牛体外受精的精子获能方法对受精率和胚胎发育的影响

从屠宰场获得牛卵巢,采取卵母细胞,成熟培养用ＴＣＭ１９９＋犊牛血清;精子获能处理,以ＢＯ液＋肝素钠为基础,三个试验组分别添加咖啡因、蔡碱和已酮可可碱,受精经分别为８１．３％、８３．３％、８８．９％,均显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）,三个试验组的囊胚率分别为２０．４％、１９．３％、２１．２％。试验得出以下结论：囊胚率与受经成正比,添加已酮可要碱效果最好。另外组内种公牛成绩也有差异。     

牛体外受精的精子处理方法对受精率和胚胎发育的影响

从屠宰场获得牛的卵巢 ,成熟培养用 TCM1 99 犊牛血清 ;体外受精的精子获能处理 ,以 BO液作为基础液。 BO液 肝素钠为对照组 ,对照组中分别添加 Caffein、Theophelline和 Pentoxifylline3种黄嘌呤诱导体为试验组 ,每组分别处理相同的 3头种公牛冷冻精液。用醋酸 Orcein染色 1 h检查受精精况。结果表明 ,平均受精率试验组均高于对照组 ( P <0 .0 1 ) ;DAY8平均囊胚率 ,Caff、Theo、Pent组分别为 2 0 .4 %、1 9.3 %、2 1 .2 %。 3种黄嘌呤诱导体中以 Pentoxifylline的效果最好     

小鼠输卵管卵卵龄对体外受精影响初探

本文用昆白小鼠不同卵龄的卵子作体外受精试验，结果表明，新排出的卵细胞尚未成熟，排卵后１－２小时基本成熟，３－４小时充分成熟，５小时后虽有较高受精率，但受精卵继续培养１０小时，大部分退化。     

影响鸡卵受精率因素的探讨

１营养因素据任泽林报道，种鸡缺乏蛋白质或维生素A、E等，则公鸡精子活力明显减弱，精子形成不全，精液产量下降，母鸡受精率明显下降约５％，产蛋率和孵化率下降。此时种蛋所孵出的小鸡易患脑软化症和肌肉营养不良症。所以要供给公、母鸡适当营养饲料，一般生产公鸡饲料，粗蛋白含量要求达到１８％以上，维生素A含量不少于４０００U／kg，E含量不少于１０U／kg。２管理因素２．１公母种鸡群要分别饲养管理，不可混养。公鸡要有充足的光照时间，经实验证明种用公鸡一天要给予１７个小时的光照，光照强度不低于６１x，这样可以使公鸡精子…     

去掉卵丘细胞或切开卵透明带对小鼠体外受精的影响

探讨了去掉小鼠卵子的卵丘细胞和人工切开透明带对小鼠体外受精的影响，结果表明，与卵丘卵母细胞复合体相比，用透明质酸酶去掉卵子的卵丘细胞后的体外受精率显著降低（分别为56％和12％－23％）；当人工切部分透明带后，卵子的体外受精率增至56％－875（P＜0．01）；与细胞质均质的卵子相比，细胞质不均卵子即使切开透明带也仅有19％－22％的卵子受精。结果表明，用透明质酸酶去掉小鼠卵子的卵丘细胞后，选择细胞均质的卵子并人工切开透明带，可提高小鼠的体外受精率。     

牛不同直径卵泡内卵母细胞体外受精后的卵裂率和染色体异常分析

将不同直径牛卵泡内卵母细胞体外成熟培养22h后，对其体外受精后的卵裂率，胚胎发育速度和胚胎染色体异常发生率进行了研究。结果表明，体外受精后48h，直径3－6mm卵泡内卵母细胞外受精后的卵裂率明显高于直径1－2mm和7－10mm卵泡内卵母细胞体外受精后的卵裂率（P＜0．05）。体外受精后48h，直径3－6mm包泡内卵母细胞体外受精后的胚胎的发育速度明显快于直径1－2mm和7－10mm卵泡组胚胎（P＜0．05）。通过对不同卵裂期胚胎的染色体标本分析表明，直径1－2mm卵泡内卵母细胞体外受精后的胚胎染色体异常发生率明显高于直径3－6mm卵泡组（P＜0．05），但与直径7－10mm卵泡组之间无显著性差异。     

不同活性物质对精子运动性及受精率的影响

在处理牛体外受精的精子时分别添加咖啡因、茶碱和己酮可可碱三种黄嘌呤活性物质，在提高精子运动性方面，以己酮可可碱成绩较高，随着时间的延长茶碱成绩较高，但是试验组和对照组差异不显著。在受精率方面，除添加己酮可可碱与对照组有显著差异外，其它均无显著差异。虽然不同种公牛的精子运动性存在差别，但受精率没有显著差异。     

牛精子染色体制备及影响因素探讨

用去透明带金黄地鼠卵异种体外受精技术制备了牛精子单倍染色体。冻精复苏、洗涤、获能用 Ｈａｍ  Ｆ１０ 和 Ｒ Ｐ Ｍ Ｉ１６４０ 为主的混合培养基,辅以亚牛磺酸、肾上腺素,１０ μｍ ｏｌ／ Ｌ 钙离子载体（ Ｉ Ａ）处理牛精子 １２～１５ ｍ ｉｎ,诱导获能。异合卵用 Ｔ Ｃ１９９ 培养,以鬼臼毒素和长春花碱阻断原核融合和纺锤体形成,其浓度为常规浓度的 ２ 倍,在第 １ 次卵裂中期制备染色体。结果显示穿卵率达 ８３８％ ,可分析精子染色体核型成功率为 ４２４％ 。认为这是一种有效制备牛精子染色体的方法,并对其影响因素进行了探讨。     

牛卵泡卵体外成熟及其受精能力的研究

本试验主要研究了牛卵泡卵体外成熟、体外受精及其受精过程的发生。从屠宰场收集800枚牛卵泡卵进行体外成熟培养,并用体外获能的精子体外受精。在用m-TCM199培养21、22、24、26、28h后,达到中期Ⅱ的卵母细胞比例分别为33.89％、74.16％、77.78％、86.67％、85.71％;25h后,如果继续培养,成熟的卵母细胞比例不再显著增加。卵母细胞的自身形态显著地影响其成熟效果,A、B、C级卵培养24h后分别有94.60％、55.43％、31.25％的卵母细胞达到中期Ⅱ。卵泡卵在体外滞留8h后,其成熟率(47.11％)明显地低于45min(77.92％)或4h(74.60％)。肝素和钙离子载体A 23187都能诱发牛精子获能,二者在受精效报上差异不显著(P>0.05),并且都有多精入卵现象发生。授精后6h精子进入卵内,精子入卵后2～3h头部膨大,6h后出现早期原核,最早发生卵裂是在授精后30h。     

In vitro Fertilization of Bovine Oocytes Exposed to Bovine Herpesvirus 1 (BHV-1)

Contents: Cumulus-oocyte complexes were matured for 24 hours in the presence or absence of bovine herpes virus-1 (BHV-1, 10⁶ TCID₅₀/ml), fertilized in vitro and then co-cultured on oviductal cells to the blastocyst stage. The percentages of oocytes which cleaved were 48% (n = 905) for oocytes matured in the presence of BHV-1, and 51% (n = 1004) for the control oocytes. Comparing BHV-1-treated to control, the percentages of cleaved oocytes which developed to the blastocyst stage were 29% and 31%, respectively (p > 0.05). Embryos produced from the experimental group of oocytes tested positive for BHV-1.     

没食子酸对黄牛卵母细胞体外成熟的影响

试验旨在研究没食子酸（gallic acid,GA）对黄牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,进一步优化黄牛卵母细胞体外成熟体系。在卵母细胞体外成熟液（M液）中添加不同浓度没食子酸（0、10、30、50、100 μmol/L）,成熟22~24 h后,统计卵丘扩展情况及卵母细胞成熟率;同时,对成熟的卵母细胞进行正常体外受精（IVF）,统计早期胚胎的分裂率、囊胚率、囊胚卵裂球数及卵裂球细胞凋亡率。根据试验结果,选择最优浓度,使卵母细胞在含该浓度没食子酸的成熟液中成熟24 h后,检测其细胞内的活性氧水平（ROS）和总谷胱甘肽（TGSH）含量。结果显示,M液中添加30 μmol/L没食子酸组卵丘扩展分值和成熟率显著高于对照组（0 μmol/L）（P<0.05）,其他处理组与对照组无显著差异（P>0.05）;成熟的卵母细胞体外受精后进行后续胚胎培养,其中10和30 μmol/L组的分裂率均显著高于对照组和100 μmol/L组（P<0.05）,50和100 μmol/L组分裂率较对照组也有所提高,但差异不显著（P>0.05）;早期囊胚率统计发现,与对照组相比,30和100 μmol/L能够显著提高囊胚发育率（P<0.05）,10和50 μmol/L浓度组则无显著差异（P>0.05）;与对照组相比,30、100 μmol/L没食子酸均能显著提高IVF胚胎的早期囊胚卵裂球数（P<0.05）;但囊胚卵裂球凋亡率与对照组无显著差异（P>0.05）;对卵母细胞内活性氧和总谷胱甘肽含量检测时,发现30 μmol/L没食子酸可显著降低细胞内活性氧水平（P<0.05）,且显著提高总谷胱甘肽含量（P<0.05）。综上所述,在黄牛卵母细胞体外成熟液中添加适量的没食子酸能有效降低卵母细胞内活性氧水平,提高总谷胱甘肽含量,进而提高卵母细胞成熟的质量及其后续IVF胚胎发育能力。     

开放式拉长细管冷冻法对牛卵母细胞体外受精后发育的影响

在常规牛体外受精(IVF)技术的基础上,分别采用开放式拉长细管 (OPS,open pulled straw)法和细管法对未经成熟培养的卵丘卵母细胞(COCs)进行玻璃化冷冻,解冻后再进行体外成熟(IVM)、IVF和早期胚胎的体外培养(IVC)。结果表明,细管组和 OPS组的解冻后 COCs正常率分别为 59.4%±4.3%和 77.9%±4.1%(P<0 01);成熟率分别为48.2%±5.3%和66.0%±5.8%(P<0 01);卵裂率分别为18.5%±2.0%和32.8%±1.4%(P<0 01);8 细胞阶段的成功率分别为14.8%±2.5%和 24.8%±1.5%(P<0 01);桑椹胚发育率分别为 0 和5 3%±1.1%,明显低于未经冷冻的鲜卵组(21.0%±3.8%;P<0 01);囊胚发育率分别为0和4.0%,明显低于鲜卵组(P<0 01)。说明OPS玻璃化冷冻法可以使未经成熟培养的牛 COCs冷冻后获得桑椹胚和囊胚,但桑囊胚发育率仍较低,方法有待改进。     

两种方法对牛体外受精及体外发育的影响

本研究包括２个试验。试验１，采用由多种大分子物质组成的生物试剂Ｐｅｒｃｏｌ做成离心梯度，离心处理精液获得较高活率的精子。将其用于卵母细胞的体外受精，在使用４５μＬ大小的受精滴及２×１０６个／ｍＬ的最终受精精子浓度时，加入２０个或４０个卵母细胞，二者均获得较高的分裂率（％）８９．０±５．０、８８．１±３．８及囊胚率（％）５１．０±７．０、４６．３±１６．７。试验２，为了更接近胚胎在母牛体内发育的实际状态（动态），采用一种新的方法即将摇床振动培养引入牛早期胚胎的体外发育阶段，以期提高胚胎发育质量。结果表明，在早期胚胎基数及环境因素完全一致的前提下，振动培养组的囊胚发育率（％）及囊胚卵化率（％）分别为６１．１±１２．２、８２．６±６．８，而常规的静置培养组为６７．４±６．３、８８．０±７．４，方差计算表明二者无显著差异（Ｐ＞０．０５）。     

牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术

文章从卵母细胞的来源、精子体外获能、卵母细胞体外成熟、体外受精和体外受精早期胚胎培养五个方面综述了牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展.同时指出了影响精子体外获能的因素、影响卵母细胞成熟培养的因素、体外受精存在的问题及解决办法等.并且对影响该技术的主要因素进行了系统分析.     

牛的体外受精技术研究进展

本文阐述了体外受精技术在牛胚胎工程和育种研究中的意义,介绍了牛体外受精技术的研究历史和目前的研究进展,对牛IVF技术的技术指标现状及经济效益进行了评估,并就牛的体外受精技术当前研究存在的问题作了评述,对其前景做了展望。     

不同收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

试验旨在研究不同卵母细胞收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及体外受精的影响。以黄牛为研究对象,采用两种方法（抽卵法和割卵法）抽取卵泡中的卵母细胞,比较两种方法获取的卵母细胞成熟率,结果发现,抽卵法获得的卵母细胞成熟率显著高于割卵法（P<0.05）。将获取的卵母细胞分为4组：A组（对照组,只添加基础成熟培养液）、B组（基础成熟培养液+200 μmol/L半胱氨酸）、C组（基础成熟培养液+20 μg/mL肝素钠）、D组（基础成熟培养液+200 μmol/L半胱氨酸+20 μg/mL肝素钠）,结果发现,D组的卵母细胞成熟率显著高于A、B、C组（P<0.05）,B、C组间卵母细胞成熟率无显著差异（P>0.05）,但两组卵母细胞成熟率均显著高于A组（P<0.05）;A组卵母细胞卵裂率均显著低于B、C、D组（P<0.05）,B、C、D组间卵母细胞卵裂率无显著差异（P>0.05）;D组囊胚率显著高于其他3组（P<0.05）。结果表明,抽卵法获得卵母细胞效率显著高于割卵法,肝素钠及半胱氨酸对黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精都有促进作用,且同时添加两种物质对体外成熟的效果更佳。