,理论等电点为8.58,为不稳定的疏水性蛋白.克氏原螯虾crustin5蛋白具有典型的crustins家族结构特征,包括N端的信号肽,C端的WAP结构域,以及二者间的半胱氨酸富集区;其二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链分别占20.36%、7.78%、58.08%和13.77%.crustin5基因在克氏原螯虾血细胞、肝胰腺、鳃、肠道、肌肉和淋巴器官等6种组织中均有不同程度的表达,以在血细胞中的相对表达量最高,淋巴器官次之,在肌肉组织中的相对表达量最少.[结论]克氏原螯虾抗菌肽crustin5具有典型的crustins家族结构特征,且主要分布在血细胞和淋巴器官中,说明crustin5是在克氏原螯虾的血淋巴中参与先天免疫并发挥抗菌作用.     

罗氏沼虾同工酶表达组织差异性及遗传多样性分析

【目的】从生化遗传角度分析罗氏沼虾群体的同工酶基因座及其酶谱表型,明确不同群体的遗传多样性,为其种质资源鉴定及遗传育种研究等提供基础数据。【方法】采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）对罗氏沼虾肌肉、复眼、鳃、心脏和肝胰腺等5种组织中的苹果酸脱氢酶（MDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、山梨醇脱氢酶（SDH）、苹果酸酶（ME）、磷酸葡萄糖变位酶（PGM）、乙醇脱氢酶（ADH）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷氨酸脱氢酶（GDH）、天冬氨酸脱氢酶（AAT）和酯酶（EST）等11种同工酶进行电泳分析,并选取肌肉同工酶对申漕群体、野生群体、抗病群体、生长群体和浙江群体（2017年引进种虾）等5个罗氏沼虾群体进行遗传学研究。【结果】同种同工酶在罗氏沼虾不同组织间所表现出的酶谱总数和酶带颜色（酶活性）存在明显差异,即罗氏沼虾同工酶具有明显的组织差异性;11种同工酶在罗氏沼虾5种组织中存在26个基因座。其中,EST在肌肉中未表达,但在肝胰腺中表达较多;ME在肌肉、复眼、鳃、心脏和肝胰腺等5种组织中均有表达;SOD-2只在肝胰腺中表达;PGM在肝胰腺和心脏中表达较多。罗氏沼虾肌肉中的7种同工酶存在11个基因座,有3个基因座（SDH-1、PGM-3和LDH-1）呈多态性,多态位点比例为27.27%。5个罗氏沼虾群体的平均预期杂合度在0.1006~0.1416,平均观测杂合度在0.1143~0.1762,Hardy-Weinberg遗传偏离指数（0.1362~0.2444）均为正值,即偏离Hardy-Weinberg平衡。【结论】罗氏沼虾同工酶具有明显的组织差异性,表现为不同组织间的酶谱总数和酶带颜色（酶活性）存在明显差异,因此同工酶可作为研究罗氏沼虾遗传多样性的一种生化遗传标志。5个罗氏沼虾群体均处于杂合子过剩状态,其遗传变异水平较高。     

克氏原螯虾WSD的PCR诊断及组织病理损伤研究

【目的】近年来白斑综合症病毒(WSSV)严重威胁着克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的健康养殖,本研究旨在确定一例克氏原螯虾暴发性死亡的病因。【方法】对患病虾进行临床症状观察,取其鳃、心脏、肝胰腺、肠道、肌肉、眼睛等组织分别进行套氏PCR检测和组织病理学观察。【结果】患病虾临床剖解特征表现为肠段中空无食物,肠壁透明,肠管较细;套氏PCR结果显示患病虾体内WSSV呈阳性;PCR产物测序并进行系统发育树分析显示,该基因序列与WSSV的核苷酸序列同源性为100%,进一步证实本次患病克氏原螯虾体内携带WSSV。病理组织切片显示,该病靶器官主要为肝胰腺、心脏、鳃、肠道,患病虾均表现为中度至重度坏死性肝胰腺炎、中度充血性鳃炎、中度坏死性心肌炎、以及轻度肠炎,肌肉组织未发现明显病变。【结论】推断造成本次克氏原螯虾大量死亡的原因为WSSV感染。     

高效氯氰菊酯对克氏原螯虾（Procambarus clarkii）抗氧化酶活性的影响

为研究水体中不同浓度的高效氯氰菊酯对克氏原螯虾抗氧化酶活性的影响,在本实验室测得高效氯氰菊酯致克氏原螯虾的96 h LC50为0.2 μg·L-1的基础上,将克氏原螯虾分别暴露于0、0.005、0.01、0.02、0.04 μg·L-1的高效氯氰菊酯溶液中,在24、48、72 h和96 h后分别测定其鳃、肝胰腺和血清中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量。结果表明,在染毒96 h期间各组织中的SOD活性变化规律相似,均为先上升后下降;肝胰腺中的CAT活性先下降后上升再下降,而鳃和血清中的CAT活性表现为先上升后下降;丙二醛（MDA）含量则一直高于对照组,随着暴露时间和暴露浓度的增加而增加。染毒96 h后,0.04 μg·L-1处理组与空白对照组相比,肝胰腺、鳃和血清中的SOD活性分别下降了28.3%、44.1%和27.2%,CAT活性分别下降了38.1%、39.4%和12.3%,而MDA含量分别较空白对照组提高了0.72、1.09倍和0.46倍。研究结果提示,高效氯氰菊酯对克氏原螯虾的抗氧化酶活性具有显著的抑制效应。     

克氏原螯虾酚氧化酶原mRNA组织分布特性研究

酚氧化酶原系统是甲壳动物体内与免疫相关的重要功能系统之一,对于甲壳动物的防御反应具有重要作用。本研究针对克氏原螯虾酚氧化酶原基因保守序列设计引物,利用实时荧光定量PCR法对克氏原螯虾酚氧化酶原mRNA的组织分布进行了初步研究。结果表明,克氏原螯虾酚氧化酶原基因在血淋巴、肝胰腺、卵巢和精巢中转录水平较高;在肌肉、表皮和鳃中有较弱表达;而在肠和胃中几乎无表达。此种组织表达特性可能与酚氧化酶原基因在机体生命活动过程中的功能有关。     

花斑副沙鳅七种同工酶的组织特异性表达

采用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳方法,对花斑副沙鳅(Parabotia fasciata Dabry)的鰓、心、肝胰脏、肠、肾、肌肉、眼、脑8种组织中的过氧化氢酶(CAT)、酯酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和醇脱氢酶(ADH)进行了分析。结果表明,花斑副沙鳅的7种同工酶表达具有明显的组织特异性,8种组织中检测出3种CAT同工酶、8种EST同工酶、4种LDH同工酶、8种MDH同工酶、10种POD同工酶、10种SOD同工酶、10种ADH同工酶表达。其中,CAT-3、EST-7仅在肝胰脏表达,LDH-4、SOD-9、ADH-3仅在肾表达。     

3种虾类超氧化物歧化酶同工酶比较

[目的]比较日本对虾、克氏原螯虾、凡纳滨对虾不同组织的超氧化物歧化酶(SOD)同工酶差异。[方法]将供试材料进行预处理后,测定各材料SOD活性,并采用聚丙烯酰胶凝胶电泳分析同工酶差异。[结果]SOD活性存在组织差异和种属差异性;电泳谱带在3种虾类中也存在着明显的差异,其中日本对虾和凡纳滨对虾的SOD的电泳谱带和迁移率较为相似,与克氏原螯虾存在明显不同。[结论]SOD同工酶活性比较可揭示虾类的亲缘关系与起源。     

3种虾类超氧化物歧化酶同工酶比较(英文)

[Objective] The aim of the study is to compare the activities of superoxide dismutase(SOD) isoenzymes in three species of shrimps Penaeus japonicus, Procambarus clarkia and Litopenaeus vannamei. [Method] The experimental materials were used to measure SOD activities after pretreatment, meanwhile the differences in SOD isoenzymes from different materials were assayed by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). [Result] There are specific and histological differences in SOD activities of shrimps. With a similar electrophoresis pattern and migration rate, Penaeus japonicus and Litopenaeus vannamei showed remarkable differences with that of Procambarus clarkia. [Conclusion] The result showed the differences of cognation and origin of three shrimps.     

饥饿对克氏原螯虾亲虾消化酶活性及部分免疫指标的影响

对克氏原螯虾Procambarus clarke亲虾进行短期饥饿处理（0、4、8、12、16d）后,分别测定其内脏消化酶活性及部分组织免疫学指标。结果显示：饥饿能显著影响克氏原螯虾肝胰脏的胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性,随着饥饿时间的延长,这3种消化酶的活性均不断下降,且胰蛋白酶和淀粉酶活性在饥饿第4天下降幅度最大;脂肪酶活性则在第8天显著下降,随着饥饿时间的继续延长,其活性下降不明显。饥饿对克氏原螯虾亲虾免疫学指标也有一定的影响,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性先稍微增加,后随着饥饿时间的延长,在第8天显著下降;酸性磷酸酶活性在0—12d时随着饥饿时间的延长呈显著下降趋势;溶菌酶活性在饥饿的前8d变化不显著,饥饿第12天溶菌酶活性下降50％,此后下降无显著差异。     

克氏原螯虾暴发病细菌性病原的研究

从患暴发病的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的肝胰腺中分离到3株细菌.人工注射感染显示,KSAX-3分离菌在浓度1010cfu/mL时可使95%以上健康克氏原螯虾死亡;在106cfu/mL浓度时可导致70%的健康克氏原螯虾死亡,并使克氏原螯虾出现明显的与自然条件下相似的疾病症状,试验结果表明该分离菌为克氏原螯虾致病菌.KSAX-3菌的主要生理生化特性为:革兰氏阴性,单鞭毛,发酵葡萄糖,甘露醇、氧化酶、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶阳性,精氨酸脱羧酶、水杨酸、枸橼酸盐(西蒙氏)阴性,在含0%、10%NaCl的普通培养基中不生长,在含2%、4%、6%、8%NaCl的普通培养基中生长,在30℃、35℃、40℃、42℃条件下生长良好.鉴定该菌为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus).药敏试验结果表明,该菌对盐酸土霉素、盐酸四环素、环丙沙星、诺氟沙星、金霉素、硫酸卡那霉素、交沙霉素、烟酸诺氟沙星等8种药物敏感.     

兴淮鲫(白鲫■×散鳞镜鲤■)及其双亲同工酶的研究

本文以兴淮鲫(白鲫■×散鳞镜锂■)及其双亲为材料,采用聚丙烯酰胺凝胶平板电泳法,研究了3种鱼的晶体、脑、肌肉、心脏、肝脏及肾脏等6种组织器官的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、酯酶(EST)和超氧物歧化酶(SOD)等4种同工酶酶谱表达上的异同点及遗传倾向。结果表明,兴淮鲫的LDH同工酶有偏父的表达倾向;它的s-MDH和EST2种同工酶则表现出偏母表达的倾向;在SOD同工酶的表达上,与双亲相比,既有相似处,也有不同点。同时,3种鱼的4种同工酶并显现出不同程度的组织特异性。此外,在兴淮鲫的4种同工酶酶带中出现双亲没有的“新杂种酶带”及双亲的“互补酶带”,且F_1代的有些酶带的活性比双亲相应酶带的活性有所增强。     

兴淮鲫(白鲫■×散鳞镜鲤■)及其双亲同工酶的研究

本文以兴淮鲫(白鲫■×散鳞镜锂■)及其双亲为材料,采用聚丙烯酰胺凝胶平板电泳法,研究了3种鱼的晶体、脑、肌肉、心脏、肝脏及肾脏等6种组织器官的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、酯酶(EST)和超氧物歧化酶(SOD)等4种同工酶酶谱表达上的异同点及遗传倾向。结果表明,兴淮鲫的LDH同工酶有偏父的表达倾向;它的s-MDH和EST2种同工酶则表现出偏母表达的倾向;在SOD同工酶的表达上,与双亲相比,既有相似处,也有不同点。同时,3种鱼的4种同工酶并显现出不同程度的组织特异性。此外,在兴淮鲫的4种同工酶酶带中出现双亲没有的“新杂种酶带”及双亲的“互补酶带”,且F_1代的有些酶带的活性比双亲相应酶带的活性有所增强。     

岩原鲤三种同工酶的组织特异性研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳,对岩原鲤(Procypris rabaudi)6种组织(眼、脑、心、肝、肾、肌肉)的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、酯酶(EST)3种同工酶进行了初步研究,并对其位点及酶谱表型进行了分析.结果表明,岩原鲤3种同工酶系统具有不同程度的组织特异性.LDH检测到由3个基因位点编码,Ldh-C位点仅在肝脏组织中表达:s-MDH在6种组织中均有表达,其中在肝脏和肾脏中的活性表达较强,m-MDH在脑、心脏、肾脏和肌肉4种组织中均有表达;EST检测到由5个基因位点编码,其同工酶酶谱复杂,Est-2为6种组织的共有谱带,在肝脏中的活性表达较强.     

水培灌木柳在克氏原螯虾育苗中的作用

[目的]为利用灌木柳作为克氏原螯虾实验室培养以及环境友好型的清洁化水产养殖的育苗材料提供基础性研究参数。[方法]使用传统的曝气水培育克氏原螯虾"仔虾"以及较大规格的幼体,研究了灌木柳根系对螯虾存活率、体长增长量和体长变异系数的影响。研究了较大规格的螯虾幼虾在2种氨氮浓度的Ⅴ类污水中的存活情况,并分析了氨氮浓度的变化。[结果]曝气水中灌木柳组"仔虾"存活率和体长增长量均显著高于空白组,体长变异系数无显著差异。在2 mg/L氨氮污水中,灌木柳组幼虾存活率和氨氮净化率均极显著高于空白组。在10 mg/L氨氮污水中,灌木柳组幼虾存活率显著高于空白组,而2组氨氮净化率没有显著差异。[结论]灌木柳对提高螯虾幼虾存活率、生长速度具有显著效果,而灌木柳对水体氨氮净化范围为2～10 mg/L。