小鹅瘟羊源高免血清的制备及比较

为制备高效价的小鹅瘟高免血清,试验采用从贵州某养鹩场病鹅分离的小鹅瘟野生强毒株,接种于9 d鹅胚,收集24 h以后死亡的鹅胚尿囊液,制备小鹅瘟病毒抗原,与弗氏佐剂混合均匀,多次免疫山革后,颈动脉一次性放血,离心收集血清即得到小鹅瘟羊源高免血清,以琼脂扩散进行血清效价测定,并与市售小鹅瘟鹅源高免血清进行保护率比较.结果显示,试验制备的小鹅瘟羊源高免血清抗体效价在1:8以王,对人工感染雏鹅的保护率为95%,而市售小鹅瘟鹅源高免血清的保护率只有85%.结果表明,本试验制备的小鹅瘟羊源高免血清具有效价高、成本低、安全性好等优点.     

羊抗人载脂蛋白A1多克隆抗体的制备及免疫佐剂优化

载脂蛋白A1(ApoA1)是预测冠心病(ASCVD)最有价值的指标之一.从人血浆中通过PEG沉淀法提取ApoA1,经过纯化和验证后,选择不同佐剂进行乳化,以不同免疫程序接种成年湖羊,制备羊抗人载脂蛋白A1多克隆抗体.通过琼脂扩散试验定期检测免疫后羊血清中抗人ApoA1多克隆抗体的效价,比较不同佐剂的免疫效果.结果显示,CV13佐剂与弗氏完全佐剂结合免疫后,抗体效价达到或超越弗氏佐剂组,明显优于ISA206佐剂.本研究结果可为国内医药企业自主制备高质量羊抗人ApoA1多克隆抗体用于ApoA1检测试剂盒提供技术参考.     

抗豪猪大肠杆菌卵黄抗体的制备

采用甲醛灭活的仔豪猪腹泻大肠杆菌为抗原,免疫健康140日龄桃源蛋鸡,刺激机体反应生成血清抗体和卵黄抗体,并采用平板凝集试验检测抗体效价,研究获得含有高效价血清和高免蛋的最佳条件。结果表明,双翼下静脉注射10~(12)CFU/mL大肠杆菌悬浮液的最佳免疫剂量为1 mL/次。在大肠杆菌悬液中添加等量的完全福氏佐剂对免疫应答加强的程度最高。强化免疫程序能大大加强产蛋母鸡的免疫应答强度,其中初免后,每周强化免疫1次,连续4次,效果最好。无菌检测及动物安全性试验表明,制备的卵黄抗体安全可靠。制备的卵黄抗体效价和血清抗体效价变化幅度小、稳定性好、持续时间久,为临床上防治仔豪猪腹泻大肠杆菌病提供了新的手段。     

大肠杆菌LTB增强PRRSV-GP5蛋白免疫反应的研究

以猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)主要中和表位所在的糖蛋白GP5为模式抗原,采用肌肉注射、皮下注射和滴鼻免疫方式免疫6～8周龄ICR小鼠,利用间接ELISA检测血清抗体,MTT法检测淋巴细胞增殖.结果表明:三免后GP5弗氏佐剂乳化组小鼠血清抗体的水平最高,LTB+GP5免疫组的抗体水平显著高于单独GP5免疫组,肌肉注射免疫组的抗体水平明显高于皮下注射组,滴鼻免疫组没有检测到特异性血清抗体;各GP5免疫组均能不同程度地诱导脾脏B淋巴细胞增殖,其中GP5弗氏佐剂乳化组、LTB+GP5肌肉注射和LTB+GP5皮下注射组B淋巴细胞增殖显著,除了GP5弗氏佐剂乳化免疫组外,其他各免疫组均无明显的脾脏T淋巴细胞增殖反应.     

抗小鹅瘟异源高免血清的研制和应用

用小鹅瘟病毒弱毒抗原加福氏完全佐剂后，分二次皮内多点注射免疫山羊、奶山羊，皮下注射免疫黄牛，结合二次静脉注射免疫小鹅瘟强毒，用琼扩进行效价测定，可获得琼扩抗体平均效价为１：１６—１：６４的抗小鹅瘟高免血清。将制备的三种动物的高免血清混合稀释至琼扩效价１：４、１：８，分别用于预防免疫１－１０日龄的雏鹅，获得保护率为９０％和９６．３％；用于治疗发病鹅群，治愈率达８４％和９２％。牛、羊抗小鹅瘟异源高免血清具有效价高、成本低、安全性好等优点     

抗豪猪大肠埃希菌卵黄抗体的制备及抑菌性研究

本试验采用甲醛灭活仔豪猪腹泻大肠埃希菌作为免疫抗原,翅静脉注射免疫140日龄桃源蛋鸡,使机体免疫应答生成血清抗体和卵黄抗体,利用平板凝集试验检测抗体滴度,研究获得含高滴度血清和高免鸡蛋的最佳条件。结果表明,翅静脉注射大肠杆菌液最佳免疫剂量是每次1 m L,菌液浓度是1×1012m L-1。在大肠杆菌液中添加等剂量完全弗氏佐剂对免疫应答增强的程度最高。免疫强化程序能有效增强产蛋鸡的免疫应答强度,初免以后,每隔1天强化免疫1次,连续4次免疫,效果最好。体外抑菌性试验结果表明,制备的卵黄抗体对大肠埃希菌具有明显抑制其生长的作用,但是对沙门氏菌的抑制作用比较小。本研究制备的卵黄抗体滴度和血清抗体滴度变化幅度小、持续时间长、稳定性好,为临床上防治仔豪猪腹泻大肠埃希菌病提供新的手段。     

肠毒素型大肠杆菌F18菌毛对产蛋鸡免疫的原性

提取猪源肠毒素型大肠杆菌(ETEC)标准株和临床分离株F18菌毛,并制备弗氏佐剂苗,分别免疫产蛋母鸡后用间接ELISA法定期检测母鸡卵黄抗体和血清抗体效价.结果表明:无论标准株还是分离株,F18菌毛对产蛋鸡均具有良好的免疫原性,卵黄抗体效价最高可达1∶25600,血清抗体效价高于卵黄抗体效价,最高可达1∶51200.     

胶体金作为免疫佐剂的初探

利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，经扫描电镜观察，粒径大小为15～20nm。以牛血清白蛋白为指示抗原，以小白鼠为模式动物，设立弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂作对比，探索胶体金作为免疫佐剂的可能性。试验结果显示，胶体金能够显著提高鼠体内抗牛血清白蛋白抗体的水平，其抗体水平高于弗氏不完全佐剂试验组，而略低于弗氏完全佐剂试验组。因此，胶体金有可能开发成为新一代免疫佐剂。     

His6免疫原的制备及免疫小鼠抗体效价检测

采用EDC一步法将His6多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备两种人工结合抗原KLH-His6和BSA-His6。将制备的KLH-His6作为免疫原,皮下分5点注射免疫6只健康6周龄雌性Balb/c小鼠;首次免疫取KLH-His6(50μg/只)与氟氏完全佐剂(FCA)充分乳化,每只免疫200μL,以后每间隔两周,同法进行第2,3次免疫,用氟氏不完全佐剂(FIA)乳化。每次免疫8 d后尾部采血,以BSA-His6为包被抗原检测抗His6抗体。结果表明,成功制备了His6免疫原,并免疫了小鼠;间接ELISA检测不同时期小鼠抗体效价最高达到1∶8 000,免疫小鼠的抗体效价水平整体呈上升趋势,为His6单隆抗体的制备奠定了基础。     

CFNCpG对BVDV1灭活抗原的免疫佐剂效应研究

分别用CFNCpG、弗氏完全佐剂、氢氧化铝胶与BVDV1灭活抗原配制成疫苗免疫家兔,于免疫后每间隔7d检测中和抗体变化,来探讨CFNCpG对BVDV1灭活抗原的佐剂效应。试验结果表明,CFNCpG单独作为佐剂应用7d可使抗体滴度达到4.4(log_2SN_(50)),14d可达到7.0以上;与氢氧化铝胶联合可使抗体滴度在21d达到7.0以上,其佐剂水平与弗氏完全佐剂相当。有望进—步研制成为BVDV1灭活疫苗佐剂成分。     

K88-K99-987P和K88-K99-F41佐剂苗对鸡免疫效果的比较

将猪致病性大肠杆菌K88-K999-87P和K88-K99-F412种混合菌液分别与不同的佐剂(弗氏佐剂、白油佐剂、氢氧化铝和磷酸缓冲盐溶液)混合制成8种灭活疫苗免疫产蛋鸡4次,经水稀释、絮凝澄清、盐析及亲和层析制备特异性卵黄免疫球蛋白(IgY),用SDS-PAGE检测抗体纯度和分子量、酶联免疫吸附实验(ELISA)测定抗体滴度。结果表明,与氢氧化铝乳胶苗和水苗相比,弗氏佐剂苗和白油苗均能诱导并产生稳定、高活性卵黄抗体,免疫蛋鸡所制得抗体的滴度比未免疫蛋鸡分别提高32和16倍。IgY在温度低于60℃和pH值4~8时比较稳定,胃蛋白酶在不同pH下对IgY的活性影响显著。抑菌实验表明IgY能有效抑制大肠杆菌的生长。     

免疫方式对Iss抗体产生的影响

为获得抗大肠杆菌Iss蛋白的抗体,将纯化的GST-Iss蛋白分别免疫雏鸡及小鼠。结果显示,无免疫佐剂、弗氏佐剂免疫雏鸡所产生的Iss抗血清效价仅为1∶100,氢氧化铝佐剂免疫小鼠所产生的Iss抗血清效价为1∶60 000。Iss融合蛋白采用氢氧化铝佐剂免疫小鼠,可获得更强的体液免疫应答,抗体效价更高。     

旋毛虫成虫可溶性抗原对猪的免疫保护作用研究

 首次在猪体系统地研究了旋毛虫成虫可溶性抗原免疫猪、预防猪旋毛虫病的效果。将纯净成虫经超声粉碎后，10000r/min离心30min，取上清液即为成虫可溶性抗原。将抗原按不同剂量与等体积弗氏完全佐剂乳化后按不同程序经腹腔免疫猪，免疫后不同时间攻击感染不同数量的肌幼虫。结果表明，成虫可溶性抗原可诱导猪产生坚强的免疫力，0.5mg组最高减虫率达98.21%，接近全保护。免疫力高低与免疫剂量大小、免疫程序及攻击感染的肌幼虫数量多少有关。免疫可使次代肌幼虫的感染性降低，免疫血清在体外可杀伤肌幼虫。     

免疫程序对肉鸡新城疫·禽流感(H5亚型)HI抗体消长规律的影响

[目的]为制定商品肉鸡新城疫(ND)、禽流感(AI)的免疫程序提供理论依据。[方法]在调查不同规模化养殖场免疫程序的基础上,制定商品肉鸡的免疫程序,分析不同免疫程序下ND和AI(H5亚型)HI抗体消长规律。[结果]1~7日龄商品肉鸡ND和AI的母源抗体均维持在免疫保护临界值之上。用ND疫苗免疫后,鸡群抗体水平不断下降,各免疫组均在24日龄最低。使用ND活疫苗和灭活苗的免疫组中ND抗体滴度比其他免疫组高。非免疫组AI(H5亚型)抗体滴度均随日龄的增加而逐渐下降,而免疫组24日龄后缓慢上升,38日龄达到免疫保护临界值。[结论]禽流感(H5亚型)灭活苗对商品肉鸡的免疫效果较差,应从免疫佐剂、抗原浓缩等方面进行新型商品肉鸡禽流感疫苗研究。     

Adjuvant-enhanced antibody responses in the absence of toll-like receptor signaling

Innate immune signals mediated by Toll-like receptors (TLRs) have been thought to contribute considerably to the antibody-enhancing effects of vaccine adjuvants. However, we report here that mice deficient in the critical signaling components for TLR mount robust antibody responses to T cell-dependent antigen given in four typical adjuvants: alum, Freund's complete adjuvant, Freund's incomplete adjuvant, and monophosphoryl-lipid A/trehalose dicorynomycolate adjuvant. We conclude that TLR signaling does not account for the action of classical adjuvants and does not fully explain the action of a strong adjuvant containing a TLR ligand. This may have important implications in the use and development of vaccine adjuvants.     

复方中药合剂对肉仔鸡疫苗免疫抗体效价的影响

为探讨自拟复方中药合剂对疫苗免疫后抗体效价的影响。以AA肉仔鸡为研究对象,重点考察复方中药合剂分别与新城疫(ND)Clone-30疫苗、ND油乳剂灭活苗和传染性法氏囊病(IBD)冻干苗联用后,肉仔鸡血清中ND、IBD抗体效价的变化规律。结果显示,试验组鸡血清中的ND和IBD抗体效价均高于对照组。说明,该复方中药合剂可增强肉仔鸡的疫苗免疫效果,具有显著的免疫增强作用。     

草鱼的体液免疫应答及抗体产生细胞

以草鱼出血病病毒和牛血清白蛋白（ＢＳＡ）为抗原妆种草鱼,比较了草鱼对两种抗原的体液免疫应答情况。结果显示,在接种了ＢＳＡ的草鱼中,１４ｄ后检测至抗体,其效价在２８ｄ达到峰值;而接种了出血病病毒的草鱼,在２１ｄ后检测到抗体,抗体效价在３５ｄ达到峰值。用ＦＴＴＣ－ＢＳＡ检测免疫ＢＳＡ草鱼的抗体产生细胞,探讨了抗体产生效价与抗体细胞数量的关系。     

几种佐剂免疫增强效应的比较研究

本研究以氢氧化铝胶、油佐剂、裂解乳酸菌,百白破三联苗(DTP)和左旋咪唑等5种佐剂,分别配合布氏杆菌猪二(S_2)号苗给豚鼠免疫。以淋巴细胞转化、E—玫瑰花环形成、凝集反应及布氏菌素皮肤变态试验等方法,3个月内进行跟踪性定期检测,考察所试各佐剂增强细胞免疫及体液免疫的作用及特点。试验结果表明,所试各佐剂对豚鼠的免疫应答均具有增强作用。其中,裂解乳酸菌对细胞免疫及体液免疫的增强作用均较理想,是一种具有发展前途的佐剂;百白破三联苗增强细胞免疫及体液免疫效果均佳,但其过敏原作用值得重视;油佐剂在提高抗体滴度,促进体液免疫应答方面的作用最强,明显优于所试的其它佐剂。