间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞IBRS－2增殖猪伪狂犬病病毒（PRV）鄂A株，病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇（Mr20000）浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清IgG免疫家兔，HRP村记撮的兔抗猪IgG，制备出高效价的酶标抗体，酶标抗体工作浓度为1：50000；经各种条件的选择，建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为39.2mg/L，血清最佳稀释度为1：20，与猪细小病毒、猪、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应，与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清呈阴性反应；与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与美国进口的PRV抗体检测ELISA诊断试剂盒检测结果比较，45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100％。表明建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。     

重组M蛋白-乳胶凝集试验检测PRRS病毒血清抗体的研究

利用纯化的 PRRS病毒重组 M蛋白致敏乳胶制成乳胶抗原 ,成功地建立了一种检测 PRRS病毒血清抗体的乳胶凝集试验 (L AT)诊断方法。用制备的乳胶 M抗原分别检测猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪弓形体病、猪衣原体病、猪乙型脑炎阳性血清 ,结果均为阴性 ,无交叉反应 ,说明建立的 L AT方法具有良好的特异性。用建立的乳胶凝集试验方法与国外IDEXX公司 PRRS病毒抗体检测试剂盒同时对 76份猪血清样本进行检测 ,结果表明建立的 L AT方法的特异性和敏感性均为 95 % ,两种方法的总符合率为 87% ,检出率基本一致。研究结果表明 L AT方法具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强、价格低廉且可用于现场检测等优点 ,是一种适合基层兽医单位用于 PRRS病毒血清抗体检测的新方法     

乳胶凝集试验诊断猪囊虫病

采用新鲜痘猪囊内液体，离心，取上清作为抗原原液，加乳胶颗粒，经处理，制成致敏原。分别同患猪血清和脑脊液标本，应用乳胶玻片凝集反应和补体结合试验，检查赤峰地区部分养猪场、肉类联合加工企业采取的371份患猪血清和138份脑脊液，诊断猪囊虫病。以待检血清出现“ ”以上凝集者，对照不凝集判为阳性。通过试验，两者的符合率为86.9%（血清），94.7%（脑脊液）。     

乳胶凝集试验与血清中和试验检测猪伪狂犬病血清抗体的 …

应用血清中和试验（ＳＮＴ）和伪狂犬病乳胶凝集试验（ＬＡＴ）诊断试剂盒对两种伪狂犬病是性血清、伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）高兔血甭及６０份被检猪血清进行了ＰＲＶ抗体效价测定和相关性分析,两种方法测得的抗体效价之间呈强相关性（ｒ＝０．９６）,且ＬＡＴ效价比ＳＮＴ一般高出一个滴度;能干为自３５个猪场的４１４份猪血清进行了ＰＲＶ抗体检测,并与ＳＮＴ检测结果进行了对比,结果在ＳＮＴ检测为阳笥的１７１份血清中,ＬＡ     

应用乳胶凝集法诊断猪囊虫病的研究

自赤峰地区部分养猪场、肉类联合加工企业采取371份患猪血清、138份脑脊液，用乳胶凝集试验诊断猪囊虫病。用无菌注射器抽取新鲜囊虫病痘囊内液体，经4000转/分离心沉淀10分钟，吸取上清作为抗原原液，与一定浓度的乳胶颗粒经适当处理，制成致敏原，分别同患猪血清和脑脊液标本应用乳胶玻片凝集反应和补体结合试验作检查。以待检血清出现“ ”以上的凝集、而对照组不凝集判为阳性。通过试验，两血清的符合率为86.9%，脑脊液的符合率为94.7%。     

检测猪细小病毒血清抗体乳胶凝集试验方法的建立及初步应用

将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖,待出现细胞病变后,反复冻融,收获病毒液,用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定,选择致敏乳胶的最佳条件,制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与细小病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒,而与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形体及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用所建立的细小病毒乳胶凝集试验（LAT）与血凝抑制试验检测了203份猪血清,其中血凝抑制抗体阳性为161份,阴性为42份,阳性率为79.31％;乳胶凝集抗体阳性为150份,阴性为53份,阳性率为73.89％,两种方法阳性符合率为93.16％,经统计学检验P＞0.05,两者差异不显著。结果表明,乳胶凝集试验可以作为临床上大量血样进行血凝抑制试验前的初筛,具有简便、准确的优点,在检测细小病毒（PPV）抗体上具有较好的应用前景。     

检测猪瘟抗体间接ELISA方法的建立及应用

用猪肾传代细胞PK-15增殖猪瘟病毒（CSFV）兔化弱毒苗株（HCLV），病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、浓缩后作为包被抗原。经各种条件的优化，建立了检测猪瘟血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原最佳包被浓度分22、28mg／L，血清最佳稀释度为1：40，与猪细小病毒、O型口蹄疫、猪衣原体阳性血清呈阴性反应，与HCV标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与标准阴性血清和临床未感染CSFV的猪血清呈阴性反应；用HI和本EI。ISA方法检测94个猪厂送检血清1455份。其中血清稀释液中不含PEG6000的914份送检血清阳性率为83．7％，与HI符合率为96．6％，HI阳性率略高为85．7%；血清稀释液中含2％PEG6000的541份送检血清阳性率为88．72％，与HI符合率为97．3％，HI阳性率为88．17％。结果表明本试验所建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于临床猪瘟血清抗体的定性和定量检测。     

检测猪伪狂犬病病毒gE抗体红细胞凝集试验的建立及应用

以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)—猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病毒gE抗体的红细胞凝集试验。利用方阵滴定试验筛选出最佳抗原工作浓度为55μg/mL,血清最佳稀释度为1∶20,作用时间15 min,与猪瘟(CSF)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪乙型脑炎(JE)、猪布氏杆菌病(Brucellosis)阳性血清和PRV gE缺失疫苗接种的猪免疫血清均不出现红细胞凝集现象,与PRV标准阳性血清反应出现肉眼可见的凝集圈。与美国进口的PRV抗体检测gE-ELISA诊断试剂盒检测结果比较,50份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100%。红细胞凝集试验检测方法具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。     

应用ELISA间接法检测猪流行性腹泻抗体的研究

应用猪流行性腹泻病毒(PEDV)吉(J)毒株猪胎肠单层细胞培养物,以冻融法制备抗原,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法检测PED抗体的方法。对30头份经直接免疫荧光技术证实的PED病猪群血清测定,97％为阳性;检测32头份无PED猪场猪血清,93％为阴性。对1份PED“华毒株”,1份“川毒株”以及3头份“吉毒株”PED免疫血清测定,均为阳性。对猪传染性胃肠炎血清、猪轮状病毒病血清、疑似猪血球凝集性脑脊髓炎血清、鸡传染性支气管炎血清及猪梭菌性肠炎血清共16头份检测均为阴性,证明PEDV不与TGEV等其它3种冠状病毒血清发生交叉反应。89头份疫区猪血清的区域性试验阳性率为75％(67/89);对82头份屠宰猪血清测定,53％阳性。抗原包被板保存期试验表明,包被板在-20℃可保存2个月。     

应用地高辛探针诊断猪细小病毒病

利用地高辛标记的ＰＵＰ重组质粒探针,分别对了株猪细小病毒（ＰＰＶ）分离毒及ＰＰＶ－ＢＭ１株细胞培养物的ＤＮＡ抽提物进行斑点杂交,结果均为阳性,而对照的猪瘟产为狂犬 病病毒ＰＲＶ）、乙型脑炎病毒及ＰＫ－１５细胞为阴性;对７份自然感染病料进行处理,杂交结果为阳性反应,对照健康猪组织,猪瘟病料、猪伪狂犬病病料则为阴性。     

斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。     

应用重组猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白为抗原建立I—ELISA检？…

用重组杆状病毒表达的钎生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）Ｎ蛋白作为抗原，建立了诊断猪生殖和呼吸综合征（ＰＲＲＳ）的Ｉ－ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司试剂盒检测结果的符合率为９７．３％，与间接 光抗体试验９ＩＦＡ）的符合率为１００％。用该方法的检测国内猪血清８５份，阳性率为１８．８％；能检出ＰＲＲＳ疫苗免疫猪６ｄ的血清抗体，；与猪瘟、伪狂犬病、猪巴氏杆菌病、猪霉形体病阳性血清无交叉反应。     

猪乙脑乳胶凝集试验抗体检测试剂盒保存期试验

乙脑是经虫媒传播的人畜共患病毒病，该病引起种猪繁殖障碍，给畜牧业带来很大的经济损失，还严重危害人民身体健康，控制猪乙脑是防制乙脑、保障养猪业发展的重要措施，为此进行了猪乙脑乳胶凝集试验的研究，并在此基础上通过组装乙脑乳胶抗原、乙脑阳性血清、乙脑阴性血清和稀释液，研制出猪乙脑乳胶凝集试验抗体检测试剂盒，猪乙脑     

猪伪狂犬病病毒gE抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物,以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,制作检测猪伪狂犬病毒gE抗体的双抗原胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为17.6μg,检测线诊断抗原最佳标记量为1.76μg,血清最佳稀释度为1∶10,作用时间15 min,与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪布鲁菌(Brucella)阳性血清和PRVgE缺失疫苗接种的猪免疫血清检测线均不出现红色条带,与PRV标准阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简单,肉眼于15 min内可判定结果;试纸条在室温保存6个月,其特异性和敏感性没有明显变化;与美国IDEXX和法国LSI gE-ELISA抗体检测诊断试剂盒检测结果比较,1 164份猪血清的符合率均为90.55%。制备的胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。     

科技前沿

猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法的建立用纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的gB-ELISA方法。最佳反应条件为:抗原包被浓度为3.15微克/毫升,侍检血清稀释度为l:40。该方法对猪圆环病毒病、猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征(猪蓝耳病)、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和SPF猪阴性     

规模猪场猪伪狂犬病的诊断实例

天津某规模猪场发生妊娠母猪流产、产死胎及部分仔猪发病的情况,为确诊病原,分别对流产胎儿的组织和母猪血清进行了实验室检测。流产胎儿的组织经PCR或RT-PCR检测,猪伪狂犬病毒(PRV)为阳性,猪圆环病毒(PCV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为阴性。经猪伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测胎儿组织为阳性,检测母猪血清中猪伪狂犬gE抗体为阳性;用病毒的分离培养试验分离到了猪伪狂犬病毒,根据临床症状、抗原抗体检测及病毒的分离培养试验确诊该猪场存在猪伪狂犬病毒野毒感染。     

陕西省部分地区猪伪狂犬病血清学调查

以微量血清中和试验对采自陕西省汉中、勉县、南郑、城固及杨陵５个县（区）的７０份猪血清进行了伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）抗体检测，其阳性率为５．９％－６６．７％，平均阳性率为３２．８％（２３／７０），猪ＰＲＶ的感染在陕西省有逐年上升的趋势。     

乳胶凝集法诊断猪囊虫病的研究

采取371份患猪血清，138份脊液，用乳胶凝集试验诊断猪囊虫病。取新鲜痘猪囊内液体制成致敏原。分别同患猪血清和脑脊液标本应用乳胶玻片凝集反应和补体结合试验作检查。通过试验，两者的符合率 86.9%（血清）和94.7%（脑脊液）。     

酶标葡萄球菌A蛋白染色法用于猪囊尾蚴病诊断的初步研究

用自制的猪囊尾蚴头节“颗粒性抗原”,以HRP—SPA作为第二抗体,进行间接免疫酶染色诊断猪囊尾蚴病。检测61份猪囊尾蚴病血清,阳性59份,检出率为96.6％;健康猪血清69份、细颈囊尾蚴病和肺丝虫病猪血清各10份,均为阴性。此法简便易行,快速、准确,适于基层使用。     

用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验鉴别诊断猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的感染

用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对来自丹麦猪的１８０份血清进行了猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）和猪呼吸道冠状病毒（ＰＲＣＶ）感染的鉴别诊断，共检出了ＰＲＣＶ抗体阳性血清１０７份（５９．４％），ＴＧＥＶ抗体阳性血清０份。同时也检测了一些来自国内不同ＴＧＥＶ感染类型的猪场血清。该鉴别诊断方法在我国的建立和应用为从ＰＲＣＶ阳性国家进口猪的ＴＧＥ的检疫提供了一条有效途径。