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小鼠卵母细胞冷冻保存技术研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
毛寿林 《养殖与饲料.饲料世界》2008,(2):5-7
卵母细胞的冷冻保存是动物繁殖技术领域生殖细胞冷冻的研究热点。在此介绍了小鼠卵母细胞冷冻保存的研究进展,阐述了小鼠卵母细胞冷冻保存的原理,探讨了冷冻保护剂的作用机理。最后,对小鼠卵母细胞的冷冻保存方法及其原理进行了概括。 相似文献
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试验选用5-6周龄雌性昆明小鼠的成熟卵母细胞,在不同前处理液(10%EG或10%EG+10%DMSO)中平衡5min,然后在冷冻溶液(EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40)中平衡30s后进行OPS法和SSV法玻璃化冷冻保存。试验结果表明:(1)小鼠成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存,用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率为75.8%,激活后卵裂率为47.8%;在EDFS30中冷冻保存,解冻后形态正常率为87.2%,卵裂率为62.0%;在EDFS40中冷冻保存,解冻后形态正常率为86.6%,卵裂率为57.4%,与对照组(99.0%和80.5%)相比,差异极显著(P〈0.01)。(2)小鼠成熟卵母细胞的SSV法冷冻保存,用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率为82.7%,卵裂率为47.1%;在EDFS30中冷冻保存,解冻后形态正常率为91.5%,卵裂率为57.5%;在EDFS40中冷冻保存,解冻后形态正常率最高为85.1%,卵裂率为55.9%,与对照组(99.0%和80.5%)相比,差异极显著(P〈0.01)。(3)OPS法和SSV法冷冻小鼠成熟卵母细胞解冻后形态正常率为86.5%和91.6%,卵裂率为53.8%和55.6%.与对照绢相比。差异极显著(P〈0.01)。 相似文献
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综述了猪卵母细胞的冷冻保存方法和解冻方法,同时对影响冷冻的因素、保护剂的选择等方面进行了探讨并对猪卵母细胞冷冻技术进行了展望。 相似文献
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实验探讨了两种绵羊卵母细胞冷冻保存方法效果的差异。解冻的绵羊卵母细胞,挑选出形态完好的进行体外受精,然后进一步培养,比较发育情况。实验结果表明,79.7%与94.3%的卵母细胞形态正常,受精率分别为21.06%与31.87%。玻璃化冷冻保存后形态正常率较高(P<0.01)。 相似文献
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为探讨不同激活剂的卵母细胞孤雌激活效果及激活胚体外发育情况,用乙醇、CaA23187、SrCl2、6-DMAP及CB分别对小鼠卵母细胞进行了激活处理.结果显示,70 mL/L乙醇刺激小鼠卵母细胞时,以激活5~7 min的激活效果及孤雌胚发育较好,桑囊胚发育率可达29.11%;用SrCl2激活小鼠卵母细胞时,6~10 mmol/L为最佳处理浓度,3~6 h为最佳激活时间,桑囊胚发育率可达16.67%;以70 mL/L乙醇激活5 min,再用2 mmol/L 6-DMAP+5 μg/mL CB激活3 h效果最佳,桑囊胚发育率高达35.77%.研究证实,小鼠卵母细胞经乙醇、6-DMAP和CB等复合激活后能较好地发育. 相似文献
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为提高体外成熟卵母细胞的发育能力,本实验采用卵泡内存在的减数分裂抑制剂次黄嘌呤(Hypoxanthine,HX)在体外维持小鼠GV期卵母细胞减数分裂阻滞,探讨了次黄嘌呤对卵母细胞减数分裂抑制作用的时效性、可逆性以及对卵丘扩展和解除抑制后的发育能力的影响。结果表明(1)4mmol/LHX维持减数分裂阻滞的作用具有时效性,GV%在18h时显著下降。(2)HX处理时间短于24h时,解除抑制后再成熟时卵母细胞的成熟率不受影响,抑制24h再成熟14h时成熟率仍可达86%。(3)HX处理会抑制卵丘扩展,解除抑制后再成熟时卵丘扩展程度跟抑制时间长短有关。(4)HX处理6h后,卵母细胞的孤雌激活率上升(42%vs20%,P<0.05),但胚胎的发育能力下降。这证明HX维持小鼠卵母细胞减数分裂阻滞的作用具有时效性和可逆性的特点,为建立提高体外成熟卵母细胞的发育能力的培养体系打下了基础。 相似文献
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成年小鼠雄性生殖细胞的冷冻保存 总被引:1,自引:0,他引:1
在含10%小牛血清(NBS)的DMEM培养基中,分别各添加5%,10%,15%,20%和25%的二甲基亚砜(DMSO),丙二醇(PG),乙二醇(EG)和甘油(G),对成年小鼠睾丸生殖细胞冷冻保存;复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果显示,5%-25%DMSO冻存液组的细胞复苏率分别为88.5%,88.0%,65.6%及51.3%;5%-25%PG冻存液组的细胞复苏率分别为87.2%,86.4%,79.0%,73.4%及40.1%.;5%-25%EG冻存液组的细胞复苏率分别为6.6%,80.9%,60.8%,51.3%及30.0%;5%-25%G冻存液组的细胞复苏率分别为86.5%,86.3%,65.3%,36.0%及31.4%。其中各抗冻剂5%和10%组的细胞复苏率最高,与15%组相比均存在显著或极显著差异。4种抗冻剂的最高细胞复苏率之间无显著差异。DMSO,PG,EG和G分别冷冻保存成年小鼠睾丸生殖细胞对的最小损失率分别为4.8%,6.1%,6.7%,6.8%。结果表明,采用慢速冷冻时,DMSO,PG,EG及G均适宜用作成年小鼠睾丸生殖细胞的抗冷冻剂,最佳使用含量均为5%-10%。成年小鼠睾丸生殖细胞分别在含5%-10%的DMSO,PG,EG和G的DMEM(含10%NBS)冻存液中,2步慢速降温,液氮储存,37℃水浴复苏,是一种具有较高复苏率的冷冻保存方法。 相似文献
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成年小鼠生精小管及睾丸的冷冻保存 总被引:1,自引:0,他引:1
采用含不同浓度抗冻剂二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、丙二醇(PG)及丙三醇(G)的DMEM培养基作为冻存液,对成年小鼠生精小管及完整睾丸进行慢速冷冻,液氮保存,37 ℃水浴复苏,并测定细胞复苏率。结果表明,成年小鼠生精小管在50 mL/L、100 mL/L 及150 mL/L DMSO冻存液中的细胞复苏率分别为92.6%、93.4%及69.4%,在50 mL/L、100 mL/L及150 mL/L PG 冻存液中的细胞复苏率分别为94.2%,93.3%及66. 9%,在50 mL/L、100 mL/L 及150mL/L EG 冻存液中的细胞复苏率分别为87.2%、91. 0%及62. 6%,在50 mL/L、100mL/L及150 mL/L G冻存液中的细胞复苏率分别为90.0%、90.5%及67.1%。各种抗冻剂的最高细胞复苏率之间差异不显著(P> 0. 05 )。成鼠完整睾丸在含100 mL/LDMSO、PG、EG或G的冻存液中的细胞复苏率分别为56.0%、50.0%、50.2%及50.2%。结果显示,DMSO、PG、EG 及G 均适宜用作成年小鼠生精小管的抗冻剂,最佳使用浓度均为50 mL/L~100 mL/L。完整睾丸冷冻后的细胞复苏率低于60%,仍需进一步研究。 相似文献
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7日龄小鼠生精上皮单细胞冷冻保存 总被引:12,自引:3,他引:12
在DMEM中添加10%小牛血清(NBS),并分别添加不同浓度的抗冻剂二甲基亚砚(DMSO)、丙二醇(PG)、乙二醇(EG)及甘油(G),对7日龄小鼠生精上皮单细胞进行冷冻保存,复苏后台齿蓝染色测定细胞复苏率。结果:当冻存液中DMSO分别为5%、10%、15%、20%时,细胞复苏率分别为77.1%、88.2%、86.5%、73.5%、65.5%,其中10%和15%DMSO组细胞复苏率最高,与其作各组间均差异极显著(P<0.01)。当冻存液中PG分别为5%、10%、15%、20%、25%时,细胞复苏率分别为66.2%、84.3%、72.1%、69.9%、47.5%,其中10%PG组细胞复苏率最高,与其余各组间均差异极显著(P<0.01)。当冻存液中EG分别为5%、10%、15%、20%时,细胞复苏率分别为64.9%、81.6%、60.9%、44.7%,其中10%EG组细胞复苏率最高,与其余各组间均差异极显著(P<0.01)。当冻存液中G分别为5%、10%、20%、25%时,细胞腹苏率均低于10%。10%DMSO组细胞复苏率与10%PG组和10%EG组之间均差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。结果表明,10%DMSO、10%PG及10%EG均适宜冷冻保存小鼠精原细胞,以及10%DMSO的冻存效果最好,而则不适宜冷冻保存。在含10%DMSO的冻存液中,二步慢速冷冻,液氮储存,37C水浴复苏小鼠精原细胞,是一种具有较高细胞复苏率的冷冻保存方法。 相似文献