放线菌H50发酵液抑菌活性及其稳定性测定

将沈阳农业大学微生物研究室分离的1株放线菌H50[链霉菌属(Streptomyces)]分别以植物病原菌真菌12株、细菌3株为供试菌,采用菌丝生长速率法和管碟法测定H50发酵液的抑菌活性以及发酵液的稳定性.发酵液的抑菌活性测定结果表明:H50发酵液对12株供试病原真菌均具有不同程度抑制作用,对其中6种病原真菌菌丝生长抑制率达50％以上,对油菜菌核病菌和黄瓜灰霉病菌的抑制率分别为98.3％和94.9％;H50发酵液对3种供试病原细菌中的枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,抑菌圈直径为12.3mm.发酵液的稳定性检测结果表明:发酵液在80℃处理后抑菌活性开始下降,发酵液在pH值4.0～8.0条件下抑菌活性稳定,可见该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的热、酸、紫外光稳定性,具有潜在的开发价值.     

丛生盔形珊瑚共附生放线菌NLG-3的抑菌活性及鉴定

【目的】探究丛生盔形珊瑚共附生放线菌NLG-3对植物病原菌的抑菌活性,对其分类地位进行鉴定,为丛生盔形珊瑚共附生放线菌的开发利用提供依据。【方法】采用平板对峙法测定NLG-3对12种植物病原真菌的抑菌活性;采用滤纸片法测定NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物对5种病原细菌的抑菌活性;通过改变pH、温度及光照条件,测定该菌株发酵液的稳定性;采用几丁质平板培养法测定该菌株产几丁质酶的能力;通过基因扩增检测该菌株是否含有非核糖体多肽合成酶(NRPS)和聚酮合成酶(PKS)基因;结合菌株形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析对该菌株进行分类鉴定。【结果】菌株NLG-3具有广谱抑菌活性,对供试病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)和胶孢炭疽病菌(C.gloeosporioides)的抑菌率均在85%以上。NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物可以明显抑制蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的生长,1 mg/mL NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物对蜡样芽孢杆菌的抑菌圈直径达(2.20±0.11) cm。NLG-3发酵液在中性(pH=7)条件下抑菌活性突出,经40℃及以上高温处理其活性丧失,光照对其抑菌活性无影响。NLG-3能产生几丁质酶,分解培养基中的几丁质。该菌株具有合成酶基因PKS-Ⅱ和NRPS,经初步鉴定该菌株为白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)。【结论】NLG-3抑菌活性较好,具有潜在防治热带植物病害的应用价值。     

一株拮抗放线菌的鉴定及其对香蕉枯萎病的生防效应

[目的]鉴定一株从健康辣椒根际土壤中分离获得的菌株(编号FX81),研究其防治植物病害和促进植物生长的潜能,为开发具有实用价值的香蕉枯萎病生防制剂及生物有机肥提供材料.[方法]采用平皿对峙法和菌丝生长速率法测定菌株FX81发酵液对13种病原真菌的抑菌活性及抑菌谱;将菌株FX81制成生物有机肥,利用菌剂根部穴施,评价其对香蕉植株的促生效果及对香蕉枯萎病的防治作用.通过形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析确定菌株FX81的分类地位.[结果]平皿对峙试验结果显示,菌株FX81对13种供试病原真菌均具有较好的拮抗作用,其中对香蕉枯萎病菌的抑制作用最强,抑菌带宽为13.1 mm;生长速率法测定结果显示,菌株FX81对香蕉枯萎病菌的抑制率为81.7%,对其他病原菌的抑制率为62.7%~80.8%,表明菌株FX81的抑菌谱较广.盆栽试验结果表明,施用生防菌剂FX81对香蕉有一定的促生作用,对香蕉枯萎病的防治效果达81.05%.综合菌株FX81的生理生化特征、培养特征及16S rDNA序列分析,鉴定菌株FX81为灰锈赤链霉菌(Streptomyces griseorubiginosus).[结论]灰锈赤链霉菌FX81对香蕉枯萎病具有较好的防治效果,且对香蕉植株具有促生作用,在防治植物土传病害方面具有良好的开发前景.     

银杏外种皮酚酸类物质的抑菌活性

以9种植物病原真菌和10种动物病原细菌为供试菌,采用菌丝生长速率法和带药培养基涂布法,测定了银杏外种皮中酚酸类物质的抑菌活性。结果表明,酚酸类物质对9种植物病原真菌均有抑制活性,对柿角斑病菌、稻瘟病菌、梨锈病菌、玉米炭疽病菌、柑橘疮痂病菌、甘蔗凤梨病菌、西瓜枯萎病菌、梨褐斑病菌和香蕉炭疽病菌的EC50在0.665 7~19.558 0 g/L,对香蕉炭疽病菌活性最高,对稻瘟病菌活性最低。银杏外种皮酚酸类物质对10种动物病原细菌也有不同程度的抑制活性,其中对巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性最高,最低抑菌浓度(MIC)均为1.25 g/L。     

山橙内生真菌的抑菌活性初步研究

[目的]从山橙(Melodinus suaveolens Champ.ex Benth)中分离对植物病原真菌具有拮抗活性的内生真菌,为研发新型高效生物农药提供理论依据.[方法]采用组织培养法对山橙进行内生真菌的分离与纯化,结合菌种形态学和18S rDNA序列比对对其内生真菌进行鉴定;采用平板对峙法和菌丝生长速率法测定内生真菌对香蕉枯萎病4号小种、香蕉炭疽病菌和火龙果溃疡病菌等13株供试植物病原真菌的抑菌活性.[结果]从山橙的根、枝和叶中分别分离得到4、5和11株共20株内生真菌,平板对峙测定结果显示其中的菌株M4对白腐盾壳霉菌、向日葵霜霉病菌、禾谷镰刀菌、茄子黄萎病菌、水稻稻瘟病菌和火龙果溃疡病菌等6株植物病原真菌的抑制率均在30.00%以上,表现出较好的抗菌活性.结合形态特征与18S rDNA序列分析鉴定,确定菌株M4为Phanerochaete sp.,其菌株发酵液在20 mg/mL浓度下对马铃薯黄萎病大丽轮枝菌、马铃薯黑白轮枝菌、禾谷镰刀菌、茄子黄萎病菌、西瓜枯萎病菌、马铃薯立枯丝核菌和香蕉枯萎病4号小种等7株病菌均具有一定的抑制作用,其中对禾谷镰刀菌的抑制效果最佳,抑制率为40.92%,显著高于对其他病原菌的抑制率(P<0.05).[结论]山橙内生真菌富含抑菌活性菌株,蕴藏着潜在的抑菌活性物质,具有良好的应用前景.     

双叶细辛甲醇提取物对12种农业病原真菌抑菌活性研究

[目的]研究双叶细辛甲醇提取物对12种植物病原真菌的抑菌活性,为双叶细辛发展为新型植物杀菌剂提供实验依据和理论基础.[方法]采用生长速率法测定双叶细辛对12种植物病原真菌的抑制活性,结果表明在1 mg/mL质量浓度下,双叶细辛甲醇提取物对12种病原真菌表现出不同程度的抑制活性,并且测定双叶细辛甲醇提取物对抑菌率在70％以上的病原菌的EC50,根据结果测定双叶细辛甲醇提取物对香蕉炭疽病菌的孢子萌发率以及离体实验.[结果]双叶细辛甲醇粗提物对火龙果黑斑病菌的抑制效果最好,抑制率为100％,EC50为0.188 mg/mL.双叶细辛石油醚相对香蕉炭疽病菌抑制效果最好,抑制率为99.51％,EC50为0.202 mg/mL.双叶细辛乙酸乙酯相对香蕉炭疽病菌的抑制效果最好,抑制率为99.95％,EC50为0.099 mg/mL.质量浓度在2,4,8 mg/mL时,双叶细辛甲醇提取物以及石油醚相对香蕉炭疽病菌分生孢子萌发相对抑制率均在60％以上,双叶细辛乙酸乙酯提取物对香蕉炭疽病菌分生孢子萌发相对抑制率在90％以上.离体实验结果表明双叶细辛石油醚相以及乙酸乙酯相对香蕉果实炭疽病有较好防治效果,在质量浓度为10 mg/mL时防治效果优于0.2 mg/mL的多菌灵.[结论]双叶细辛甲醇提取物对多种植物病原菌具有较强的抑菌活性,具有抑菌广谱性,可以开发成为植物源抑菌剂.其中双叶细辛甲醇提取物石油醚和乙酸乙酯萃取相均对香蕉炭疽病菌表现出优良的防治效果,推测双叶细辛中存在对香蕉炭疽病菌具有较强拮抗活性的物质,这一发现可对将来双叶细辛开发成为防治香蕉炭疽病的有效杀菌剂提供一定的理论基础.     

1株链霉菌对几种植物病原真菌抑菌活性的初步研究

为了研究链霉菌1#所产生生物活性物质对5种植物病原真菌的抑菌活性。通过测定其次生代谢产物的抑菌活性,研究其发酵液对5种植物病原真菌的抑制效果。在链霉菌1#的同一批发酵液中,对小麦赤霉病菌的菌丝生长抑制率为60.8%,对棉花黄萎病菌和水稻稻瘟病菌的菌丝生长抑制率为20.0%和4.3%。100℃以下热处理15 min,拮抗成分仍有较强的活性,但随着温度和处理时间的增加,拮抗活性的丧失也就越明显。链霉菌1#粗发酵液活性作用在pH值3.8~9.0基本不变。在接近中性条件下,粗发酵液的拮抗活性最强。这株链霉菌的粗发酵液对几种植物病原真菌有很好的抑制效果,它具有一定的耐热性,抑菌效果在pH值3.8~9.0无明显差异。     

阴香内生菌YXG2-3的抑菌活性与生长条件优化

【目的】明确阴香内生细菌YXG2-3的抑菌活性与菌株分类地位,并确定其适宜的培养条件。【方法】采用平板对峙法、菌丝干重法和孢子萌发法,测定YXG2-3对多种热带植物病原真菌(橡胶基腐病菌(Fusarium venfricosum)、香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.)、香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)、芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporiordes)、橡胶炭疽病菌(Colletotrichum acutatum)、芒果蒂腐病菌(Botryodiplodia theobromae)、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、橡胶黑团孢病菌(Periconia heveae)、橡胶落叶棒孢霉病菌(Corynespora cassiicola)、椰子灰斑病菌(Pestalotia palmarum))的抑菌活性;通过观察形态特征,测定其生理生化特性,采用16SrDNA序列对菌株进行分类地位鉴定;通过优化菌株生长碳源、氮源、pH和培养温度,确定菌株适宜生长条件;采用浸果法测定YXG2-3发酵液滤液对香蕉炭疽病害的防效。【结果】YXG2-3对10种供试靶标菌的皿内抑菌活性均大于50%,能够有效控制供试靶标菌菌丝干质量的增加;经鉴定,该菌株为荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens),适宜生长的碳、氮源分别为麦芽糖和酵母膏,pH为7.0,温度为33℃。香蕉果实经YXG2-3发酵液滤液处理后,香蕉炭疽病得到有效控制,防效66.22%,与对照药剂咪鲜胺(250μg/mL)相当。【结论】YXG2-3抑菌谱广,具有良好的应用开发前景。     

拮抗放线菌F1发酵液抑菌谱及稳定性分析

对拮抗放线菌菌株F1发酵液的抑菌谱及稳定性做了研究。抑菌活性实验表明:菌株F1发酵液对供试17种植物病原真菌和7种病原细菌都有较强的抑制活性,在供试的植物病原真菌中,对番茄灰霉病菌和李干腐病菌的抑制作用最强,抑菌圈直径分别为41.04mm和40.12mm;病原细菌中,对丁香假单胞菌流泪致病变种的抑制作用最强,抑菌圈直径可达22.15mm;稳定性实验结果表明:菌株F1发酵液对紫外线、热和酸碱较稳定,在pH为6～10条件下,均能保持较强的抑菌活性,但不耐强酸、强碱;当温度低于60℃时,处理30min和60min,抑菌活性几乎没变化,仍能保持较强的抑菌效果,但高于80℃时,抑菌活性明显降低。表明该菌株发酵液具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值。     

三峡地区20种植物甲醇提取物的抗真菌活性

以6种重要的植物病原真菌:荔枝霜疫霉菌Peronophthora litchii、黄瓜疫霉菌Phytophthora melonis、稻瘟病菌Magnaporthe grisea、稻纹枯病菌Rhizoctonia solani、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.niveum和香蕉炭疽病菌Colletotrichum musae为供试菌,对采自三峡地区的20种植物的甲醇提取物的抑制菌丝生长活性进行离体测定.结果表明:在甲醇提取物干质量浓度为10 mg/mL下,对荔枝霜疫霉菌抑菌活性较高的植物有山萝花Melampyrum roseum(100%)、毛华菊Dendranthema vestitum(100%)和金缕梅Hamamelis mollis(82.35%)等12种;对黄瓜疫霉菌抑菌活性较高的植物有山萝花(100%)、毛华菊(96.23%)和兰香草Caryopteris incana(82.43%)等12种;对稻瘟病菌表现较高抑菌率的植物是金缕梅(61.51%)和宜昌润楠Machilus ichangensis(61.51%);对稻纹枯病菌有较高抑菌率的植物是透骨草Phryma leptostachya(78.48%)和歪头菜Vicia unijuga(78.03%);对西瓜枯萎病菌和香蕉炭疽病菌抑菌率最高的植物均是金缕梅,抑菌率分别为51.12%和61.07%.对植物抑菌活性筛选中植物材料干质量的总抑制活性进行了讨论.     

连翘内生真菌的分离及其抑菌活性初步研究

采用PDA培养基从连翘茎、叶中分离到19株内生真菌,对其分别进行液体培养,将发酵产物中的发酵液用高压蒸汽湿热灭菌,菌丝体晾干研磨后用丙酮提取。用发酵处理液和丙酮粗提物采用生长速率法对一些植物病原菌进行抑菌活性测定。结果表明:抑菌率在50%以上的活性菌株,发酵液组中有1株(5.26%),菌丝体组中有13株(81.25%),表明其抑菌活性成分主要为胞内代谢产物(存在于菌丝体粗提物中)。筛选出2株抗菌谱较广的内生真菌(J4和J8),其中J8对9种病原真菌抑菌活性较强,J4对6种病原真菌抑菌活性较强。     

雪松内生真菌的分离及抑菌活性研究

采用组织分离法,从健康的雪松松针中分离纯化得到11株内生真菌。通过平板对峙和抑菌圈法将11株内生真菌分别对10株供试病原菌进行抑菌活性试验,结果显示内生真菌至少对1株供试病原菌存在抑菌活性。内生真菌发酵液抑菌试验结果显示N03菌株对苹果腐烂菌(Cytospora mandshurica)抑制率达到80.56%,N06菌株对辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)抑制率达到80.74%。N03菌株不同天数的发酵液抑菌活性研究表明,发酵液的抑菌活性与内生真菌的生物量相关。     

丹参内生细菌的抑菌活性研究

DS-1是从丹参叶片中筛选出的一株细菌,为研究其对病原真菌的抑菌效果,本实验采用平板对峙法和生长速率法测定了DS-1菌株及其发酵液对梨黑斑病菌、番茄早疫病菌、小麦赤霉病菌等8种病原真菌的抑菌活性。结果表明DS-1对这8种病原菌都有很好的抑制作用,其中对梨黑斑病菌的抑菌率达到了90.57%;过滤处理的发酵液对病原菌的抑制率最高达到83.87%,但经过高温处理的发酵液活性出现不同程度的下降。     

小檗内生放线菌H21的鉴定及抑菌活性成分分析

【目的】从药用植物小檗（Berberis thunbergii）中筛选抗菌活性内生放线菌,对活性菌株的分类地位及抑菌活性进行研究,分离并鉴定候选菌株发酵液中活性成分的化学结构及其抑菌活性,为农用杀菌剂的创制提供依据。【方法】采用选择性培养基从小檗叶片分离内生放线菌,16S rDNA法进行菌株鉴定;采用管碟法测定发酵液对烟草青枯病菌 （Ralstonia solanacearum）等7种供试菌的抗细菌活性,采用抑制菌丝生长速率法测定发酵液对番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）等7种植物致病菌的抗真菌活性;依次采用大孔树脂吸附、硅胶柱层析及反相高效液相色谱（HPLC）等技术分离纯化活性组分;采用核磁共振波谱（NMR）和质谱（MS）技术对分离到的活性成分进行结构鉴定;采用微量肉汤稀释法测定化合物对烟草青枯病菌等7种细菌的最低抑菌浓度,抑制孢子萌发法和菌丝生长速率法测定化合物对番茄灰霉病菌的抗菌活性。【结果】分离到一株活性菌株H21,该菌株经16S rDNA序列分析鉴定为链霉菌（Streptomyces sp.）;除铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）外,H21菌株发酵液对烟草青枯病菌、猕猴桃溃疡病菌（Pseudomonas syringae pv. actinidiae）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠埃希氏菌（Escherichia coli）等多种病原细菌有明显的抑菌活性;H21发酵液对番茄灰霉病菌表现出较强的抑制菌丝生长作用,对其他供试病原真菌无明显的抑菌活性;从H21菌株发酵液中分离鉴定了3个化合物,分别为N-乙酰基-2-(4-羟苯基)乙胺、环-（L-亮氨酸-L-精氨酸）和二硫吡咯类抗生素-全霉素;全霉素为广谱抗生素,其对烟草青枯病菌、猕猴桃溃疡病菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为0.156、0.313、0.078、0.313、0.156和0.313 µg·mL^-1;对番茄灰霉病菌菌丝生长和孢子萌发的抑菌中浓度（IC₅₀）分别为13.56和7.89 µg·mL^-1。【结论】小檗内生菌放线菌H21可能是一种新的全霉素产生菌,其对植物致病细菌烟草青枯病菌和猕猴桃溃疡病菌有抗菌活性,全霉素对于开发针对致病细菌的农用杀菌剂具有重要的参考价值。     

芽孢杆菌BJ-6的抗菌物质及其抑菌作用

芽孢杆菌(Bacillussp.)BJ-6菌株分离自北京市门头沟区杏树根际土壤,室内抑菌测定发现BJ-6菌株对苹果轮纹病(Physalospora piricola)、苹果斑点落叶病(Alternaria mali)和苹果树皮腐烂病(Valsa mali)、白菜黑斑病(A.brassicae)、番茄灰霉病(Botrytis cinerea)、茄子黄萎病(Verticillium dahliae)的病原菌均有较强的抑菌作用。对其代谢产生的抗菌物质的稳定性测定表明:抗菌物质在偏酸性和中性条件下能够耐受121℃高温处理20 min;但在偏碱性条件下不具备热稳定性,热处理后失去原来的抑菌活性。采用硫酸铵分级沉淀得到抗菌粗蛋白,其中饱和度在30%~40%之间沉淀的蛋白抗菌活性最强。紫外吸收测定显示只有具有274 nm附近吸收峰的蛋白液有抑菌活性,且抗菌粗蛋白可引起白菜黑斑病菌菌丝畸形。     

南蛇藤内生真菌的分离及抑菌活性初探

采用常规方法从南蛇藤的叶与果实中分离得到21株内生真菌,以PDB培养基对其进行液体培养,用高压蒸汽灭菌过的发酵处理液和丙酮粗提物对小麦赤霉菌、棉花枯萎菌、番茄叶霉菌等8种病原菌进行抑菌活性测定.结果表明,抑菌活性成分主要存在于丙酮粗提物中.筛选出1株抗菌谱较广的内生真菌Y9,其对番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、苹果炭疽病菌、西瓜枯萎病菌、苹果褐腐病菌、小麦赤霉病菌 6种病原菌有较好抑菌活性.     

青海盐湖地区嗜盐菌的分离纯化及抑制植物病原菌的活性初探

以番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)、菊芋菌核菌(Jerusalem artichoke Sclerotium)、油菜菌核菌(Sclerotinia sclerotiorum)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、蚕豆根腐菌(Fusarium solani)及豌豆根腐菌(Aphaomyces euteiches Dreehsler)等6种植物病原真菌为供试菌株,采用滤纸片法对植物病原菌提取液的抑菌活性进行了测定.为了获得对这几种植物病原菌具有较高抑制作用的嗜盐菌菌株,对供试菌株进行了液体发酵及发酵液的活性筛选.经滤纸片法测定,青海盐湖嗜盐菌菌株对辣椒疫霉菌具有较强的拮抗作用,并用最小抑制浓度法(MIC)测定了嗜盐菌提取物对辣椒疫霉菌的最小抑菌浓度范围为9～12 mg/mL.     

9种湘西植物甲醇提取物的抗真菌活性

以植物病原真菌荔枝霜疫霉菌(Peronophthora litchii)、稻瘟菌(Magnaporthe grisea)和香蕉炭疽菌(Colletotrichum musae)为供试菌,对采自湖南湘西地区的9种植物甲醇提取物的抗真菌活性进行了测试.结果表明,在0.01 g/mL的条件下,荔枝草(Salvia pleseian)提取物对荔枝霜疫霉菌菌丝生长的抑制率为84.16%,对稻瘟菌和香蕉炭疽菌的抑制率也分别达到74.86%和64.84%;对稻瘟菌抑制率较高的植物分别是豆薯子(Pachyrhizus erosus)(90.41%)、荔枝草(74.86%)和泽漆草(Euphorsia helioscopia)(66.32%).     

辣椒疫病病原真菌拮抗菌的筛选及抑菌活性研究

为有效防治辣椒疫病,采用皿内竞争、拮抗菌发酵液以及紫外线照射菌株代谢产物等方法,对筛选出的4株拮抗菌与16种辣椒疫病病原真菌进行拮抗作用试验以及抑菌活性研究。结果表明：16种靶标病原真菌在与4株供试拮抗菌平皿对峙培养后,均受到不同程度的抑制,其中,LCF-35、LCF-BY1和LCF-BY2同时受到4株拮抗菌较强的抑制作用,平均抑制率分别为52.2%、46.1%和27.3%;供试拮抗菌对靶标病原真菌具有选择抑制作用和不同的抑制能力,其中,BCHK抑制LCF-35生长效果较好,BCHK和KMCG-4抑制LCF-BY1生长效果明显;4株拮抗菌的代谢产物活性成分在紫外照射下不稳定,失去抑制作用,因此,这4株拮抗菌适用于活菌生防制剂生产。